沙丁鱼鱼鳞胶原蛋白肽的制备及其抗氧化活性研究

目的优化沙丁鱼(Sardinapilchardus)鱼鳞胶原蛋白肽的制备工艺和评价不同分子量大小胶原蛋白肽的抗氧化活性。方法以沙丁鱼鱼鳞为原料,通过酶工程结合单因素与响应面实验优化胶原蛋白肽制备工艺,采用超滤膜分级分离鱼鳞胶原蛋白肽,并通过体外自由基化学体系分析对比不同分子量大小(10、5、1 kDa)的胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果采用碱性蛋白酶进行酶解鱼鳞,胶原蛋白肽的得率最高;最优酶解工艺参数为:碱性蛋白酶加酶量7526 U/g、料液比1:20(g/mL)、pH 10.5、酶解温度67℃、酶解时间4 h,此条件下鱼鳞胶原蛋白肽得率最高,达43.44%±1.59%。通过超滤获得的分子量小于1k Da的鱼鳞胶原蛋白肽对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟基自由基(hydroxyl radical,·OH)的清除能力最强,其半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为0.72 mg/mL和1.76 mg/mL;分子量为1~5 kDa的鱼鳞胶原蛋白肽对超氧阴离子自由基(superoxide radical,O^(2-)·)的清除效果最好,其IC50为1.45 mg/mL。结论碱性蛋白酶能够有效制备鱼鳞胶原蛋白肽,且小于1 kDa的鱼鳞胶原蛋白肽抗氧化活性最好。

pH对大黄鱼肌原纤维蛋白结构性质及乳化性的影响

为深入探究大黄鱼肌原纤维蛋白(MP)的乳化性,以满足大黄鱼蛋白质高值化开发利用的需求。实验探究了不同pH对大黄鱼MP结构性质及其乳化性的影响。采用pH分别为2、4、6、8、10、12的低盐磷酸缓冲液处理大黄鱼MP,通过SDS-PAGE分析大黄鱼MP降解情况,利用接触角测量仪和荧光分光光度计考察其疏水性变化。将不同pH下大黄鱼MP溶液与大豆油以体积比为1∶1的比例经高速均质制备乳液,并对其乳滴电位、粒径以及乳液的乳析指数进行测定,综合分析在不同pH下乳液的稳定性。SDS-PAGE电泳结果表明,在pH 4时,大黄鱼MP条带颜色较浅,在pH 6~12时,肌球蛋白重链条带基本消失,肌动蛋白条带颜色逐渐加深,且在浓缩胶顶部出现了高分子聚集物。对接触角和荧光光谱的综合分析表明,大黄鱼MP疏水性随pH增加而增加。对不同pH下MP乳液特性分析显示,在pH 8时,乳滴带负电且Zeta电位绝对值大[(49.63±1.52)mV]、粒径较小、乳液稳定性较好,而pH 12条件下容易出现破乳,不利于乳液的稳定。在pH 8时,大黄鱼MP结构更有利于提升乳液稳定性。研究表明,在弱碱性条件下更有利于大黄鱼MP形成稳定的乳液体系。pH对大黄鱼MP结构性质和乳化性的影响探究,有望为大黄鱼MP在食品工业中的开发利用提供理论依据。

低压静电场处理对鱿鱼保鲜效果的影响

为探究低压静电场(low voltage electrostatic field,LVEF)处理对鱿鱼贮藏品质的影响,采用pH值、蒸煮损失率、挥发性盐基氮(total volatile basicnitrogen,TVB⁃N)和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)等评价指标,以无电场处理的样品为对照组,研究比较低压静电场贮藏条件下的鱿鱼品质变化情况。结果表明,低压静电场处理能够改善鱿鱼的贮藏品质。随着贮藏时间的延长,LVEF组的样品pH值增加缓慢;贮藏期间对照组的蒸煮损失率、TVB⁃N值始终低于LVEF组,且当贮藏至15 d时LVEF组的TBA值远低于对照组的1.24 mg/kg;低压静电场对微生物繁殖有明显的抑制作用,贮藏15 d内LVEF组菌落总数均低于6 lg(CFU/g);在硬度、弹性、感官评价和蒸煮损失率上LVEF组均优于对照组。此外,十二烷基硫酸钠⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示LVEF组条带未发生明显变化,故低压静电场处理能更好地保持鱿鱼品质。

