口虾蛄繁殖周期及生殖细胞发育的研究

对大连市黑石礁海域口虾蛄Oratosquilla oratoria卵巢性腺指数的周年变化进行测定,对雌雄个体的生殖细胞发育进行了组织学观察。结果表明:3月,随着水温的升高,口虾蛄繁殖个体卵巢发育逐渐成熟,性腺指数上升,至6月达到最大值,7月,随着繁殖个体的排卵,性腺指数下降,至9月出现全年的最小值;口虾蛄1龄即可性成熟,每年产卵1次;雄性生殖细胞发育分为精原细胞期、初级精母细胞期、次级精母细胞期、精细胞期和精子期5个时期,雌性生殖细胞发育分为卵原细胞期、卵黄形成前期、卵黄形成期和成熟期4个时期。

放流三疣梭子蟹遗传多样性和贡献率初步研究

近年来我国沿海三疣梭子蟹自然资源明显下降,为恢复现有资源,辽宁省自2012年开始,连续实施了4年大规模人工放流工作。在目前的增殖放流中,为检测参与繁殖的三疣梭子蟹亲本和即将放流的子代间的遗传差异以及亲本对其子代的繁殖贡献率水平,利用10对具有丰富遗传多态性的微卫星分子标记,分别对9只三疣梭子蟹雌性亲本和179只即将放流的子代进行了遗传多样性分析及亲子鉴定。结果发现,子代的平均观测杂合度、平均期望杂合度和平均多态性信息含量数值均低于参与繁殖的雌性亲本,亲本和放流子代之间在观测杂合度、多态性信息含量参数方面并无显著差异(P>0.05),但期望杂合度遗传参数存在显著差异(P<0.05),子代的遗传多样性较雌性亲本呈下降的趋势。使用4个微卫星分子标记时,累积排除率≥0.998,亲子鉴定的准确率为56.98%;微卫星分子标记为6个时,累积排除率≥0.9999,准确率达到97.21%;当使用8个微卫星分子标记鉴定时,准确率达100%。同时发现,9只雌性亲本对子代均有贡献,最高为29.61%,最低为3.35%,不同亲本之间的贡献率存在显著差异(P<0.05)。研究表明,微卫星可以作为有效的标记手段用于三疣梭子蟹增殖放流遗传评估中。上述试验结果将为我国三疣梭子蟹增殖放流的科学发展提供基础资料。

盐度对口虾蛄仔虾摄食、存活和掘穴的影响

为研究口虾蛄（Oratosquilla oratoria）仔虾在人工养殖条件下的盐度适应性,作者分别实验分析了盐度突变和渐变对其累积存活率、摄食率和掘穴行为的影响。实验结果表明,仔虾盐度耐受能力较强,突变组的仔虾存活盐度为15～45,渐变组的仔虾存活盐度为5～54;仔虾的适宜盐度为21～33,24 h存活率在80%以上;盐度对口虾蛄的摄食影响较大,突变盐度为21～33时,仔虾摄食较为活跃,低于18或高于42基本不摄食;盐度渐变组摄食活跃范围为19～38,低于9或高于50基本不摄食;盐度突变对口虾蛄仔虾掘穴的影响显著,盐度突变至21和33时,掘穴时间极显著延长。本实验结果可以为口虾蛄的人工养殖和增殖放流提供参考和依据。

口虾蛄胚胎发育的研究

在室内控温条件下对口虾蛄Oratosquilla oratoria的胚胎发育过程进行了观察。结果表明:口虾蛄从产卵到初孵假溞状幼体,需要经历受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠期、膜内无节幼体期、膜内溞状幼体期6个主要时期;水温为(21±1)℃、盐度为29时,口虾蛄胚胎发育历时18 d;水温、洞穴、光周期、饵料等因素均能影响亲虾蛄抱卵和幼体孵化。

