免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的应用

目的探讨如何应用免疫组化和原位杂交双重标记技术,对辅助鼻咽癌的组织学诊断最有帮助。方法采用免疫组化和原位杂交双重标记技术检测30例鼻咽未分化型非角化性癌组织,并在同一切片上检测细胞角蛋白(CK)和EB病毒(EBER),同时观察两种指标在鼻咽癌细胞中的表达情况。结果 CK定位于鼻咽癌细胞胞浆内,呈棕黄色;EBER阳性反应定位于鼻咽癌细胞的细胞核上,呈蓝黑色。30例鼻咽未分化型非角化性癌癌组织均呈CK和EBER阳性,可看到鼻咽癌细胞同时表达CK和EBER,CK的棕黄色和EBER的蓝黑色对比清晰容易观察。增生的鼻咽上皮细胞CK阳性,而EBER呈阴性。结论 CK免疫组化与EBER原位杂交双标记技术有助于鼻咽癌的组织学诊断,可常规作为鼻咽癌病理诊断常用的辅助技术。双标技术以先做EBER原位杂交,后做CK免疫组化,显色剂分别用BCIP/NBT和DAB为好。

清热化湿方对脾胃湿热证患者胃黏膜AQP3、AQP4蛋白表达的影响

目的:探讨脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白(AQP3)、AQP4表达的关系俄语及中药清热化湿方的作用机制。方法:选择慢性浅表性胃炎患者68例,其中脾胃湿热证53例(湿重于热19例,热重于湿14例,湿热并重20例),脾虚证15例;另选正常健康体检者10例为正常对照组。脾胃湿热证患者予中药清热化湿方,并采用免疫组化方法检测入选者胃黏膜 AQP3、AQP4表达情况。结果:AQP3、AQP4在脾胃湿热证组的表达明显强于正常对照组(P<0.05);脾虚证组与正常组比较差异无显著性(P>0.05);各亚型之间呈湿重于热>湿热并重>热重于湿的趋势,但差异无显著性(P>0.05)。治疗后,脾胃湿热证组 AQP3、AQP4表达水平显著下降(P<0.01),与正常对照组及脾虚证组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:AQP3、AQP4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一,中药清热化湿方可能通过影响 AQP3、AQP4的表达而发挥治疗作用。

复方中药对裸鼠肝癌模型PTEN蛋白表达的影响

目的:探讨中药复方对间接原位移植肝癌裸鼠模型的干预作用。方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel- 7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型48只,造模后24 h随机分4组即中药复方低、中、高3个剂量组和FT207化疗组,4周后处死裸鼠,观察正常肝组织、肝癌旁组织、肝癌组织的组织形态情况,并用二步法免疫组织化学检测肝组织、肝癌旁组织、肝癌组织中PTEN蛋白的表达。结果:造模解剖证实获得100％的成功率,中位生存时间24 d (12～28d);瘤鼠肝脏PTEN蛋白表达强度癌旁组织最高,癌组织最低,正常肝组织次之(P＜0．01)。中药治疗相对于FT207化疗而言可明显增加PTEN蛋白的表达强度,中药组组间比较提示中剂量组效果最好(P＜0．05或P＜0．01),低剂量和高剂量差别不大。结论:癌旁组织中PTEN的高表达,有可能是机体的应激保护反应之一;适宜的中药浓度与抗癌效果有关;本方治疗肝癌的部分机制可能是通过增强PTEN蛋白表达来实现的。