坛紫菜降血压活性肽的分离纯化及分子质量测定

用AS.1398中性蛋白酶酶解制备坛紫菜(Porphyrahaitanesis)ACE抑制肽,并经超滤膜、SephadexG-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,纯化产物测定其氨基酸组成,并运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定分子质量。结果显示:坛紫菜酶解液经超滤分离获得分子质量小于2000D的组分ACE抑制活性最高,IC50为0.73mg/mL;该组分进行SephadexG-15凝胶层析分离得6个组分,组分E的IC50最小,为0.67mg/mL。组分E经RP-HPLC分离得峰6对ACE的抑制率最高,达到89.54%;峰6再次过RP-HPLC,又洗出2个蛋白峰,说明峰6并不是单一物质,还需进行多次反复纯化。测定峰6的氨基酸组成主要含有Tyr、Val和Phe,同时采用MALDI-TOF-MS分析发现有8个主要的质子峰,信号最强的质子峰为m/z861.17,有4个峰聚集在m/z860左右,说明峰6平均分子质量大约为860D,推算出紫菜降血压肽含有3个Val、2个Phe、1个Tyr,N端为Val,可能的排序顺序有18种。

牡蛎寡肽对免疫低下小鼠模型免疫功能的影响

采用腹腔注射环磷酰胺(Cyclophosvnamide,CTX)建立免疫低下小鼠模型,研究不同剂量牡蛎寡肽对小鼠免疫器官脏器指数、脾淋巴细胞转化增殖情况、自然杀伤细胞(Natural Killer cell,NK)细胞活性、小鼠体液免疫、巨噬细胞吞噬能力、血清TNF-α、IL-6和溶血素水平的影响.结果显示:与免疫抑制模型组小鼠相比,牡蛎寡肽能够显著提高脾淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性、廓清指数K、吞噬指数a、吞噬中性红能力、TNF-α、IL-6、溶血素水平和脾淋巴细胞CD3+4T淋巴细胞亚群及CD3+8T淋巴细胞亚群分布(P<0.05),而对小鼠的肝、脾脏指数影响不显著,表明牡蛎寡肽能够提高由CTX引起的免疫低下模型小鼠的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能,对小鼠的免疫功能具有正面调控的作用.

海水鱼抗冻剂中复合磷酸盐的优化和应用研究

【目的】探索利用复合抗冻剂处理的冻藏海水鱼生产高品质鱼糜的可行性。【方法】选择脂肪含量差异较大的黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)、小黄鱼(Larimichthys polyactis)和金鲳鱼(Trachinotus ovatus)为研究对象,以鱼肉冰点和相变焓为指标,对抗冻剂中的磷酸盐配比进行优化,并通过鱼肉组织切片分析、鱼糜凝胶强度测定和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳探究抗冻剂对冷冻鱼肉凝胶形成能的影响。【结果】黄鳍棘鲷和小黄鱼抗冻剂中焦磷酸钠、三聚磷酸钠和六偏磷酸钠的最佳条件分别为3.0%、3.0%和1.0%,金鲳鱼抗冻剂中分别为3.0%、3.0%和0.1%。抗冻剂处理的黄鳍棘鲷、小黄鱼和金鲳鱼鱼体的冰点和相变焓均伴随冰藏时间的延长呈先上升后下降的趋势,它们的最高值均出现在鱼体僵直指数最高的冰藏末期。鱼体冰点和相变焓与渗入鱼体的磷酸盐含量的相关系数均大于0.6。利用复合抗冻剂处理黄鳍棘鲷后,其鱼肉组织结构的冻藏损伤受到抑制,使用冻藏120 d试验组样品制备鱼糜,鱼糜凝胶破断力和破断距离均显著高于对照组,而冻藏180 d试验组样品性能与对照组接近。当冻藏时间达到120 d及以上时,即使是添加抗冻剂的鱼肉肌球蛋白和肌动蛋白也会出现一定程度的降解。【结论】利用磷酸盐复合抗冻剂处理的冷冻海水鱼在一定冻藏时间内可以用于生产鱼糜。【意义】研究结果为利用冷冻海水鱼制备优质鱼糜提供技术支撑,以解决渔汛淡旺季原料鱼供应不平衡的问题,推动水产加工行业的可持续发展。

