中药活性成分皂苷免疫作用的研究进展

皂苷一种从中药中提取出来的三萜类化合物,具有广泛的生理活性。本文从皂苷对机体非特异性免疫、特异性免疫的增强作用以及抗肿瘤活性、作为佐剂等的研究进展方面进行了综述。

一种新型纳米消毒剂对耐碳青霉烯病原菌的抑菌效果评价

目的评价一种新型纳米长效消毒液对耐碳青霉烯病原菌的抑菌效果。方法选取耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumonia, CR-KPN)、鲍曼不动杆菌(carbapenem resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)、铜绿假单胞菌(carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa, CRPA)各5株,试验组使用新型纳米长效消毒液,对照组分别使用主要成分为复合双链季胺盐的消毒液和不同浓度的复方含氯消毒液,制备消毒剂纸片并贴于接种细菌的平皿表面,37℃培养24 h后测量抑菌圈平均直径,判断抑菌效果及抑菌时效。结果试验组在24 h内对CR-KPN和CRAB的抑制效果优于各对照组,抑菌圈平均直径分别为(17.88±0.95)和(17.48±0.61)mm,与各对照组相比差异均有统计学意义,且抑制作用至少持续3 d;试验组与对照组对CRPA均无抑制作用。结论新型纳米消毒液对CR?PA无抑制作用,对CR-KPN和CRAB的抑制效果较好,但随着时间的延续,抑制效果呈下降趋势。

2014-2016年单中心肝病患者病原菌分布及耐药性分析

目的了解肝病患者主要病原菌检出及分布情况,以及病原菌的耐药性趋势变化,为临床应用抗菌药物提供参考。方法收集2014-2016年的临床分离株,采用自动化仪器法或纸片扩散法按统一方案进行细菌药物敏感性试验,根据CLSI标准判断结果。结果 3年共检出4 251株病原菌,主要来源于胆汁引流液、随机血液和腹水。分离数列前6位的分别是大肠埃希菌(15.01%)、凝固酶阴性葡萄球菌(12.66%)、屎肠球菌(11.93%)、肺炎克雷伯菌(10.61%)、铜绿假单胞菌(8.45%)和嗜麦芽窄食单胞菌(5.74%);CRE检出128株、分离率6.89%,CRAB检出63株、分离率74.67%,CRPA检出203株、分离率56.55%,VRE检出32株、分离率4.60%,MRSA检出38株、分离率27.04%;大肠埃希菌仅对哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦和阿米卡星的敏感性较好,肺炎克雷伯菌对三代和四代头孢、哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦和阿米卡星的敏感性较好,鲍曼不动杆菌仅对头孢哌酮舒巴坦的耐药性较低,铜绿假单胞菌对碳氢酶烯和氨曲南的耐药性逐年递增、对阿米卡星和头孢哌酮的敏感性最好,肠球菌属对替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素敏感性最好,凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林、红霉素和环丙沙星严重耐药,金黄色葡萄球菌对红霉素耐药性较高,白色念珠菌对各抗真菌药物的敏感性均较好。结论细菌耐药形势严峻,需进一步加强对细菌耐药性的监测,提高医务人员的合理用药意识,防止或减缓耐药菌株的产生。

