早期糖尿病肾病患者25-羟维生素D及相关指标水平变化

目的观察早期糖尿病肾病(DN)患者血清25-羟维生素D、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及尿白蛋白肌酐比(UACR)变化情况。方法将2020年9月至12月在西安医学院第一附属医院肾内科住院的早期DN患者67例设为DN组。选择同期在西安医学院第一附属医院健康体检者74名设为对照组。收集两组人员的身高、体重指数和血压等一般情况,测定其空腹25-羟维生素D、IL-1β、TNF-α水平,UACR及糖脂代谢指标;分析维生素D与IL-1β、TNF-α、TC、TG水平及UACR的关系。结果DN组体重指数、空腹血糖、糖化血红蛋白水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DN组TC、TG、LDL-C及UACR水平高于对照组,HDL-C水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DN组25-维生素D水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DN组IL-1β、TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。DN组血清25-羟维生素D水平与IL-1β、TNF-α水平及UACR呈负相关(r=-0.647、-0.783、-1.621,P<0.05)。结论早期DN患者体内血清25-羟维生素D水平较正常人降低,其水平与患者炎症因子及蛋白尿等危险因素有相关性。

丙泊酚保护脑缺血再灌注损伤可能与缝隙连接功能的抑制相关

目的探讨丙泊酚对脑缺血再灌注损伤的保护作用与缝隙连接的关系及其可能机制。方法 70只雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、丙泊酚低剂量(P25,25 mg/kg)组、中剂量(P50,50 mg/kg)组、高剂量(P100,100 mg/kg)组、甘珀酸(CBX)干预缺血再灌注(I/R+CBX)组和甘珀酸干预丙泊酚高剂量(P100+CBX)组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,脑缺血2 h,再灌注24 h;采用Longa's法对大鼠进行神经行为学评分;TTC染色法检测脑梗死体积的变化;Western blot法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)、蛋白激酶C(PKC)以及凋亡相关因子Bax、Bcl-2的蛋白表达变化。结果与缺血再灌注组相比,除丙泊酚低剂量组外,丙泊酚中、高剂量组神经功能缺损评分和脑梗死体积百分率均明显降低,且高剂量组效果更佳;甘珀酸可以进一步增强丙泊酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。Western blot结果显示,与sham组相比,I/R组Cx43蛋白表达以及Bax与Bcl-2比值显著增高,而PKC蛋白表达明显降低;丙泊酚高剂量组较I/R组Cx43蛋白表达及Bax与Bcl-2比值明显降低,PKC蛋白表达显著增多;且甘珀酸可以使丙泊酚的这一作用增强。结论丙泊酚预处理可减轻I/R损伤,其机制可能与通过PKC信号通路抑制缝隙连接功能及降低Bax/Bcl-2的比值有关。

Smad3通过p38/MAPK信号通路调控细胞自噬及凋亡促进胰腺癌进程

目的观察Smad3对胰腺癌细胞Panc-1、BxPC-3凋亡、自噬的影响,初步探讨Smad3表达水平影响胰腺癌进程的可能机制。方法基于GEPIA2数据库进行生物信息学分析,探究Smad3与胰腺癌发生、发展及生存的相关性。利用CRISPR/Cas9系统以及短发卡RNA(ShRNA)敲除及敲减Smad3的表达,采用Real-Time quantitative PCR(qPCR)和Western blot检测细胞中Smad3 mRNA和蛋白水平变化。实验组转入ShSmad3-1、ShSmad3-2序列,将不靶向任何基因的Sh-Scramble序列作为对照组(Scr)。将转入Smad3 guide RNA(gRNA)序列作为CRISPR/Cas9的实验组,转入空载质粒的作为CRISPR/Cas9的对照组。采用Western blot检测细胞中LC3、p62、p38以及p-p38蛋白变化情况,同时在敲减Smad3的胰腺癌细胞用PI-Annexin V试剂盒染色并进行流式分析。利用pLVX-Smad3质粒进行回补实验,并用p38抑制剂SB203580处理细胞检测相关蛋白的变化情况。结果GEPIA2数据库及临床标本分析结果显示,Smad3在胰腺癌组织中高表达(P<0.05)。在胰腺癌细胞BxPC-3中转入ShSmad3-1、ShSmad3-2后,Smad3的mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.05)。同时在Panc-1中转入Smad3 guide RNA筛选到2个Smad3敲除细胞系。与对照组相比,敲减Smad3胰腺癌细胞凋亡显著增加(P<0.05)。Western blot实验发现:Smad3敲减及敲除后,p-p38的蛋白水平显著增加(P<0.05),LC3、p62水平显著降低(P<0.05)。进一步通过回补实验及利用SB203580处理胰腺癌细胞,发现p62、LC3蛋白水平能回复(P<0.01)。结论干扰Smad3促进胰腺癌细胞过度自噬,进而导致细胞凋亡增加,可能与激活p38/MAPK信号通路有关。

DHEA和EPEA对小神经胶质细胞和星形胶质细胞的体外作用研究

目的探究二十二碳六烯酸单乙醇酰胺(DHEA)和二十碳五烯酸单乙醇酰胺(EPEA)在脊柱外伤后对小神经胶质细胞和星形胶质细胞的作用,旨在为中枢神经性疼痛治疗提供理论依据和实验基础。方法对DHEA和EPEA采用同时给药和延迟给药两种方式,同时治疗分为control组(无血清培养液)、100 ng/ml LPS组(100 ng/ml LPS),DHEA组(8μmol/L DHEA及LPS),EPEA组(8μmol/L EPEA及LPS),延迟治疗Delay control组加入无血清培养液,Delay LPS组、Delay DHEA组、Delay EPEA组分别加入100 ng/ml LPS进行激活,小神经胶质细胞激活16 h、星形胶质细胞激活24 h后加入无血清培养液到Delay LPS组,分别加入8μmol/L DHEA及8μmol/L EPEA到Delay DHEA组和Delay EPEA组,观察小神经胶质细胞形态变化、突起百分比、iNOS及GFAP表达。结果与control组相比,LPS处理小神经胶质细胞和星形胶质细胞后细胞胞体变大,突起缩短(P<0.001),iNOS表达显著增加[(3.34±1.06)%vs(67.79±4.45)%,P<0.001],GFAP表达显著升高[(21.36±5.17)%vs(40.12±6.39%),P<0.001];经EPEA和DHEA同时、延期给药处理后细胞突起恢复(P<0.001),iNOS表达显著降低[(35.57±5.34)%,P<0.001],GFAP表达也显著下降[(23.12±4.26)%,P<0.001]。结论DHEA和EPEA在同时、延期给药两种处理下均能改变激活态小神经胶质细胞和星形胶质细胞的形态和状态。