腺胃型鸡传染性支气管炎病毒的初步分离与鉴定

为了获得更多的腺胃型鸡传染性支气管炎病毒分离株并研究其生物学特性,试验从黑龙江省某鸡场发生的以腺胃肿大为特征的病死鸡中分离到1株具有冠状病毒特性的病毒,通过鸡胚传代、血凝性测定、电镜观察、RT-PCR检测和动物回归试验对其进行了初步鉴定。结果表明:该病毒分离株在SPF鸡胚上传至第5代开始出现死亡或典型的侏儒胚;病毒不能直接凝集鸡红细胞,经1%胰酶处理后表现出血凝活性,血凝效价达28;透射电镜下可见有囊膜和纤突,直径为80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;分离株病毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片段;分离株病毒第5代尿囊液接种于14日龄SPF雏鸡,复制出与临床中相似的病理变化,同时从肿大的腺胃中能重新分离到该病毒。初步确定所分离病毒为腺胃型鸡传染性支气管炎病毒。

绿头鸭IFN-α的可溶性表达及其活性分析

为了利用原核表达系统研制有生物活性的鸭IFN-α。以pMD18T-Ma IFN-α为模板扩增绿头鸭IFN-α成熟肽基因,将其克隆至原核表达载体pET-32 a中,在大肠杆菌BL21中进行变温诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,并用Western blotting进行验证。Ni2+树脂柱纯化目的蛋白后,测定其生物活性。结果表明,重组pET-32a(+)-Ma IFN-α在大肠杆菌BL21成功表达,主要以可溶性形式存在,Western blotting分析显示目的蛋白具有良好的抗原性。细胞病变抑制法测定重组鸭IFN-α的抗病毒活性约为8×104U/m L;荧光定量PCR方法检测显示表达的重组鸭IFN-α使NDV在DEF上的复制受到了明显的抑制,48 h时间点相对抑制率高达91%。这些都表明表达的重组鸭IFN-α具有良好抗病毒活性。

狐貉源犬瘟热病毒核蛋白基因的克隆及序列比较分析

参照已发表的犬瘟热病毒(CDV)核蛋白基因(N)序列设计合成了1对引物,用RT-PCR方法对从发病狐、貉中分离的MS01、SC01、ZD01三株CDV的N基因进行扩增,并分别将其PCR产物进行克隆和测序。测序结果表明:3病毒分离株N基因阅读框架全长均为1572bp,编码523个氨基酸。利用DNAstar的MegAlign生物软件,将3病毒分离株与Genbank数据库中现有的CDV毒株的N基因序列及推导出的氨基酸序列进行了同源性比较和系统进化树分析,结果发现:3病毒分离株与强毒参考株A75/17等野毒株高度同源,核苷酸同源为96.2%～99.1%,氨基酸同源为96.0%～99.8%,而与疫苗株Onderstepoor相对较远,核苷酸同源为93.6%～94.0%。N基因的系统进化关系分析显示:3病毒分离株均归为强毒株,并且与中国新疆的TN株、中国台湾的Kaohsiung株基因型最近,表现出一定的地理位置相关性。

针刺治疗对T细胞亚群影响的研究进展

特异性和非特异性免疫功能都可通过针刺的作用调节发生相应的改变。为探讨针灸对免疫作用的机理,本研究通过查阅大量国内外文献,分别从T细胞亚群的来源、分类与作用;针刺与免疫的关系以及针刺疗法对T细胞亚群的影响及在临床中的应用等方面,总结出针灸治疗可以调节Th1/Th2平衡以及Th17/Treg平衡。证实针灸治疗对免疫功能的良性双向调节作用,针灸治疗对T细胞亚群的调节作用具有复杂性、多元化的特点。

圈养狐貉源犬瘟热病毒地方分离株H基因的遗传变异分析

本研究于2004～2006年从人工饲养的发病狐貉中分离到6个CDV分离株，用RT—PCR方法扩增了其H蛋白基因片段，并对其进行了克隆和测序。测序结果表明，6个CDV分离株H基因阅读框全长均为1824bp，编码607个氨基酸，未发现碱基的插入和缺失。与Genbank中的34株CDV参考毒株的H基因序列进行比较和分析，现有的CDV毒株可以分为Asia-1、Asia-2、America-1、America-2、Europe和Arctic6个基因型，本实验中的分离株HL为Arctic基因型，与来自意大利的194／97株、丹麦的Green株同分在一组，其余5株分离株与来自日本的HAMA、UENO、Tanu96等毒株以及来自中国的TN株、GP株（大熊猫株）分在一组同属Asia-1型，表现出一定的地理位置相关性；6个分离株均与Onderstepoor、Convac等疫苗株差异较大、关系较远，提示病毒变异可能是造成目前已免疫动物仍然发生犬瘟热流行的原因之一。

狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的同源性分析

2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。

针刺对降钙素基因相关肽的影响研究进展

针刺为中医治疗疾病的常用方法,能够刺激腧穴、经络,使气血通畅、阴阳调和,从而达到预防和治疗疾病的作用。现代医学研究证实,针刺以其双向调节的特殊功效,可影响机体释放一种能够舒张血管、增强血管张力的活性多肽—降钙素基因相关肽(CGRP),从而发挥其治疗作用。兹对CGRP的来源、分型及作用机制,以及CGRP对不同靶器官的影响、针刺在治疗不同疾病中对CGRP的影响进行综述。

山核桃树枝水煎剂对S180荷瘤小鼠细胞因子及端粒酶、Cath-D表达的影响

[目的]探讨山核桃树枝水煎剂(DJM)对S180荷瘤小鼠的免疫调节及其对端粒酶、Cath-D在肿瘤组织中表达的影响。[方法]将50只清洁级昆明种小鼠随机分为5组,即正常对照组、荷瘤对照组、实验组(DJM)、环磷酰胺组(CTX)及联合用药组(DJM+CTX),除正常对照组外其余每组小鼠腋下接种S180细胞混悬液0.2m L造模,于24h后给药连续10d后,应用ELISA方法测定血清中细胞因子IFN-γ、IL-10、端粒酶含量;应用免疫组化方法测定肿瘤组织中Cath-D蛋白表达水平。[结果]山核桃树枝水煎剂(DJM)能够使S180荷瘤小鼠血清IFN-γ水平升高,IL-10水平下降,且与模型组比较有显著统计学意义(P<0.05);DJM能够抑制S180荷瘤小鼠血清端粒酶活性,且与模型组比较有显著性差异(P<0.05);DJM能使肿瘤组织中Cath-D蛋白表达下降。[结论]DJM对S180荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用可能与调节机体的免疫抑制状态及抑制肿瘤侵袭和转移相关蛋白Cath-D表达的表达有关。

3种受体抑制剂对鸡传染性支气管炎病毒感染鸡胚肾细胞的影响

本研究旨在阐明鸡氨肽酶N(chAPN)、唾液酸以及硫酸乙酰肝素在传染性支气管炎病毒(IBV)M41株感染宿主细胞中的作用以及3种受体特异抑制剂对IBV M41株在自然宿主CEK细胞内增殖能力的影响。作者选择苯丁抑制素(Bestatin)、神经氨酸酶(NA)和肝素酶Ⅲ分别作为APN、唾液酸以及硫酸乙酰肝素的抑制剂,在不同条件下,单独或共同预处理CEK细胞,而后接入IBV M41株病毒感染细胞,应用荧光定量PCR方法定量检测IBVM41株在CEK细胞中的增殖变化,应用鸡胚半数感染剂量法(EID50)测定病毒感染鸡胚能力的变化。结果表明,经Bestatin和NA处理的CEK细胞获得了抵抗IBV M41株感染的能力,与未经处理的(对照组)细胞相比,Besta-tin和NA能显著降低IBV M41株在CEK细胞内的增殖及对鸡胚的感染能力(P<0.01),且Bestatin处理后CEK细胞内的病毒增殖量显著低于NA处理后CEK细胞内的病毒增殖量,两者病毒液的EID50滴定值差异显著(P<0.01);肝素酶Ⅲ的处理则对病毒增殖无显著影响;3种受体抑制剂共同处理CEK细胞后,病毒增殖量显著下降(P<0.01),但仍有病毒增殖,病毒液的EID50滴定值为102.12±0.05.0.1mL-1。结果提示,chAPN在IBV感染宿主细胞的过程中发挥特异性受体作用,而唾液酸在IBV感染宿主细胞中发挥辅助受体作用,硫酸乙酰肝素不是IBV在自然感染中的必需因素,同时提示,可能存在其他未知受体因子参与IBV感染宿主细胞的过程。

课程考核模式改革的探索与实践

传统的课程考核模式往往注重"一张试卷定乾坤",使课程学习结果的评价不客观、不科学。本课题组在实践教学中总结西医基础课程特点,将课程考核进行综合评价:实验课程与理论课程考核结合;中期与期末考试结合;日常抽查测验与小论文结合等,探索运用综合考评方式衡量学生学习质量,在动态中管理和掌握学生的学习情况。使考核模式更加有利于促进教育教学质量的提高和创新人才的培养。

荧光定量PCR方法检测IBV病毒在CEK细胞中的动态变化

为揭示鸡传染性支气管炎病毒(IBV)在鸡胚肾细胞(CEK)中复制增殖的动态变化规律,通过实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测IBV病毒感染CEK3、6、12、24、36、48、72h后病毒增殖量的动态变化。结果显示,随着时间增加,IBV病毒增殖出现规律性变化,3～12h时IBV增殖不明显,36h时IBV开始大量复制,48h时达到高峰,但72h后有所下降。试验表明IBV在细胞内复制增殖的最佳时间在接毒后48h,其复制增殖情况与细胞状态负相关。