血流感染老年住院患者血液标本非发酵革兰阴性杆菌分布及耐药性观察

目的 了解2016—2020年某三甲医院血流感染老年患者血液标本分离的非发酵革兰阴性杆菌分布及耐药性情况,为老年患者血流感染早期经验用药提供参考。方法 收集2016—2020年某三甲医院老年患者血液标本分离的非发酵革兰阴性杆菌资料,保留同一患者每种细菌第一株,剔除重复菌株后纳入分析。用仪器和纸片扩散法进行药敏试验。结果 2016—2020年某三甲医院老年患者血液标本分离的非发酵革兰阴性杆菌检出率较高的包括铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。铜绿假单胞菌对多黏菌素、阿米卡星、庆大霉素敏感率较高;鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感率普遍较低,敏感率较高的是庆大霉素、妥布霉素;嗜麦芽窄食单胞菌对米诺环素、左氧氟沙星、复方磺胺甲恶唑敏感性均较高。耐碳青霉烯铜绿假单胞菌与耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的检出率分别为45.45%、72.22%。铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药率随患者年龄增长呈升高趋势;鲍曼不动杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌对各种抗菌药物的耐药率在不同年龄组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 2016—2020年某三甲医院血流感染老年患者血液标本分离的非发酵革兰阴性杆菌主要为铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌。鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感率普遍较低,耐碳青霉烯铜绿假单胞菌与耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌的检出率较高,铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药率随患者年龄增长呈升高趋势。铜绿假单胞菌血流感染建议选用头孢他啶联合环丙沙星或阿米卡星,鲍曼不动杆菌所致感染经验选用抗菌药物比较困难,经验治疗嗜麦芽窄食单胞菌所致的血流感染首选复方磺胺甲恶唑。

医疗废物锐器盒病原微生物污染状况与使用时限研究

目的了解医疗废物锐器盒不同使用时间病原微生物污染状况,探讨锐器盒使用的合理期限,为医疗废物的管理提供参考。方法随机抽取某传染病三级甲等专科医院病区治疗车上使用后的2 L锐器盒12个,检测锐器盒内部以及外表面不同时间节点乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)病毒载量和细菌菌落数,同期取3个未使用的锐器盒作为空白对照。结果采集实验组和对照组四个节点(48 h、72 h、5 d、7 d)锐器盒外表面、内容物的洗脱液标本各60份,均未检测到HIV、HCV,锐器盒的外表面标本均未检测到HBV,仅有一个锐器盒使用后72 h内容物洗脱液检测到HBV,含量为2.20E+01 IU/mL。使用后锐器盒内部洗脱液的染菌量变化:使用后5 d锐器盒内容物洗脱液100%有细菌生长,使用后7 d 12个锐器盒内容物洗脱液均细菌载量不可计数。锐器盒外表面细菌载量为1～9 CFU/cm^2。感官指标中所有锐器盒内、外表面均未发生明显改变,未产生不适气味。结论随着锐器盒贮存时间延长至7 d,锐器盒外表面细菌菌落数无明显增长,也未检测到HIV、HBV、HCV,建议不强制要求产生量小(即使用后48 h锐器盒达不到3/4贮存量)的科室锐器盒使用时限设为48 h。

重组辛德毕斯病毒E基因痘苗病毒的构建

为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别连接至痘苗病毒转移载体pSTK,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP。采用脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性。结果证明辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性。表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒的成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础。

2014-2018年单中心金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药情况研究

目的分析2014-2018年金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S.A)的临床分布特征和耐药情况,为临床干预与研究提供依据。方法收集2014年1月1日至2018年12月31日首都医科大学附属北京佑安医院的S.A临床分离株,采用自动化仪器法或纸片扩散法按统一方案进行细菌药物敏感性试验,应用WHONET 5.6和SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 5年共检出S.A 387株,占全部检出菌的4.2%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus, MRSA)平均检出率为31.7%。分离出S.A菌株最多的标本来自呼吸道(118株)、血液(102株)和腹水(61株),占全部标本分离菌株的72.7%。S.A对青霉素的耐药率最高,为89.9%,其次是红霉素57.2%、苯唑西林29.4%、克林霉素27.0%和四环素23.9%,仅在2018年检出1株利奈唑胺耐药菌株,尚未检出对万古霉素、替考拉宁耐药的菌株。结论 2014-2018年我院S.A分离率、MRSA检出率和耐药性均低于全国平均水平,但呈增长趋势,应予以重视,进一步采取有效控制措施控制,避免医院感染。

人民币升值对我国出口贸易结构的影响

汇率是一个国家进行国际经济活动时最重要的综合性价格指标,在国际金融和国际贸易活动中执行着价格转换职能,是调节一国贸易收支的重要杠杆.汇率主要通过本币升值和贬值改变一国商品在国际市场上的相对价格进而改变其商品的价格竞争力来影响对外贸易结构.本文从汇率波动角度出发分析我国出口贸易结构现状问题,概述人民币升值对我国出口贸易结构的影响及其优化措施.