翡翠贻贝糖蛋白提取工艺优化及体外抗氧化活性

以翡翠贻贝肉为原料,在单因素试验的基础上,通过响应面试验设计优化了翡翠贻贝糖蛋白提取的工艺条件.采用超滤方法获得翡翠贻贝超滤截留液糖蛋白PGFR(Pernaviridis glycoprotein of the filter remains of MW cut off 5KDa)和翡翠贻贝超滤透过液糖蛋白PGFL(Pernaviridis glycoprotein of the filter leaching of MW cut off 5KDa)2个组分,并分别评价其体外抗氧化活性.结果表明,从翡翠贻贝肉中提取糖蛋白粗提物的最佳工艺条件为提取时间61min,提取温度62℃,NaCl浓度0.2mol/L,料液比1∶1,在该条件下提取率为51.55%.体外抗氧化试验结果表明,翡翠贻贝PGFR对·OH,·O_2^-和DPPH自由基的清除率及总抗氧化能力均优于PGFL,可作为后续研究的主要对象,具有开发新型天然抗氧化剂的潜力.

菊黄东方鲀鱼精蛋白提取工艺优化研究

为研究河鲀鱼精蛋白的制备工艺,以菊黄东方鲀(Takifugu Flavidus)精巢为原料,以鱼精蛋白提取率为指标,通过单因素试验研究NaCl溶液的pH、硫酸浓度、硫酸用量、提取温度、提取时间以及乙醇用量等单因素对鱼精蛋白提取率的影响,在此基础上,采用响应面法优化鱼精蛋白的提取工艺条件。结果显示,采用响应面法优化获得河鲀鱼精蛋白的最佳提取工艺条件为:NaCl溶液pH 8.5,硫酸浓度0.6 mol/L,硫酸用量4.0倍沉淀体积,提取温度45℃,提取时间2.4 h,乙醇用量4.0倍沉淀体积,此时鱼精蛋白提取率达到19.07%。研究表明,响应面法对河鲀鱼精蛋白提取条件的优化方案合理可行,可为河鲀精巢的开发利用提供参考依据。

牡蛎寡肽对H2O2氧化损伤L02人肝细胞的保护作用

为了研究牡蛎寡肽对自由基清除作用及对人肝细胞L02细胞氧化损伤的保护作用,测定了牡蛎寡肽对羟自由基(·OH)的清除率,并建立过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)氧化损伤人肝细胞L02的模型,研究牡蛎寡肽对氧化损伤L02细胞的存活率、活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、抗氧化酶系(superoxide dismutase/SOD,glutathione/GSH)含量的影响。结果表明,牡蛎寡肽对羟自由基的IC50为0.38 mg/m L。2 mg/m L牡蛎寡肽对于L02细胞的增殖率仍为123.98%。模型组SOD和GSH水平分别降低了40%、64.87%,而ROS增加了1倍。当添加不同剂量牡蛎寡肽后,中剂量组细胞中SOD含量几乎恢复到正常组水平,GSH活性也提高了118.89%,ROS水平降到模型组的62.43%,说明牡蛎寡肽对L02细胞无毒,能降低氧化损伤的L02细胞内的ROS水平,显著提高SOD和GSH含量,对细胞起到保护作用。因此,牡蛎寡肽对H2O2致氧化损伤的人肝L02细胞具有保护作用,可能是通过清除自由基,保护细胞内抗氧化酶系活性,抑制ROS的过多积累来实现。

