高表达和敲减adipophilin对细胞内ERK1/2活性、PPARγ表达和细胞内脂质蓄积的影响(英文)

本课题组以前的研究表明,adipophilin通过ERK1/2-PPARγ信号转导通路促进细胞内的脂质蓄积.为了研究高表达和敲减adipophilin是否影响RAW264.7细胞内ERK1/2的活性、PPARγ的表达以及细胞内的脂质蓄积,从而进一步证实这一通路,阐明adipophilin促进泡沫细胞形成的机制.重组pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体经酶切检测证实,并用SofastTM介导转染到包装细胞PA317中,经培养后释放逆转录病毒.将收集的逆转录病毒感染RAW264.7细胞,经嘌呤霉素筛选后获得稳定高表达和敲减adipophilin的细胞系.用50 mg/L的氧化低密度脂蛋白处理细胞24 h后,用油红O染色法和高效液相色谱法测定细胞内的脂质蓄积情况,用半定量RT-PCR和蛋白质印迹分别检测adipophilin和PPARγ的mRNA和蛋白质的表达,用蛋白质印迹对与动脉粥样硬化发病有关的ERK1/2及其磷酸化进行检测.酶切结果表明,pQCXIP-HA-Adipophilin和pSuper-retro-adipophilin siRNA重组逆转录病毒载体构建成功.在荷脂情况下,pQCXIP-HA-Adipophilin转染的细胞能明显增加细胞内的脂质蓄积,但使PPARγ的表达和ERK1/2的磷酸化下调,这些作用可被adipophilin siRNA逆转.结果表明,adipophilin与泡沫细胞的形成有关,adipophilin可能是通过ERK1/2-PPARγ途径促进细胞内的脂质蓄积.

敲除Adipophilin基因对脂质代谢相关疾病的作用

Adipophilin是PAT(perilipin/adipophilin/Tip47)蛋白家族的一个成员,定位于细胞质和细胞内的脂滴表面.Adipophilin能促进脂质蓄积和细胞内脂滴的形成,在泡沫细胞的形成中起重要作用,是动脉粥样硬化脂质蓄积的一个标记物.Adipophilin基因敲除小鼠能预防高脂饮食诱导的脂肪肝产生,且在脂肪组织分化过程中也起着一定的作用.本文概述了adipophilin在细胞内脂质代谢中的作用.

基于课外科研活动的本科生导师制对学生素质教育作用探析--以生物技术专业为例

创新型医学人才的培养是创建“双一流”学科和高水平大学的重要支撑。在“双一流”学校与学科建设背景下,生命科学学院和生物学学科快速发展,但传统分子生物学课程内容和教学模式已不能满足培养学生参与课外科研的需求。文章提出以培养学生科研创新能力为目标,采用本科生导师制方式,精准指导本科生参与课外科研活动和竞赛,提高本科生科研思维和科研能力,并在此过程中高效融合素质教育,旨在为培养具有良好品德的新时代青年科研人才起到抛砖引玉的作用。

以鸟氨酸循环为例探讨生物化学课程教学方法及思政融入

生物化学课程的代谢内容涉及很多循环代谢,占据生物化学课程代谢的半壁江山,且多为难点和重点。为了达到较好的教学效果,文章以鸟氨酸循环为例,采用多种教学手段和技巧积极探索和尝试,旨在达到学生掌握知识的同时,学会掌握代谢的逻辑,提高学习能力,提升科研思维。同时融入恰当的思政内容,以期提高生物化学课程的教学质量。

DiffServ的MPLS流量工程的实现

提出用现有的技术实现考虑差分服务（DiffServ）的MPLS流量工程的方法，其核心思想是：不是在发起流量的源节点计算出各种可供选择的路径时，而是在为该流量选择合适的路径的时候才考虑DiffServ的约束因素。该方法的优点是算法简单、扩展性强和资源占用少。

PAT家族蛋白研究进展

PAT家族蛋白(PAT)是脂质代谢中的一类小蛋白分子,它们定位于细胞质脂滴的表面,介导着脂质代谢。PAT家族蛋白并不直接参与脂质的合成和分解,它们通过与其它分子的相互作用而介导脂质代谢。本文将阐述PAT家族蛋白的发现、命名和成员组成,并重点介绍成员围脂滴蛋白(perilipin)和脂肪分化相关蛋白(adi-pophilin,ADRP)的代谢调控和与其它分子的相互作用。