2019年-2021年某三甲医院两院区急诊死亡病例分析

目的通过对某三甲综合医院两院区急诊死亡病例的分析与比较,了解其所在区域急诊死亡患者的流行病学特点,为制定切实有效的干预措施提供依据。方法回顾性分析2019年1月1日-2021年12月31日2239例急诊死亡病例,采用国际疾病分类标准(ICD-10)进行死因编码,运用描述性统计和卡方检验等方法,分析两院区急诊死亡病例的流行病学特征。结果中心院区男女性别比例为1.49:1,副中心院区为2.02:1,差异有统计学意义(P=0.02);在年龄分布上,占比随年龄段增长而增加,其中30岁以下、50岁~59岁、70岁~79岁及80岁及以上年龄段两院区比较差异有统计学意义(P<0.001);根本死因前5位为循环系统疾病、恶性肿瘤、呼吸系统疾病、消化系统疾病和猝死,中心院区因呼吸系统疾病和消化系统疾病导致的死亡患者占比高于副中心院区,副中心院区因循环系统疾病和损伤、中毒、意外伤害等导致的死亡患者占比则高于中心院区,差异有统计学意义(P<0.05)。结论建议重视对男性和老年人群的健康教育,以及循环系统疾病、肿瘤和呼吸系统疾病的预防和治疗。在农村地区,还需加强安全教育,提高居民健康素养;同时,改善中心城区居住环境,倡导居民健康生活,以降低急诊死亡的风险。

Quil A对O型口蹄疫疫苗的免疫增强作用

目的探讨Quil A对口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)疫苗的免疫增强作用。方法将O型FMDV抗体阴性的仔猪随机分为4组:1组首次免疫O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;2组首次免疫Quil A+O型口蹄疫核酸苗pVIRIL18P1,第2次免疫重组鸡痘苗vUTAL3CP1;3组两次均免疫猪O型口蹄疫合成肽疫苗;4组两次均免疫PBS。首次免疫后0、14、42 d,检测猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体及细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ的水平;首次免疫后42 d,检测T淋巴细胞增殖水平。结果 2次免疫后,2组猪血清中FMDV VP1结构蛋白抗体水平、细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFNγ水平及T淋巴细胞增殖率均显著升高。首次免疫后42 d,2组上述指标中除IL-2水平外,与3组和4组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01);除IL-2、IL-10和IFNγ水平外,与1组比较差异均有统计学意义(P<0.05或<0.01)。结论 Quil A对O型口蹄疫疫苗具有较好的免疫增强作用。

Quil A与PICKCa的免疫调节作用研究

为了探讨Quil A、PICKCa及二者联合使用对实验动物的免疫调节作用,试验分别给小鼠和猪注射Quil A、PICKCa及两者混合物,于注射后不同时间采血,检测细胞因子水平;注射后第7天检测猪T淋巴细胞的体外增殖反应。结果表明:小鼠和猪在注射药物之后均未出现任何不良反应;试验组动物的细胞因子水平均显著高于对照组;猪T淋巴细胞体外增殖能力也显著高于对照组。说明Quil A、PICKCa对小鼠和猪具有良好的免疫调节作用。