脑胶质瘤组织中Survivin细胞核表达与预后的关系

背景与目的:凋亡抑制蛋白Survivin与肿瘤的侵袭、放化疗抵抗及预后不良有关。Survivin蛋白具有细胞核和细胞浆两种表达形式;最新研究显示survivin细胞核表达对判断肿瘤的预后可能有更重要的意义。本研究旨在探讨脑胶质瘤中Survivin细胞核表达与肿瘤临床病理学特征及预后的相关性。方法:应用免疫组织化学方法和组织芯片技术,检测Survivin在88例胶质瘤组织中的核表达情况,结合临床资料进行统计学分析。结果:88例胶质瘤中,有24例(27.3%)出现Survivin细胞核阳性表达,其中病理Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中的阳性率分别为12.1%(4/33)和36.4%(20/55)(P=0.013),而Survivin细胞核表达与患者的年龄(P=0.053)、性别(P=0.376)、治疗前卡氏评分(Karnofskyperformancestatus,KPS)(P=0.486)以及临床分期(P=0.359)均不相关。Survivin细胞核表达阳性组与阴性组的5年总生存率分别为22.7%、47.7%(P=0.005),3年无瘤生存率为分别为13.7%、39.5%(P=0.015),Survivin细胞核高表达组的中位生存时间为14.9个月,低表达组为20.2个月(P=0.089)。结论:Survivin细胞核表达与胶质瘤的病理学分级有关,而且是胶质瘤预后的不利因素。

常压高浓度氧致新生大鼠脑细胞凋亡及早期神经行为发育延迟

【目的】探讨常压高浓度氧对新生大鼠脑细胞凋亡、脑组织MBP(髓鞘碱性蛋白)表达和早期神经行为发育的影响。【方法】166只7日龄SD大鼠,随机分空气对照组和80%高氧模型组,新生鼠分别于开始吸氧后24、72 h被处死,TUNEL法观察不同高氧暴露时间大鼠脑组织细胞凋亡指数;高氧暴露72 h组在生后10、15 d,完成神经行为功能测试后,免疫组织化学染色观察脑组织MBP表达,空气组新生鼠处死日龄与高氧组相同。【结果】高氧2 h组脑细胞凋亡指数较高氧0h组(空气对照组)增加(P<0.01),随着吸氧时间的延长,细胞凋亡逐渐增多,以12～24 h组细胞凋亡最明显,72 h下降,但仍较0 h组增加(P<0.01)。高氧72 h组第10天、第15天MBP的表达较空气组低(137±5 vs.131±6,128±5 vs.122±5)(P<0.05)。高氧暴露72 h组新生大鼠听觉惊愕、负趋地性、前肢抓握反射、空中翻正的发育在一定日龄较空气对照组延迟(P<0.05)。【结论】常压高浓度氧可以引起新生大鼠脑细胞凋亡;抑制脑组织MBP的表达;导致新生大鼠神经行为发育延迟。

原发性软组织淋巴瘤7例及临床病理特征

【目的】探讨原发性软组织淋巴瘤的临床病理特征。【方法】对中山大学附属第一医院病理科1999年-2010年十年间淋巴瘤共3724例进行回顾性分析,通过临床资料、病理组织学、免疫组织化学染色发现7例为原发性软组织淋巴瘤并分析其临床病理特征。【结果】7例软组织淋巴瘤患者中5例女性,2例男性;年龄跨度23～76岁,平均年龄52.3岁。发生部位以肢体最常见,其中下肢3例、髂腰肌2例、背部和胸锁乳突肌各1例。肿瘤最大直径1.3～15cm,平均5.7cm。临床分期均为ⅠE期。组织学类型均为非霍奇金淋巴瘤。5例为弥漫大B细胞淋巴瘤,非特殊型(71.4%,5/7);外周T细胞淋巴瘤,非特殊型和间变性大细胞淋巴瘤各1例。【结论】原发性软组织淋巴瘤中老年人多见。好发于肢体。组织学类型主要为弥漫大B细胞淋巴瘤。