多业务网络流量工程模型研究

文章详细分析了多业务网络流量工程的一个通用模型和它的基本功能,系统分析了网络实际存在的流量波动问题及其对网络规划的影响。

考虑了DiffServ的跨域MPLS流量工程

该文提出了考虑差分服务(DiffServ)的跨自治域MPLS流量工程的实现方案,其核心思想是:(1)为不同服务等级的汇聚流建立相应的跨自治域虚拟网络(V-NET);(2)在为V-NET选择合适的路径和分配网络资源的时候,引入Diff-Serv的约束因素。该方法是对“自治域内的考虑差分服务(DiffServ)的MPLS流量工程方法”的一种扩展,具有算法简单、适应性强和资源占用少等优点。

在PB5.0中用Enter代替Tab在数据窗口的字段间移动

本文详细介绍了在PB5.0中用Enter键代替Tab键在数据窗口的字段间进行移动的实现方法。

在Power Builder5.0中实现自学习下拉列表

在数据库的应用开发中，通常都使用下拉列表来实现数据的选择录入。如果下拉列表中的数据发生了变化就需对它作专门的维护。本文介绍一种用ＰＢ５．０的“下拉数据窗口编辑风格”实现的、用于数据选择输入的。

高效低噪二阶状态空间数字滤波器误差谱成形

本文给出误差反馈高效计算低舍入噪声(高效低噪)二阶线性状态空间(LSS)数字滤波器的设计方法。对窄带数字滤波,新结构比高效低噪原结构可降低噪声15dB,比原结构的最优LSS实现降低10dB。同时保持了原结构的运算高效性、溢出极限环稳定和低系数灵敏度等特性。用新结构并联实现高阶窄带椭圆滤波器,比用原结构和最优LSS结构的并联实现分别降低噪声13dB和9dB。

抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫应答的研究

目的:初步探讨抗淋病LTB-PorB核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应,为研制抗淋病疫苗提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗(pcDNA3.1(-)/ltB-porB)及重组蛋白疫苗(rLTB-PorB);通过鼻饲途径将核酸疫苗和蛋白疫苗采用核酸初免-蛋白加强(DNAprime-protein boost)联合免疫以及分别单独免疫雌性BALB/c小鼠,同时设PBS及空质粒(pcDNA3.1(-))对照组,检测各组体液免疫和细胞免疫应答水平。结果:免疫后第56天,联合免疫组小鼠生殖道sIgAA450(1·083±0·179)、血清IgG A450(1.023±0.116)、脾淋巴细胞诱生的IL-4[(357.58±34.44)/pg/ml]和IFN-γ[(261.85±29.92)/pg/ml]水平均明显高于各对照组(P<0.01),小鼠脾淋巴细胞增殖率(SI:2.12±0.29)较对照组显著增高(P<0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫组血清IgG亚类IgG2a/IgG1比值分别为1.678、0.455和0.693。结论:LTB-PorB核酸疫苗和蛋白疫苗联合免疫组诱导的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平明显优于单独的核酸疫苗组和蛋白疫苗组,且以诱导Th2倾向性免疫应答为主。

Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达

目的我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素。本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制。方法通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞。将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达。当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Westernblot检测各时间点细胞内ACAT1的表达。结果高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少。无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性。与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达。低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1 h后,ACAT1 mRNA开始下降;孵育8 h后,ACAT1蛋白开始下降;孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性。高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达。结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,最终导致细胞内脂质积聚。

Adipophilin通过PI3K/Akt通路促进细胞内脂质蓄积

目的:探讨adipophilin促进细胞内脂质蓄积的可能机制,为动脉粥样硬化的防治提供参考。方法:分别通过q PCR、Western blot和油红O染色观察氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)处理RAW264.7细胞不同时间后,细胞内Akt、p-Akt和adipophilin的蛋白水平及脂质蓄积情况;并检测PI3K/Akt抑制剂LY294002处理后,上述指标的变化;HEK293细胞过表达adipophilin后,检测Akt的活性;并用免疫共沉淀实验检测adipophilin与Akt之间的相互作用。结果:ox LDL处理细胞后,随着时间的延长,脂滴增多,Akt被活化,adipophilin表达增加,而LY294002处理则可抑制上述变化;过表达adipophilin后,p-Akt水平增高,但adipophilin与Akt之间未见直接相互作用。结论:Adipophilin可通过PI3K/Akt途径促进细胞内脂质蓄积,但可能不是通过直接相互关系发挥作用的。