犬瘟热组织脏器灭活苗的制备与应用

应用PCR方法对多个毛皮动物养殖场收集了大量的疑似犬瘟热的病料进行检测,筛选的阳性病料用甲醛按常规方法制备组织脏器灭活苗,并进行无菌检验、安全试验和临床应用实验。结果显示制备的组织脏器灭活苗不含有任何细菌,对幼狐免疫后无明显的不良反应,临床紧急接种应用实验显示该疫苗有效率高达83.3%。表明该组织脏器灭活苗安全有效,可应用于毛皮动物犬瘟热的紧急接种。

传染性支气管炎DN-1分离株S1基因的克隆与序列分析

根据已发表的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列设计了1对引物,通过RT-PCR特异性扩增出DN-1株的S1基因,产物为1.7kb,与设计相符。同源性比较结果显示,DN-1株与H52、H120株的S1基因核苷酸序列的同源性分别为99.7%、99.2%,表明IBVDN-1分离株与疫苗株的S1基因具有高度的同源性。

SPOC课堂结合讨论式教学初探

生物化学课程中代谢部分途径复杂,学生存在畏难情绪,传统的教师讲授的教学方式无疑是雪上加霜,学生听这部分内容常常昏昏欲睡.将这部分内容进行教学改革已然是当务之急.因此,我们在这部分内容的教学方法上采用以问题为导向SPOC 课堂结合讨论式教学的新模式,在中医院校中西医临床专业的教学中初步实施.本文就SPOC 与讨论式教学实施方法加以阐述.

逻辑思维能力培养在医学免疫学教学中的应用分析

逻辑思维是一种重要的认知能力,在医学免疫学教学中的应用具有重要意义。通过培养学生的逻辑思维能力,可以提高其分析和解决问题的能力,加深对免疫学知识的理解和应用。文章通过文献综述的方式,探讨逻辑思维能力在医学免疫学教学中的应用,并分析其对学生的影响和教学效果。结果表明,逻辑思维能力的培养可以促进学生对免疫学概念和原理的深入理解,提高其问题解决能力和创新思维水平。

超星学习通平台在医学免疫学课程中的应用与探索

超星学习通平台作为一种在线教育平台,提供了丰富的学习资源和教学工具,为医学生的学习提供了便利和支持。在医学免疫学课程中应用超星学习通平台能够激发高校学生的学习兴趣,提高学习效率,培养高校学生的自主学习能力。文章将概述超星学习通平台在医学免疫学课程中的应用情况,旨在探讨超星学习通平台在医学免疫学课程中的应用及价值。

河北:强化旅游景区餐饮服务食品安全监管

记者从河北省食品药品监督管理局获悉,日前省食品药品监督管理局、省旅游发展委员会联合发布了《关于进一步加强旅游旺季景区餐饮服务食品安全监管工作的通知》（以下简称《通知》）,进一步加强对河北省旅游景区食品安全监管力度。

不同致病型的三株IBV与chAPN体外结合能力的比较

目的:比较不同致病型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)IBV与鸡氨肽酶N体外结合能力的差异。方法:将已构建的p ET-32a-ch APN转入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,SDS-PAGE分析表达结果。表达的His-ch APN纯化后进行western-blotting验证,应用酶促反应检测其活性。以不同稀释度的纯化ch APN包被ELISA板,加入经过荧光定量PCR方法定量的含有相同数量病毒粒子的三株不同致病型IBV(呼吸型M41、肾型S-03和腺胃型A2-2),测定三株与ch APN的结合能力。结果:p ET-32a-ch APN在受体菌内成功表达,主要以包涵体的形式存在。经纯化复性的重组His-ch APN,Western blotting分析显示其具有良好的抗原性,酶促反应显示该重组重组His-ch APN与天然的具有良好的生物活性。ELISA结果显示ch APN与三株IBV均能结合,其结合能力为A2-2>S-03>M41,并表现为剂量依赖性。结论:不同致病型IBV与ch APN的体外结合力有一定差异。

SYBR Green荧光RT-PCR法快速检测毛皮动物源犬瘟热病毒

根据犬瘟热病毒(CDV)H蛋白基因的保守序列设计了1对引物,经过各反应体系和反应条件的摸索和优化,建立了CDV的SYBR GreenⅠRT-PCR荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,建立的方法特异性较好,几种非CDV病原体检测均为阴性;敏感性实验表明其敏感性可达1个TCID50,高于普通RT-PCR和胶体金检测试剂盒;重复性试验表明所建立的检测方法非常稳定;临床检测中,在39份样品中检测到28份阳性样品,高于普通RT-PCR方法的检出率。该方法检测成本低、特异性强、敏感性高、重复性好,可推广应用于毛皮动物CDV的大规模高通量的检测。