PCR结合分子杂交法检测鸡传染性支气管炎病毒

利用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）特异性扩增鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）基因组中Ｍ基因和Ｎ基因之间一段核酸片段。以ｐＵＣ１９质粒载体将此片段克隆，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切此重组质粒，回收克隆片段后，制成生物素标记的核酸探针。用ＲＴ－ＰＣＲ及生物素核酸探针法分别对ＩＢＶ，ＩＢＤＶ，ＩＬＴＶ，ＭＤＶ及ＮＤＶ进行检测，结果证明该方法为ＩＢＶ特异性检测方法。对人工感染ＩＢＶ的ＳＰＦ鸡口腔棉拭样品进行跟踪检测，证明本方法能在ＳＰＦ鸡接毒后１～１０ｄ内检出ＩＢＶ。

单抗夹心ELISA法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

利用常规法建立分泌抗鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的单抗细胞株,选其中特异性强、稳定性好、分泌抗体效价高的两株单抗2(1)和2(4),用于建立单抗夹心ELISA法检测IBV,该方法仅与IBV,呈阳性反应,而与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊炎病毒、禽腺病毒、鸡传染性喉气管炎、鸡支原体等病原体均呈阴性反应。14日龄SPF鸡接种IBV后,用本方法对其两周内的口腔棉拭样品进行跟踪检测,结果检出率为80%。将上述棉拭样品通过SPF鸡胚传代一次后,阳性检出率显著提高,与传统的鸡胚气管环法及鸡胚传代法比较,ELISA法检出率明显高于鸡胚气管环法及鸡胚传代法。

利用噬菌体多肽库确定IBDV线性中和位点的研究

鸡传染性法氏囊炎（ＩＢＤ）是由鸡传染病性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）引起的一种急性、接触性传染病。ＩＢＤＶ侵害鸡的体液免疫中枢器官法氏囊，使鸡体的免疫系统处于抑制状态，往往使防疫注射收不到应有的效果，易于诱发疫病，造成较大经济损失。ＩＢ－ＤＶ由４种主要蛋...

鸡贫血病毒DNA的PCR扩增及其分子克隆

用ＰＣＲ方法扩增了国内分离的鸡贫血病毒（ＣＡＶ）ＳＪ１株的含ＶＰ２、ＶＰ３以及部分ＶＰ１的１５００ｂｐＤＮＡ片段。经限制性内切酶酶切分析，该片段与Ｃｕｘ－１株的酶谱相似。同时，以ｐＵＣ１１９质粒载体克隆了这一ＤＮＡ片段。

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。

鸡贫血病毒SJ1株DNA的分子克隆

通过ＰＣＲ方法扩增，用ｐＵＣ１１９和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒载体分段克隆了山东省分离的ＳＪ１株的全病毒ＤＮＡ。

用双抗体夹心法检查鸡传染性支气管炎病毒抗原

鸡传染性支气管炎(IB)尽管有多种诊断方法,但诊断和鉴别诊断仍有一定困难。尤其在疾病的早期,要靠检测病毒抗原。我们用多种IB病毒(IBV)株多次感染SPF鸡,制备IB阳性血清并经过纯化处理,用作第一抗体;用具有群特异性IB单克隆抗体(Mab)作为第二抗体;中间夹被检材料(抗原)。用标记的山羊抗鼠IgG为指示系统。

应用单克隆抗体酶联免疫斑点试验检测抗传染性喉气管炎抗体

本文提出以硝酸纤维膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记的抗传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）的单克隆抗体（ＭｃＡｂ），邻苯二胺为底物，检测ＩＬＴＶ抗体的免疫斑点试验方法（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。该方法较常规方法敏感，特异、省时。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平的检测提供了新的可靠方法。

应用单克隆抗体对马传贫弱毒疫苗接种马血清中相应抗原的检测

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异单克隆抗体酶结合物的免疫斑点试验检测证明,自28份马传贫弱毒疫苗免疫马血清中均检出与单抗呈阳性反应的相应抗原,持续期达51个月以上;自19份人工感染传贫马、自然感染传贫马、弱毒疫苗免疫后攻毒马及42盼健康马血清中均未捡出单抗相应抗原。病理学检查表明,弱毒疫苗免疫马无马传贫病理学改变。以弱毒免疫马肝、脾、骨髓材料进行生物学试验表明,弱毒免疫马体内不存在致病性病毒。这为阐明该弱毒疫苗的免疫本质提出一个非常值得今后深入加以探讨的课题。

羊种布鲁氏菌单克隆抗体研究及应用

本实验应用淋巴细胞杂交瘤技术,建立了分泌抗布鲁氏菌弱毒疫苗M5(或M5—90)菌株的株系特异的单克隆抗体(McAb),杂交瘤细胞株(IC—11)。以其分泌的IC—11McAb的酶结合物,M5菌株特异抗原(P_2)和受检血清建立的免疫班点试验(DB),具有特异地识别出动物出动物接种M5或M5—90疫苗血清抗体能力,其DB反应阴性的血清,再作凝集试验呈阳性为自然感染动物,本法适(?)用布氏菌M5或M5—90疫苗免疫予防地区布病的发病与疫苗接种动物的鉴别,经若干(?),对2573份动物检测,证实有良好的实用价值。

RT－cDNA克隆－PCR法获取犬瘟热病毒融合蛋白基因（F）

纯化鸡胚成纤维细胞培养的犬瘟热病毒（ＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒＶｉｒｕｓ，ＣＤＶ），获得病毒基因组ＲＮＡ后，反转录合成双链病毒Ｆ基因ｃＤＮＡ。将此双链ｃＤＮＡ平端插入ＰＵＣ１９质粒ＳａｍⅠ位点构建重组质粒，进行ｃＤＮＡ克隆。以重组克隆质粒为模板ＰＣＲ扩增，获得ＣＤＶ全长Ｆ基因。将此Ｆ基因插入表达载体ＰＢＶ２２０，在大肠杆菌中表达，通过对表达产物的最终鉴定，可确认所获片段为ＣＤＶ全长Ｆ基因．

马传贫弱毒疫苗免疫马诊断盒的研制

应用马传贫驴白细胞弱毒株系特异性单克隆抗体(McAb),以免疫斑点试验(DB)与免疫扩散试验(ID)相结合的方法,已成功地用于马传贫自然病马与马传贫弱毒疫苗免疫马的鉴别诊断。为方便推广应用,我们在上述成果的基础上研制了马传贫弱毒疫苗免疫马诊断试剂盒,经与原法比较,结果稳定,方法简易,适于现地使用。现将结果报告于后。