多中心统一的环境清洁消毒措施对ICU患者和周围高频接触物体表面多药耐药菌检出率的影响

目的了解医院重症监护病房(ICU)患者和周围高频接触物体表面多药耐药菌(MDROs)污染情况以及采取统一的环境清洁消毒措施后MDROs的清除效果。方法 2014年12月-2015年4月48例ICU患者和周围384个高频接触物体表面为未干预组,2015年4月-2015年12月46例ICU的患者和周围368个高频接触物体表面为干预组;制定统一的环境清洁措施并实施,对ICU患者和周围高频接触物体表面运用显色培养基进行检测分析。结果两组患者的MDROs筛查阳性率差异无统计学意义,干预组患者鼻拭子筛查出的肺炎克雷伯菌(KPN)显著多于未干预组(P<0.05);80.00%以上的物体表面不止培养出一种MDROs,干预后环境MDROs检出率由31.77%下降至13.32%(P<0.05),其中吊塔/床头桌、袖带、呼吸机管路、监护仪面板等干预后检出率下降显著(P<0.05),在环境表面检出MDROs排列前三位的分别是耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)、鲍氏不动杆菌(ABA)、耐万古霉素的肠球菌(VRE),干预后MRSA、VRE、ABA的检出菌株数量有显著的下降。结论统一环境清洁措施可以减少ICU患者周围高频接触物体表面18.00%的MDROs,措施对于医务人员常接触的物体表面更有效,对于不同的目标菌和不同的环境表面,环境清洁操作流程需要进一步研究。

QuilA为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫评价

目的选用Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感病毒多表位DNA疫苗免疫小鼠,评价免疫效果。方法将pVAX1-H3-EHA-H1HA1new,pVAX1-H3-H1HA new,pVAX1-EHA等3种候选核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,进行细胞免疫和体液免疫水平检测。结果体液免疫检测显示,免疫后35d,pVAX1-H3HA-EHA-H1HA1new免疫组小鼠产生H1亚型流感病毒特异性体液免疫应答,且抗体水平略高于其他免疫组。细胞免疫检测显示,当受到H1亚型流感病毒抗原刺激时,各免疫组T淋巴细胞均表现出特异性增殖反应和CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞增多,各免疫组小鼠血清IL-2、IL-4、IL-10及脾脏淋巴细胞IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05)。结论以Quil A为佐剂的H1、H3亚型流感多表位疫苗可诱导免疫小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答。

新型鸡痘病毒穿梭载体的构建及其体外表达

为构建用于筛选的新型鸡痘病毒载体,采用染色体步移技术对鸡痘病毒282E4株TK基因的下游序列进行测序,并结合扩增出的左右同源重组臂TKL、TKR片段、启动子、MCS及终止信号构建出三表达盒穿梭载体pTKE3。采用基因工程技术将绿色荧光蛋白EGFP基因克隆入3个启动子的下游,构建出pTKE3-A、pTKE3-B、pTKE3-C验证表达盒质粒。结果显示,构建的3个验证质粒分别与鸡痘病毒282E4株共转染鸡胚成纤维细胞,均可在转染12h后观察到绿色荧光。结果表明,构建的三表达盒载体均可成功表达外源基因,这为进一步构建多价重组鸡痘病毒活载体疫苗奠定了基础。

H5-H7双价禽流感核酸疫苗免疫研究

由于禽流感的高度变异性,免疫后不同亚型之间难以得到交叉保护,以致病毒得以逃避宿主免疫系统的监视,多价核酸禽流感疫苗具有可以保护不同亚型病毒攻击的特点。本试验设计并构建了包含禽流感H5HA和H7HA1基因的双价真核表达质粒pV-H5-H7及单独表达H5HA和H7HA1的pV-H5和pV-H7HA1。通过RT-PCR,间接免疫荧光（IFA）等方法验证构建质粒的正确性和其表达蛋白的免疫原性。0,21 d分别免疫6~8周龄的BALB/c小鼠,设立双价疫苗组,单表达免疫组和对照组。免疫后35 d用HPAIV H5N1进行致死性攻击。结果显示免疫组均可刺激机体产生H5特异性抗体,pV-H5-H7诱导产生的抗体对H5N1的攻毒保护率为80%,而pV-H5单表达的攻毒保护率也为80%。表明本实验构建的双价禽流感核酸疫苗的免疫效果与单表达组相当（P〉0.05）,为多价禽流感核酸疫苗的研制提供了基础。