斑马鱼血管紧张素转换酶(ACE)的生物信息学分析

采用生物信息学方法对模式生物斑马鱼中的血管紧张素转换酶进行了系列预测分析。结果表明,斑马鱼中有两个ACE基因,它们所编码的蛋白分别由1 324和785个氨基酸组成,其中1个是酸性蛋白,在水中不稳定,没有信号肽,属线粒体跨膜蛋白;另一个为酸性水溶性稳定蛋白,有信号肽。它们均含保守的Pfam Pep-tidase_M2结构域,属于M2家族蛋白。通过ESTs搜索发现这两个基因在斑马鱼不同组织和不同发育期的表达情况存在较大的差异。同源性比对和系统发育分析表明,斑马鱼ACE蛋白与低等脊椎动物(红原鸡、热带爪蟾等)、高等脊椎动物(人、鼠等)的同源性较高,达60%以上,说明ACE蛋白在系统演化上比较保守。

翡翠贻贝不同醇沉物体外抗氧化活性研究

通过采用不同体积分数的乙醇进行分级沉淀翡翠贻贝提取物,获得3个不同醇沉物ME45、ME60和ME80,并比较其对清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基(·O_2^-)、羟自由基(·OH)、总抗氧化能力及抑制肝组织自发性脂质过氧化作用(LPO)的效果。结果表明:翡翠贻贝不同醇沉物ME80、ME60和ME45均具有抗氧化活性,呈显著的量效关系,其抗氧化能力因反应体系的不同而不同。在总抗氧化、·O_2^-、LPO测定体系中,越高浓度乙醇沉淀物的抗氧化活性越强,ME80>ME60>ME45;在DPPH自由基清除体系中,抗氧化活性次序为ME60>ME80>ME45;而在·OH清除体系中,抗氧化活性次序为ME45>ME80>ME60。总体而言,ME80抗氧化能力优于ME60和ME45,是一种潜在的天然抗氧化剂的良好来源,具有进一步开发应用前景。

响应面优化酶法提取牡蛎糖原工艺条件研究

为研究制备牡蛎(Crassostrea angulata)糖原的最佳工艺条件,通过比较分析了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶等5种不同蛋白酶对牡蛎进行酶解提取糖原的效果,以碱性蛋白酶为最优酶制剂。在对碱性蛋白酶酶解工艺条件进行单因素实验的基础上,应用Box-Bhenken中心组合设计3因素3水平试验方案,通过响应面分析,建立数学模型优化牡蛎糖原的提取条件,以p H、酶解温度和加酶量为自变量,牡蛎糖原提取率为指标,获得碱性蛋白酶水解牡蛎提取糖原的最佳工艺条件,即加酶量4%、p H9、水解温度50℃,此时牡蛎糖原的提取率可达(48.55±0.01)%。试验结果表明,响应面法对牡蛎糖原提取条件的优化方案合理可行,该研究为牡蛎糖原的开发利用提供了理论依据。

水产品生物保鲜技术的应用及展望

针对水产品生物保鲜剂的作用机理,介绍了乳酸链球菌素、壳聚糖、鱼精蛋白、茶多酚,酶类等不同来源的生物保鲜剂及复合生物保鲜剂在水产品保鲜的应用现状及进展,提出了采用生物保鲜技术结合其他保鲜手段,将更加全面地保持水产品的品质,在水产品保鲜领域具有良好的应用前景。

水产饲用益生菌的作用机理及功效

从分析益生菌的作用机理出发,介绍了几种常见水产饲用益生菌具有的提供营养、促进生长、增强养殖动物免疫力、预防疾病、分解有机污染物、净化水质、改善养殖生态环境的功效,提出了其目前存在的问题并进行展望,对今后水产养殖业中更好地应用益生菌具有重要的指导意义。

菊黄东方鲀精巢醇提物(AETT)的抗疲劳作用与毒理安全性

【目的】研究菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)精巢的醇提物(AETT)对小鼠的抗疲劳作用及毒理安全性。【方法】配制不同剂量的菊黄东方鲀精巢醇提物溶液及对照组,通过动物实验,测定小鼠的负重游泳时间和血清尿素氮、血清乳酸、肝糖原含量的变化,并观察在一次性给予最大剂量的条件下小鼠的死亡情况。【结果】菊黄东方鲀精巢醇提物高剂量组能显著延长小鼠负重游泳时间(P<0.01),提高小鼠体内肝糖原的储备量(P<0.01),降低运动后血清乳酸含量(P<0.01),降低运动后血清尿素氮含量(P<0.01),加速体内尿素氮的清除,具有显著的抗疲劳作用。以15 g/kg剂量给予小鼠菊黄东方鲀精巢醇提物,小鼠无死亡,体质量、毛色、脏器及行为活动均正常,无毒副作用。【结论】菊黄东方鲀精巢醇提物具有明显的抗疲劳活性,且安全无毒。