复方中药对裸鼠肝癌模型的抗癌作用研究

目的:探讨复方中药对间接原位移植肝癌裸鼠模型的干预作用。方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型48只,造模后24 h随机分4组,即复方中药低(A)、中(B)、高(C)3个浓度组和FT207化疗组(D),4周后处死裸鼠,观察各组荷瘤裸鼠的生存时间、瘤体积、瘤指数、肝内转移情况等,并用二步法免疫组化检测肝组织、肝癌旁组织、肝癌组织中PTEN蛋白的表达。结果:四周时,中药组(A+B+C)总存活率为50.0%,高于化疗组0%(P<0.01);A组存活率虽高于D组,但无显著性意义(P>0.05);B组和C组生存率均明显高于D组(P<0.05或P<0.01)。中药组的瘤体积和瘤指数与化疗组相比无明显差异(P>0.05)。经中药治疗的癌鼠肝内转移少于化疗组癌鼠(P<0.05)。瘤体积与模型生存时间负相关,与脾指数正相关(P<0.01)。PTEN蛋白表达强度以癌旁组织最高,癌组织最低,正常肝组织次之(P<0.01)。中药治疗相对于FT207化疗而言可明显增加PTEN蛋白的表达强度,中药组组间比较提示中浓度组效果最好(P<0.05或P<0.01),低浓度和高浓度差别不大(P>0.05)。结论:本方能延长实验癌鼠的生存时间,减少癌灶的肝内转移,肿瘤体积过大是瘤鼠的主要死因,其治疗肝癌的部分机制可能是通过增强PTEN蛋白表达来实现的。

IgA肾病的病理特点及类型

【目的】探讨 IgA 肾病的病理特点及类型。【方法】肾穿活检病例分别作免疫萤光、常规光镜和电镜观察。统计临床及病理特点。【结果】本组 IgA 肾病共634例,占同期肾穿病例的17.6%。平均年龄29.1岁。88.4%的病例发生在10～49岁。临床上以血尿为主诉的仅占40.3%。IgA 肾病病理分类为:①正常肾小球55例,占8.7%;②系膜增生型333例,占52.5%;③进行性硬化型92例,占14.5%;④局灶性病变146例,占23.1%;⑤其他类型8例,占1.3%。【结论】①IgA 肾病诊断标准:临床上以无诱因血尿,血液免疫学 IgA 升高为主,部分病例亦可或/和合并蛋白尿。病理学上以系膜区大量 IgA 沉积为主要特征,有时亦可合并基底膜上沉积。②IgA 肾病的病理学类型是多样性的。

酶联免疫吸附检测法在血清学诊断鼻咽癌中的应用

目的:探讨和评价4种常用的EB病毒抗体及其二联组合检测在酶联免疫吸附法(ELISA)辅助诊断鼻咽癌中的价值,以期进一步提高鼻咽癌的血清学诊断水平,并探讨单独检测1种EB病毒抗体时以何者为优良,以及采用何种组合检测两种抗体更合适。方法:收集广州地区195例病理学证实的新诊鼻咽癌患者和188例健康成人血清。应用EB病毒特异抗原(谷胱甘肽转移酶重组蛋白)为基础的4种ELISA,即EBNA1-IgA、EBNA1-IgG、Zta-IgA和Zta-IgG,检测血清中抗EB病毒的抗体水平。结果:单独应用1种ELISA、EBNA1-IgA的灵敏度(0.8513)和特异度(0.8511)最高。Zta-IgG和Zta-IgA的灵敏度和特异度分别为0.8359和0.8351以及0.8103和0.8185。EBNA1-IgG的灵敏度和特异度最低,分别为0.6974和0.6968。无论哪两种ELISA的组合,其特异度和阳性预测价值可分别达到0.9255和0.9032以上。EBNA1-IgA和Zta-IgA组合的优势比和阳性似然比(分别为50.6263和14.9875)最高;EBNA1-IgA和Zta-IgG组合的优势比和阳性似然比(分别为37.0909和11.9214)次之。结论:在单独应用ELISA法血清学诊断鼻咽癌的4种EB病毒抗体中,以EBNA1-IgA为最佳,其次是Zta-IgG。2种ELISA组合应用将明显地提高血清学诊断鼻咽癌的价值。在临床实践中以EBNA1-IgA与Zta-IgA或Zta-IgG的组合为宜。

