新城疫病毒HN基因的克隆及原核表达

为了获得新城疫病毒(NDV)HN基因和重组表达蛋白,试验采用基因克隆和原核表达的方法,以NDV La Sota毒株为参考毒株设计特异性引物,利用RT-PCR技术从NDV La Sota毒株中扩增出去信号肽和跨膜区的HN基因(大小为1 593 bp),将其克隆至p BluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点,再将HN基因亚克隆到原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒p ET-28a-NDV-HN,并用IPTG诱导表达,最后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:重组蛋白获得高效表达,且具有良好的免疫反应性。

猪传染性胃肠炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）M蛋白的单克隆抗体（MAb）,试验利用原核表达融合蛋白His-M免疫7周龄雌性Balb/c小鼠,以PK-15细胞培养病毒液作为检测筛选抗原,并采用淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果表明：获得2株稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株（2G1、2G2）,经检测其细胞培养上清液和诱导的小鼠腹水抗体效价分别可达到1∶3200和1∶1×105;连续培养15代及液氮冻存后复苏,抗体效价稳定;单克隆抗体亚型鉴定均为IgG1,轻链均为k链;MAb能够特异性识别TGEV。

例谈如何呵护学生写日记的兴趣

"日记"是教师要求学生完成的常规作业中必不可少的一项。教师希望学生能通过记下生活中的点点滴滴,来积累生活素材,为作文做好准备,从而提高写作能力。但是,这个想法是否能得到有效实施,收到良好效果,却是一个尴尬的话题,那么,怎样才会让孩子们对写日记有兴趣,又怎么呵护这种兴趣?本篇论文的作者以其多年的教学实践,从"写的时机""内容与形式""日记的评价"等几方面来对这个问题展开了陈述。

猪流行性腹泻浙江流行毒株（ZJ-WZ）N基因的克隆及蛋白的原核表达

为了深入研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的免疫学特性、结构与功能，本试验以PEDV标准株CV777为参考毒株设计特异性引物，利用反转录聚合酶链式反应RT—PCRZXPEDV浙江流行毒株（ZI—WZ）中扩增出核衣壳蛋白N基因。将其克隆至克隆载体质粒pBluscriptⅡKs（＋／一）多克隆位点区，经过PCR检测、EcoRI单酶切以及测序鉴定，结果表明成功克隆获得N基因。再将N基因亚克隆到原核表达栽43gpET-30a（＋）中，构建重组表达质粒pET-30a—PEDV—N，并在37qC的条件下经IPTG诱导表达，通过SDS—PAGE分析结果表明，获得了该蛋白的高效表达。免疫印迹反应Westem—blot分析结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。

“作家笔下的动物”与小学写作教学中的“观察”

《猫》《母鸡》《白鹅》是老舍先生和丰子恺先生笔下的关于动物的文章,现在均被选入统编版语文教材四年级下册第四单元中,在作家的笔下,性格古怪的猫、慈爱尽职的母鸡和高傲的白鹅,无不性格鲜明,可亲可爱。

给爸爸的一封信

亲爱的爸爸:您在合肥过得好吗?我想您了,您回 候 时 么来呀?我真希望您可以多 回几次家我想多点儿时间和您在一起,我很羡慕陈浏每天都有爸爸陪着。爸爸,您想我吗?想我就给我打电话好吗?

猪流行性腹泻病毒浙江分离株(ZJ-WZ)的N蛋白原核表达

以猪流行性腹泻病毒(PEDV)标准株CV777为参考毒株设计特异性引物,利用RT-PCR从PEDV浙江流行毒株ZJ-WZ中扩增出核衣壳蛋白(N)基因。将其克隆至p BluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点区,经过PCR检测、EcoR I单酶切以及测序鉴定,结果表明成功克隆获得N基因。将N基因亚克隆到原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒p ET-30a-PEDV-N,经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western blot分析表明,N蛋白获得高效表达。本试验为深入研究PEDV的N蛋白免疫学特性及功能奠定了基础。