鱿鱼缠卵腺糖蛋白MGS降血脂及非特异性免疫功能研究

为研究鱿鱼缠卵腺糖蛋白MGS的降血脂及免疫活性,本文先根据体外测定胰脂肪酶活力抑制率的结果初步判定MGS的降血脂效果,而后通过建立高血脂模型小鼠进一步研究MGS的降血脂活性,同时采用动物实验研究MGS的免疫活性。结果表明,MGS具有抑制胰脂肪酶活性的作用;能够显著降低小鼠的TC和LDL-C的含量,显著增加HDL-C的含量(P<0.05),不能显著降低TG的含量,在降低血脂的同时,也可在一定程度上控制高脂小鼠体重的增加;实验组小鼠的廓清指数和吞噬指数与对照组的在统计学上无显著性差异(P>0.05)。

牡蛎提取物辅助保护化学性肝损伤功效研究

为探讨牡蛎提取物对小鼠化学性肝损伤的保护作用,研究建立酒精导致小鼠急性肝损伤模型,监测各剂量组小鼠体重,测定肝组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和甘油三酯(Triglycerides,TG)的含量及观察牡蛎提取物对肝组织病理的影响。结果表明,牡蛎提取物各剂量组小鼠的体重与模型组和空白组无显著性差异(P>0.05);高剂量组的MDA、TG明显低于模型对照组,高剂量组的GSH明显高于模型对照组,均呈显著性差异(P<0.05)。高剂量组小鼠肝脏脂肪变性的程度明显低于模型组,差异显著(P<0.05)。从而说明,牡蛎提取物对小鼠急性化学性肝损伤具有辅助保护功效。

超临界萃取技术在海洋水产的应用研究进展

超临界萃取技术作为一种新型"绿色"提取分离技术,具有分离效率高、溶解能力强、保持产品生物活性、提高产品提取率和纯度、操作简单等优点。本文介绍了超临界萃取技术的基本原理及特点,综述了该技术在海洋水产生物活性成分提取方面的研究现状,并展望了其在该领域的应用前景。

血管紧张素转换酶(ACE)的提取与活性验证

在从紫菜中提取制备降血压肽的研究中,为筛选能够抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的功能肽,需要大量ACE进行体外检测。但ACE成本昂贵,本文利用硫酸铵分级盐析法提取猪肺组织中的ACE,测其酶活力为15.45×10-3U/mg,比活力为33.80×10-3U/mg。通过卡托普利来验证其抑制效果,抑制率达49.15%。采用本实验室初步制得的紫菜降血压肽对自制ACE和商品ACE的活性进行抑制,测定IC50发现该抑制剂对2种ACE的抑制效果差异不大,且活性较为稳定,因此所提取的ACE粗酶液可直接用于降血压肽的体外检测实验。

响应面法优化三氯化铁回收河鲀鱼糜漂洗液中蛋白质的研究

漂洗是鱼糜加工中重要的步骤之一。鱼肉在漂洗过程中会损失大量水溶性蛋白质。对鱼糜漂洗液进行蛋白质回收,可以提高鱼糜利用率,降低污水处理成本,减少环境污染。本试验采用絮凝剂三氯化铁(FeCl_(3))对河鲀鱼糜漂洗液中的水溶性蛋白质进行回收,根据不同的单因素变量,研究FeCl_(3)絮凝法回收鱼糜漂洗液中蛋白质的最佳条件。通过响应面分析法对试验条件进行优化,寻求最佳的组合条件。结果显示,FeCl_(3)法回收河鲀鱼糜漂洗液中水溶性蛋白质的最佳条件为pH 6、温度65℃、每10 mL鱼糜漂洗液添加1%1.4 mL FeCl_(3)溶液。