原发与继发性胶质母细胞瘤中survivin表达及其意义

目的探讨survivin蛋白在原发与继发性胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)中的表达及其临床病理学意义。方法分别应用免疫组化和TUNEL方法,检测56例GBM(30例原发和26例继发)中survivin的表达和细胞凋亡情况,比较survivin在原发与继发性GBM中的表达差异;分析survivin表达与GBM临床病理学参数之间的相关性。结果56例GBM中,原发GBM中83%(25/30例)呈survivin阳性,继发性GBM中仅46%(12/26例)呈阳性,二者差异有显著性(P<0.01)。在15例配对的继发性GBM与其初发的低级别胶质瘤中,survivin的表达基本一致,7例survivin阳性表达的继发性GBM,其对应的7例低级别胶质瘤中,有6例同时出现survivin阳性;而且多数(4/5例)由间变性胶质瘤(III级)发展而成的继发性GBM出现了survivin的阳性表达,其阳性率明显高于由Ⅱ级胶质瘤演变而成的继发性GBM(3/10例)。另外,大多数(80%)瘤体直径>5cm的GBM呈survivin阳性,并多表现为低的细胞凋亡指数。结论Survivin的阳性表达可能通过其抗凋亡效应,在绝大多数原发性GBM的发生、发展中起了十分重要的作用,但可能只涉及部分继发性GBM的恶性演变;在继发性GBM发生、发展中,survivin阳性表达可能与其初发胶质瘤的病理级别有关。

软组织恶性孤立性纤维性肿瘤2例

例1，男性，65岁，因腹膜后巨大肿瘤4个月余入院。查体：各项体检无明显阳性特征，无畏寒、发热、恶心、呕吐，精神睡眠可，大小便正常，体重下降5kg。CT示：腹膜后可一大小15cm×15cm×10cm肿物，肿物密度不均匀，

改良Giemsa法和硼酸美蓝法检测幽门螺杆菌感染的临床比较

目的探讨改良Giemsa法和硼酸美蓝法在检测胃幽门螺杆菌(Hp)感染中的应用价值。方法收集80例慢性浅表性胃炎及胃溃疡患者,分别采用改良Giemsa法和硼酸美蓝法检测胃粘膜Hp,以Hp菌培养和C13呼气试验联合检测结果为Hp感染标准,比较两种检测方法对Hp检测的应用价值。结果以Hp菌培养和C13呼气试验联合检测结果为对照,改良Giemsa法检测Hp感染的特异性为100%,敏感性为96.2%(50/52),诊断符合率为97.5%(78/80);硼酸美蓝法检测Hp感染的特异性为100%,敏感性为88.5%(46/52),诊断符合率为92.5%(74/80)。两种方法检测Hp感染的特异性、敏感性及诊断符合率均较高,特异性和诊断符合率比较差异无显著意义(P>0.05),但改良Giemsa法的检测敏感性明显高于硼酸美蓝法(P<0.05)。结论改良Giemsa染色法和硼酸美蓝法具有较高的Hp感染检测特异性和诊断符合率,均为比较理想的常规Hp检测染色法。

卵巢上皮性肿瘤中cyclinD1和Ki-67蛋白检测及其临床意义

目的探讨卵巢上皮性肿瘤中cyclinD1和Ki-67蛋白表达及其临床意义。方法运用免疫组化方法,检测cyclinD1和Ki-67蛋白在30例卵巢腺癌、20例卵巢交界性肿瘤和80例卵巢癌中的表达情况,结合肿瘤的临床资料,分析其临床意义。结果cyclinD1蛋白在卵巢良性腺瘤、交界性肿瘤和卵巢中的阳性表达率分别为3%、25%、26%。Ki-67蛋白在交界性卵巢肿瘤的过度表达率为15%,在卵巢癌中为39%,而且与肿瘤Silverberg氏分级有显著的相关性(P<0·05),其中47%的G2/G3级的卵巢癌出现Ki-67蛋白过度表达,其过表达率明高于G1级的肿瘤(17%)。结论cyclinD1和Ki-67蛋白可以作为临床判断卵巢上皮性肿瘤良恶性有参考价值的分子标记;卵巢癌中Ki-67蛋白过度表达可成为评估肿瘤细胞恶性程度的指标之一。