盐度对口虾蛄假溞状幼体存活和摄食的影响

在实验室条件下,观测了盐度对口虾蛄Oratosquilla oratoria Z9～Z11期假溞状幼体存活和摄食的影响。设置盐度骤变和渐变两组试验,骤变试验以27为基础盐度,将假溞状幼体直接放入盐度为51、48、45、42、39、36、33、30、24、21、18、15、12、9的海水中;渐变试验盐度分别从24和33开始,每隔12h降低(低盐渐变)和升高(高盐渐变)一次盐度值,变化幅度为1,直至口虾蛄假溞状幼体全部死亡。以体长为5.19～8.91 mm(平均体质量为0.058 g)的鲜活糠虾作为饵料。试验结果表明:当盐度骤变到18～36时,口虾蛄假溞状幼体比较适应,24 h时成活率在77.8%以上;盐度骤变情况下,24 h半致死盐度为15.94和41.13;假溞状幼体适应骤变盐度的低盐度和高盐度极限分别为12和48,适应渐变盐度的低盐度和高盐度极限分别为6和54;当盐度低于15或高于45时,口虾蛄假溞状幼体基本不摄食,盐度为27、30和33时,假溞状幼体的摄食量明显高于其它盐度组。综合考虑成活率和摄食两方面的因素,培育口虾蛄Z9～Z11期假溞状幼体的适宜盐度为27～33。

辽东湾海蜇数量变动的初步探讨

本文通过对辽东湾海蜇亲体数量与补充量,环境因子与海蜇相对数量之间关系的回归分析,认为径流量可能是影响辽东湾海蜇数量变动,特别是剧烈变动的主要因素。二者之间的关系可用抛物线拟合。根据8～10月的径流量,可以预测翌年辽东湾海蜇数量的变化趋势。

成体对虾的荧光标记研究

采用平均体长为9cm的日本对虾(Penaeus japonicus)为试验动物,用蓝色、红色和绿色荧光染料(Visible ImplantElastomer,VIE)荧光标记对虾。结果表明,用VIE标记后的3个试验组的日本对虾与对照组的日本对虾在生长发育等方面没有差异,试验组和对照组在对应的周存活率基本一致,各组对虾蜕皮正常。尽管荧光标记的残留率随着日龄的增加有所下降,但荧光标记的保持率为100%。3种颜色中的红色荧光标记效果最好,蓝色最差。

中国对虾荧光标记虾的大规模制作与养殖试验

以平均体长为2 cm以上的10 632只中国对虾(Fenneropenaeus chinensis),用红色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾,与10万只非标记的中国对虾在同一池塘养殖。结果表明,VIE标记对虾和非标记对虾经2-3个月的养殖后,在生长发育和成活率等方面没有差异。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为70%以上。红色VIE标记可以用于中国对虾的海洋增殖放流研究。

口虾蛄proPO基因全长cDNA的克隆与组织表达

口虾蛄是海湾底拖网渔业中具有重要经济价值的种类,分布广泛。其自然资源日渐衰退,人工育苗技术获得成功后,口虾蛄养殖过程中病害问题及其防治应引起足够的重视。为此,拟通过分子生物学手段研究口虾蛄免疫系统的核心酶——酚氧化酶(PO)的分子结构及该基因的组织表达,从而在分子水平上深入探究其免疫机理。采用反转录PCR(RT-PCR)与cDNA末端快速克隆(RACE)技术从口虾蛄血细胞中克隆了酚氧化酶原(O-proPO)基因,cDNA全长为2436bp,其中开放阅读框为2142bp,编码713个氨基酸。预测分子量为82446Da,等电点(pI)为8.78。该基因与Genbank上登录的斑节对虾、凡纳滨对虾、罗氏沼虾、短沟对虾、日本对虾proPO基因序列具有较高的同源性,分别为82%、76%、76%、72%、70%。序列分析表明O-proPO为proPO家族中的一个成员,其氨基酸序列中含有多个免疫调节作用位点。系统进化分析显示O-proPO与十足目种类的proPO为同一分支的2个亚群,而后于丰年虫的proPO形成一分支。O-proPO基因表达具有组织特异性,在血淋巴和肠中表达,但在血淋巴中表达量明显高于肠。

盐度对口虾蛄存活和生长的影响

在不同盐度下，对体重13～35g的口虾蛄Oratosquilla oratoria进行存活和生长试验。存活试验包括盐度突变试验和渐变试验，生长试验的盐度梯度设为24、28、32、36，每组放口虾蛄6只。结果表明，盐度对口虾蛄的存活及生长有较大影响，口虾蛄存活的盐度为20-40，适应盐度为24～36，生长的最适盐度为32左右。

口虾蛄幼体的早期形态发育特征

对大连沿海口虾蛄Oratosquilla oratoria在人工培育条件下幼体的发育过程及形态特征进行了观察。结果表明：在水温为23—26℃、盐度为36的条件下，口虾蛄从Z1期假蚤状幼体开始，历时33d出现第1期仔虾；大连沿海口虾蛄Z1期假蚤状幼体第2触角羽状刚毛数、Z4期假蚤状幼体第2触角羽状刚毛数及尾节侧小齿、中间小齿、亚中间小齿数及头胸甲长与日本口虾蛄存在差异。

