人乳头瘤病毒16型L1蛋白B细胞表位预测

目的预测人乳头瘤病毒16型L1（HPV-16 L1）蛋白的B细胞表位。方法先从NCBI的蛋白质数据库中获得HPV-16 L1蛋白的氨基酸序列,再采用DNAStar中的Protean模块分析HPV-16型L1蛋白的二级结构、柔韧性、亲水性、表面可及性以及抗原性,然后结合吴玉章等建立的氨基酸抗原性指数方法计算其平均抗原指数（AI）,综合分析上述多个参数,预测其可能的B细胞表位区域,并用在线BLAST进行同源性匹配分析。结果综合分析多个参数,预测得出HPV-16 L1蛋白的B细胞表位可能位于第51～58、87～97、214～220、290～296、335～341、351～366、408～418、430～442和475～496肽段,进一步的同源性匹配分析显示肽段51～58、335～341、351～366、408～418、430～442以及475～496为其B细胞表位优势区域,其中肽段51（PIKKPNNN）58、351（SETTYKNTNFKEYLRH）366、408（PPPGGTLEDTY）418和430（KHTPPAPKEDPLK）442的氨基酸序列为HPV-16型L1蛋白所特有,而肽段475（KAKPKFTLGKRKATPTTSSTST）496与HPV-16 E1蛋白具有同源性、335（DTTRSTN）341的氨基酸序列与很多其他型别的HPV的L1蛋白具有同源性。结论综合多种方案预测得到HPV-16 L1的多个B细胞表位优势区域。

《药物化学》的教学方法探讨

根据药物化学培养目标和教学特点，针对药物化学教学的现状，探讨药物化学在教学内容和教学方法等方面的改革，以适应药物化学人才的培养。

噬菌体力学性能的拉伸分子动力学研究

目的噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体,在泥土和动物肠道等地方都会有发现,其生存过程会面临许多复杂环境,遭遇不同的力学作用,通过研究噬菌体的拉伸力学性能,可以了解噬菌体在拉伸过程中的分子作用机制。方法采用分子动力学方法,使用Char mm力场描述蛋白质分子,利用Gromacs软件对噬菌体进行拉伸模拟,根据模拟结果计算得到噬菌体的拉伸力学参数,并通过相关分析工具对其力学行为的分子作用机制进行分析。

泰妙菌素人工完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制

目的研制灵敏度高、特异性好的抗泰妙菌素(TML)单克隆抗体。方法用肟化法和碳二亚胺法将TML分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫原TML-BSA和包被原TML-OVA,用TML-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合并采用间接ELISA筛选抗TML杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备腹水和辛酸-硫酸铵法纯化获得单克隆抗体,并用SDS-PAGE鉴定。结果成功筛选出2株杂交瘤细胞株3B3和4A7,其细胞上清效价分别为1∶1600和1∶6400。纯化后单克隆抗体4A7的效价为5.12×10~5,半数抑制剂量(IC_(50))为0.049 ng/mL,亲和力常数Kaff为1.47×10~9 L/mol,与类似物瑞他帕林有2.7%的交叉反应率,与沃尼妙林、氟罗沙星等其他抗生素均无交叉反应。结论成功研制了抗TML单克隆抗体。

卡那霉素单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

采用EDC法制备卡那霉素(KAN)完全抗原、卡那霉素-牛血清白蛋白(KAN-BSA)、卡那霉素-鸡卵清蛋白(KAN-OVA).用KAN-BSA完全抗原免疫BALB/c小鼠,并通过杂交瘤技术制备能够稳定分泌抗KAN单克隆抗体的杂交瘤细胞(1E1).通过体内诱生腹水大量制备单克隆抗体,鉴定1E1单克隆抗体,其效价为8×105,亲和力为2.8×109L/mol,半数抑制浓度(IC50)为1.09ng/mL,与妥布霉素(TOB)的交叉反应率为53.4%,与其他氨基糖苷类化合物没有交叉反应性.利用该单克隆抗体,建立KAN间接竞争酶联免疫吸附试验(ciELISA).ciELISA检测KAN在牛奶中的回收率为64.4%~89.6%,最低检测限为1.92ng/mL.

洛克沙胂完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制

本研究以洛克沙胂(ROX)的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸(HAPA)为小分子半抗原,采用碳二亚胺法,分别将其与载体蛋白——牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原HAPA-BSA和检测抗原HAPA-OVA。经紫外光谱扫描及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,以20μg/只剂量的HAPA-BSA免疫BALB/c小鼠;选择血清效价高、敏感性强的小鼠,取脾脏进行细胞融合,制备杂交瘤细胞株。利用间接ELISA法筛选得到1株可以稳定分泌抗ROX单克隆抗体的细胞株,命名为G12;间接ELISA法测定其细胞上清效价为1:512,间接竞争ELISA测定其半数抑制浓度IC_(50)为3.147 ng/μL。经小鼠体内诱生腹水,辛酸-硫酸铵法纯化获得纯度较高的单克隆抗体,间接ELISA测定其效价为1:102 400,IC_(50)为1.433 ng/μL,且具有良好的特异性。本试验成功合成了ROX人工抗原,并制备了可以分泌高敏感性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为ROX免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白B细胞表位的初步筛选

GP4蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的次要结构蛋白,在病毒的复制与侵染中起重要作用。通过合成GP4蛋白的重叠多肽,采用间接ELISA、dot-ELISA的方法对GP4蛋白的B细胞表位进行初步筛选,得到1个免疫显性肽段Ⅰ(50)SCLRHGDSSSPTIRKSS(67),并对其抗体水平进行测定,为PRRSV的抗体检测及其新型表位疫苗的研究奠定基础。

蓝舌病Ⅰ型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析

为分析蓝舌病Ⅰ型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40μg/只和20μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。