Plin2通过NF-κB通路参与oxLDL诱导巨噬细胞LOX1的表达

目的oxLDL可上调Plin2的表达,进而促进泡沫细胞的形成,LOX1是oxLDL的受体。本文探讨Plin2与LOX1在动脉粥样硬化发生发展过程中的关系。方法从GEO数据库中下载GSE43292,分析Plin2、LOX1的表达及Plin2、LOX1与NF-κB信号通路的相关性。采用oxLDL处理的RAW264.7细胞作为动脉粥样硬化的细胞模型进行研究,蛋白质免疫印迹法检测细胞中Plin2、LOX1和p-p65的表达,荧光中性脂质染料BODIPY 493/503染色法检测细胞内脂滴。结果通过分析GSE43292数据发现,Plin2、LOX1在颈动脉粥样硬化斑块中的表达显著高于颈动脉邻近组织。oxLDL处理RAW264.7细胞24 h后,Plin2与LOX1的表达、细胞内脂滴明显增加。过表达Plin2的细胞中LOX1表达升高;当用oxLDL孵育过表达Plin2的细胞后,LOX1的水平升高更为显著;但在没有oxLDL处理的情况下,敲减Plin2对细胞内LOX1的表达没有影响。基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)结果显示,在动脉粥样硬化中,Plin2和LOX1的表达与NF-κB的活化呈正相关。此外,尽管采用oxLDL处理细胞,NF-κB抑制剂JSH-23预处理仍可显著降低Plin2与LOX1的表达、细胞内的脂质积聚,过表达Plin2后,JSH-23亦能显著抑制oxLDL孵育的细胞中Plin2和LOX1的表达。结论Plin2可通过上调LOX1的表达促进细胞内脂质积聚,参与动脉粥样硬化,这一过程至少部分是通过激活NF-κB通路实现的。

临床医学本科生科研能力培养现状及改革措施探析

随着当前临床医学的快速发展,临床医学本科生的科研能力也应随之提高,但许多高校尚未形成一个完整的培养体系。针对临床医学本科生科研思维能力培养的现状,提出有针对性的改革措施,旨在切实提高临床医学本科生的科研能力。

动脉粥样硬化的饮食护理

动脉粥样硬化(AS)是全身血管疾病的主要原因,它与脂质的关系及其饮食护理受到了普遍关注。许多研究显示,由遗传及饮食性因素导致的血浆胆固醇和三酰甘油(TG)水平持续升高等血脂高异常是AS和AS性心脑血管疾病的独立危险因素。因此临床上在治疗心血管疾病的同时,严格掌握饮食营养护理原则,对于防止因饮食不当导致的病情加重或猝死显得十分重要。本文就AS与脂质的关系及其饮食护理作一综述。

对线粒体遗传病授课过程中素质教育相关问题的探讨

线粒体DNA突变引起的遗传病通常表现为母系遗传,是遗传病的一种,严重影响患者的身体健康和生存质量。文章就医学遗传学的线粒体遗传病章节的授课过程中,以线粒体替换技术与“三亲婴儿”知识为契机,借助有关线粒体遗传病的基础科学研究如何融入素质教育进行了探讨,力求借此激发学生的探索精神,鼓励学生发现科学之美,树立科学自信和民族自信,培养国际视野,引导学生树立正确的情感、态度和价值观,以达到立德树人的教育、教学目标。

医学遗传学教学中存在的问题及对策--以“人类基因研究的策略与方法”为例

文章以“人类基因研究的策略与方法”为例,首先阐述了医学遗传学教学中存在的问题,然后论述了医学遗传学教学对策,包括调整教学内容、联系临床疾病、线上线下相结合。

文本比较算法研究

本文在分析文字录入考试特点和可能出现的各种错误性质的基础上，利用通信中的同步原理研究出一种针对文字录入的评卷算法。根据该算法开发出的自动批改文字考卷（磁盘）的通用评卷软件，可处理由多种字处理软件录入的各种格式的文档。