幼体中国对虾荧光标记虾的制作

采用经过暂养,平均体长为2cm以上的中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)进行试验,用黄色、红色和绿色荧光染料(visible implant elastomer,VIE)制作荧光标记对虾。结果表明,对照组中国对虾与用VIE标记后7个试验组中国对虾在生长发育等方面没有差异,并且各组对虾蜕皮正常。尽管荧光标记的残留率随着虾体的生长有所下降以及分布的不均匀,但荧光标记的保持率为95%。3种颜色的荧光染料中,红色荧光标记的效果最好。

辽宁黄海北部沿海海蜇资源衰败原因的初步探讨

黄海北部大洋河口附近浅海水域,曾是我国北方海蜇(Rhopilema esculenta)主要产区之一。70年代初最高年产量达3000余吨,1975年后资源显著衰减,1983年以来,资源完全衰败。本文对黄海北部海蛰资源衰败的原因进行初步探讨。一、资料来源使用两类资料:一类是渔业统计资料。

盐度胁迫下口虾蛄Mn-SOD基因的表达分析

利用实时定量PCR技术,分析了Z9～Z11期口虾蛄Oratosquilla oratoria Mn-SOD基因在不同盐度胁迫下的表达情况.试验共设置8组,盐度分别为12.8、16.3、19.8、23.3、26.8（对照组）、30.3、33.8、37.3,各组均在盐度胁迫后的1.5、3、6、9、12、24、36、48、72 h取样.结果表明：在盐度胁迫时间为6、9、12、48、72 h时,各盐度组口虾蛄Mn-SOD基因的表达量总体上极显著或显著低于对照组（P＜0.01或P＜0.05）,且与对照组盐度差值小的23.3、30.3两个盐度组,Mn-SOD基因表达量总体上均高于极高盐度（37.3）和极底盐度（12.8）组,在胁迫时间为24、36 h时,除12.8、16.3两个低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量总体上极显著高于对照组（P＜0.01）;除极高和极低盐度组外,其余盐度组Mn-SOD基因的表达量均随着胁迫时间的延长总体上呈先降低再升高再逐步降低的变化趋势,盐度为12.8、16.3、19.8、23.3、30.3、33.8、37.3的各试验组,Mn-SOD基因最大表达量的时间点分别为6、12、24、24、24、24、24h.研究表明,各试验盐度组口虾蛄在72 h内对盐度胁迫的适应总趋势为不适应—最不适应—逐步适应—不适应.

皮口海域中国对虾生长特性的初步研究

为了解增殖放流后,黄海北部海域中国对虾Fenneropenaeus chinensis的生长状况,于2015年6—10月在黄海北部辽宁省皮口海域进行了6个航次的回捕调查,共采集样品1434尾,并对其生长指标进行测量分析。结果表明:皮口海域中国对虾体长和体质量呈幂函数关系,雌虾W=8×10^(-6)L3.0729,雄虾W=9×10^(-6)L3.0573;采用Von Bertallanffy生长方程对皮口海域中国对虾体长、体质量进行拟合,雌虾Lt=230.09[1-e-0.0098(t-29.54)]、Wt=144.87[1-e-0.0098(t-29.54)]3.0729,雄虾Lt=175.05[1-e-0.0151(t-34.73)]、Wt=65.98[1-e-0.0151(t-34.73)]3.0573;皮口海域中国对虾在生长过程中表现出雌、雄差异,前期雄虾体长生长速度快于雌虾,约74 d后,雌虾体长生长速度明显快于雄虾,雄虾体质量生长拐点出现在109 d前后,而雌虾则出现在144 d前后;与历史文献相比较,皮口海域中国对虾的生长系数k值较小,显示出生长速度可能较其他海区有减缓的趋势,但渐近体长和渐近体质量有增大趋势;皮口海域中国对虾摄食等级存在月份差异。本研究结果可为探讨大规模增殖放流后黄海北部现有中国对虾种群的自然状况及制定相关管理策略提供科学依据。