Warthin-Starry染色在胃幽门螺旋杆菌诊断中的应用

目的研究Warthin-Starry(W-S法)染色法在胃幽门螺杆菌诊断中的作用。方法利用临床诊断为慢性胃炎的27例活检组织W-S法进行病理诊断,同时标本送中山大学肿瘤医院病理科用相同方法进行复检。结果共检测27例慢性胃炎中7例有HP感染,阳性率是25.9%,与中山大学肿瘤医院病理科行同种方法(W-S法)检测结果相符。结论 W-S法是一种经典的特染方法,适合在基层医疗单位病理室作为常规的检测方法。

子宫腺肌症患者在位与异位内膜组织中HLA-G的表达及意义

目的:探讨子宫腺肌症(AM)患者在位与异位内膜中人类白细胞抗原-G(HLA-G)的表达情况及意义。方法:选择36例AM患者的在位与异位内膜组织为研究对象,以35例非AM患者的子宫内膜组织为对照。采用免疫组化二步法检测各组内膜HLA-G的表达情况。结果:在位与异位内膜组织HLA-G的阳性表达率均较对照组高(P=0.00060.05,0.0059),在位与异位内膜间HLA-G的阳性表达率以及阳性表达程度差异均无显著性(P=0.4577,P<0.05),且HLA-G的表达与月经周期无明显相关性。结论:AM患者在位与异位内膜中均可见HLA-G的异常表达,HLA-G可能在AM的发病中起重要作用。

重视标本固定以提高胃肠间质瘤的诊断质量

针对目前胃肠间质瘤诊断的临床和病理常规工作中普遍存在标本固定不足的问题，应该强调标本固定、免疫组织化学（免疫组化）和基因突变检测的规范化。笔者根据自己的工作经验．对固定不佳标本的免疫组化和C—kit基因检测的常规方法作某些调整．以改善或提高检测效果．这对参与胃肠间质瘤诊断工作的临床医生、病理医生以及免疫组化和基因检测实验室的工作人员有一定参考价值。

结直肠癌中P21-激活激酶1基因表达与扩增及其临床病理学意义

目的探讨P21-激活激酶1（PAK1）基因在结直肠癌（CRC）中的表达与扩增及其临床病理学意义。方法运用免疫组织化学（免疫组化）、荧光原位杂交和末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标记方法，检测PAK1基因在80例CRC和30例结直肠良性腺瘤组织芯片中的表达、扩增及其细胞凋亡情况。结果免疫组化结果显示，26％的结直肠良性腺瘤和62％的CRC出现PAK1蛋白过度表达。CRC中PAK1蛋白表达与肿瘤组织学分级、临床分期均有显著相关性（P〈0．05）。90％低分化（G3级）CRC中出现PAK1蛋白过度表达，显著高于中一高分化CRC（G1/2级）的51％；78％的临床晚期（Dukes C、D期）CRC组织呈PAK1蛋白过度表达，也显著高于临床早期（Dukes A、B期）的53％。PAK1蛋白在CRC中的表达与肿瘤细胞凋亡指数（AI）呈显著负相关（P〈0．05）。荧光原位杂交检测发现，只有3％的CRC出现PAKI基因扩增。结论PAK1蛋白过度表达可能在结直肠肿瘤的发生发展中起重要作用，而且与CRC的组织学和临床浸润表型密切相关，可作为判断CRC恶性程度与进展的新分子标记物之一。