环境清洁相关措施减少患者多药耐药菌定植感染研究进展

目的多药耐药菌(MDROs)已成为医院感染的重要病原菌,可增加患者病死率,多药耐药鲍氏不动杆菌和铜绿假单胞菌检出率逐年升高,特别是对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率明显上升。预防MDROs感染的干预措施70%可直接或间接作用于患者周围环境,笔者对环境清洁相关措施减少患者MDROs定植感染的有效性进行综述。

东北地区猪流行性乙型脑炎血清流行病学调查与分析

为研究东北地区猪乙型脑炎的流行情况,试验采用酶联免疫吸附法对采自东北地区4个省(区)的2 161份猪血液进行了血清流行病学调查和分析。结果表明:吉林省猪流行性乙型脑炎的阳性率为30.72%,辽宁省为28.28%,内蒙古自治区为12.05%,黑龙江省为10.87%;种母猪阳性率为51.02%,商品猪为10.30%;吉林省17个猪场的阳性率高低不等,有些猪场已呈现流行趋势。

基因Ⅲ型乙型脑炎病毒Real-time PCR检测方法的建立及应用

目的建立针对云南地区流行的基因Ⅲ型乙型脑炎病毒株Real-time PCR检测方法。方法根据云南地区分离株乙型脑炎病毒株(Yunnan0901)基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒,以此为模板进行SYBR GreenⅠReal-time PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法,并与普通RT-PCR方法相比较。结果建立的SYBR GreenⅠReal-time PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系。与RT-PCR方法相比,SYBR GreenⅠReal-time PCR的灵敏度高10倍,而且不与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸发生非特异性扩增,具有良好的特异性。用该方法检测云南部分地区的蚊虫样品,其中库蚊、按蚊乙型脑炎病毒阳性率分别为17.4%和30.7%,且主要为基因型Ⅲ型。结论本实验建立的检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的SYBR GreenⅠReal-time PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等特点,可应用于乙型脑炎疫情的监测。

共表达PRRSV ORF5和ORF6基因重组核酸疫苗对断奶仔猪的免疫效果研究

目的评价猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6对断奶仔猪的免疫效果。方法分别以pVAX-ORF5-2A-ORF6+Quil A、pVAX-ORF5-2A-ORF6、pVAX空质粒和PRRSV弱毒疫苗对断奶仔猪进行免疫接种,检测各免疫组血清中特异性抗体效价、细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平、T淋巴细胞增殖程度和CTL杀伤活性,评价其免疫效果。结果重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6能够刺激猪体产生PRRSV特异性抗体,促进致敏T淋巴细胞增殖,诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性;免疫仔猪血清IL-2和IFN-γ水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),加入免疫佐剂Quil A的实验组IFN-γ水平显著高于未加佐剂的实验组(P<0.05)。结论重组核酸疫苗pVAX-ORF5-2A-ORF6可诱导免疫仔猪产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答,有望成为抗PRRSV感染的新型候选疫苗。

表达Apoptin基因抗肿瘤双特异性重组腺病毒的构建及鉴定

为研发一种安全、特异、高效的抗肿瘤基因治疗候选药物,本试验基于人端粒酶启动子(hTERTp)、人5型腺病毒复制必需基因(E1a)和特异性抑癌基因(Apoption),利用RAPAd.Ⅰ腺病毒载体系统,构建了一种具有肿瘤特异性杀伤和特异性复制能力的双特异性抗肿瘤重组腺病毒Ad-VT。并利用人肝癌细胞(HepG-2)、人肺癌细胞(A549)、人宫颈癌细胞(Hela)、人胚胎肺细胞(WI-38)和非洲绿猿肾细胞(Vero)对hTERTp的肿瘤特异性进行鉴定。结果显示,hTERTp可在HepG-2、A549和Hela等肿瘤细胞内特异性启动外源基因的表达,而在WI-38、Vero等正常细胞内不能启动相关基因表达。用RT-PCR及Western-blot等方法对Apoptin基因和E1a基因的转录和表达进行了鉴定。结果表明,Ad-VT能够有效表达Apoptin和E1a等外源基因。