口虾蛄染色体核型分析及DNA含量

为了解口虾蛄Oratosquilla oratoria核型组成及DNA含量,以野生口虾蛄为材料,采用秋水仙素内注射法,取其肝胰腺组织经低渗和固定后,获得染色体标本,并对其染色体核型进行了分析,以鸡血细胞DNA为标准,采用流式细胞仪测定口虾蛄不同组织的DNA含量。结果表明:口虾蛄二倍体染色体数目为88,即2n=88,核型组成公式为2n=62m+12sm+14t,染色体总臂数(NF)为162;口虾蛄不同组织的DNA含量有显著性差异(P<0.05),各组织DNA含量从大到小依次为肌肉>精巢>卵巢>肝胰腺>血液,肌肉组织含量最高,为10.43 pg/2c,血液含量最低,为8.70 pg/2c,各组织DNA含量平均为9.61 pg/2c;以1 pg=978 Mbp计算,首次成功估算了口虾蛄基因组大小约为9398.58 Mbp。本研究结果可为口虾蛄种质资源保护及未来人工养殖研究提供基础资料。

大连海域口虾蛄资源遗传多样性的分析

采用RAPD方法对大连沿海野生口虾蛄Oratosqilla oratoria资源的遗传多样性进行分析。结果表明：20条引物平均每条扩增出12．1条带，共检测到位点242个，其中多态位点占67．8％，个体间遗传距离为0．2367—0．5402，平均遗传距离为0．3583；根据扩增结果构建反映品种间亲缘关系的UPGMA聚类图，24个个体可划分为两大类。

口虾蛄卵黄蛋白原(Vg)基因的初步研究

为研究口虾蛄Oratosquilla oratoria卵黄蛋白原（vitellogenin，Vg）基因，利用cDNA末端陕速扩增（RACE）技术克隆口虾蛄坛基因cDNA全长序列（GenBank登陆号：KR422400），并应用相对实时荧光定量PCR技术检测雌雄口虾蛄不同组织、不同发育时期卵巢瞻mRNA的表达量。结果表明：口虾蛄增基因全长7727bp，其中5’端非编码区为36bp，开放阅读框（ORF）为7521bp，3’端非编码区为170bp，共编码2506个氨基酸：预测的氨基酸序列中存在1个长度为20个氨基酸的信号肽，1个类似于枯草蛋白酶的内切蛋白酶识别位点（RSKR），3个潜在的N-连接糖基化位点，1个在无脊椎和脊椎动物卵黄蛋白原中都比较保守的KALGNVG基序；对其结构域分析表明，口虾蛄Vg蛋白含有4种保守结构域，分别为卵黄蛋白原N端结构域（Vitellogenin_N）、血管性血友病因子（vWFD）和两种未知功能结构域（domainofun-known function）DUFl943与DUFl081；经NCBIBLASTP同源性比较，口虾蛄Vg氨基酸序列与其他甲壳类的相似性为46％～52％；系统发育分析结果显示，口虾蛄Vg单独聚为一支；实时定量PCR结果显示，15虾蛄瞻基因在性腺和肝胰腺中均有表达，在肌肉中均不表达，卵巢中增mRNA的表达量显著高于其他组织（P〈0．05），且15虾蛄坛mRNA的相对表达量随着卵巢的发育不断增加（P〈0．05），在成熟期时达到最高值，随后显著下降，坛mRNA表达量在卵巢中的变化规律可以作为了解15虾蛄性腺发育的有效指标。本研究结果为口虾蛄Vg蛋白的功能研究奠定了基础。

口虾蛄假溞状幼体和仔虾消化酶活力的变化

采用酶学方法测定了口虾蛄Oratosquilla oratoria假溞状幼体Ⅲ~Ⅺ期及仔虾的消化酶活力,分析比较了各发育期幼体和仔虾酶活力的变化。结果表明：在口虾蛄幼体发育过程中,淀粉酶活力先增大,至假溞状幼体Ⅴ期达到峰值后逐渐减小,纤维素酶活力呈逐渐下降的趋势,仔虾的淀粉酶及纤维素酶活力显著小于假溞状幼体酶活力（P〈0.05）;随着幼体的发育,幼体的胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶活力逐渐增大,除了仔虾的脂肪酶活力和Ⅺ期假溞状幼体无明显差异外（P〉0.05）,仔虾期的酶活力显著高于其他发育期幼体的酶活力（P〈0.05）。研究表明,口虾蛄幼体消化酶活力的高低与幼体发育期有关,同时受食性和各发育阶段能量需求的影响。

黄海北部对虾放流水域污染分析

根据 1 996～ 1 998年对黄海北部中国虾放流增殖水域的调查 ,对该水域的污染状况进行了评价 ,结果表明 ,除个别站位COD、Cu、Zn、Hg有少量超标外 ,综合评价和单因子评价均符合渔业水质标准规定的要求 ,水质良好 ,适合幼对虾的栖息和生长。但污染物含量特别是重金属含量有逐年增高的趋势。