脂肪酶的固定化及其在生物柴油制备中的应用

脂肪酶（1ipase EC3．1．1．3）又称三酰基甘油酰基水解酶，属于特殊的水解酶，它的天然底物是油脂．除了具有高催化效率、专一性、无污染性等生物酶的一般特性外，一个突出的特点是在异相体系中具有催化活性．即在油水界面能够催化酯水解或醇解、氨解、酯合成、酯交换、内酯合成、高聚物合成以及手性药物的拆分等反应^[1]。

乳酸菌的筛选及生物学特性的研究

从酸奶样品中分离、筛选出5株乳酸菌,经过形态学测试及生理生化反应试验,最后确定其中2株为嗜热链球菌.

随机突变对扩展青霉脂肪酶最适作用温度的改善

利用error-prone PCR和staggered extension process(StEP)相结合的方法对扩展青霉脂肪酶(PEL)进行定向进化,构建含有随机突变基因的重组质粒pPIC3.5K-lip-mutantx,电转化引入毕赤酵母GS115中,进行异源表达。高通量筛选获得一株最适作用温度比野生型提高了5℃的突变株。15%的SDS-PAGE表明突变体分子量与野生型一致,约为28kDa。基因测序结果表明,突变体第270位丙氨酸变为苏氨酸,后者是氢键的供体,能形成具有稳定空间结构的氢键,使酶结构更加稳定,在高温下更适于与底物结合。

高中生物探究式教学模式浅析

当前,随着教育工作的发展,高中生物教学取得了很大进步.众所周知,高中是学生的重要发展阶段,而生物则是高中的一门重要学科.生物学科的特点在于其的实践性与理论性并重,故而在高中生物教学中,非常适合于应用探究式教学模式.本文主要针对高中生物探究式教学模式进行了浅要分析,旨在给予广大高中生物教师一定的启发.

高中生物必修二“孟德尔的豌豆杂交实验”第一课时教学设计浅谈

高中生物必修二"孟德尔的豌豆杂交实验"这节课是以孟德尔发现遗传因子的探索过程为主线,通过教学内容和实验引导学生掌握遗传学基本知识和遗传实验的基本方法。该章节的教学内容是接下来学习伴性遗传规律、生物变异和进化的基础,是高中生物的重点章节之一。

Pseudomonas sp. RT-1低温脂肪酶的纯化及酶学特性

Pseudomonas sp. RT-1是从低温环境下分离的低温脂肪酶产生菌,对该菌产生的胞外脂肪酶（PL-1）进行纯化,并对其酶学特性进行初步研究。Pseudomonas sp. RT-1的发酵上清液经60%（NH4）2SO4沉淀、12~14000截留相对分子质量（MWCO）透析袋透析、Sephadex G75分子筛和超滤浓缩后,得到了电泳纯的P-L1。SDS-PAGE电泳估算其表观相对分子质量为4.43×104。对其酶学特性研究表明：PL-1是低温碱性脂肪酶且对有机溶剂的耐受性较好。10~40℃内有较好的催化活性,最适作用温度为18℃;0~50℃该酶的稳定性较好,当温度超过50℃时则容易失活;最适作用pH为10.2,且pH在9~11时较稳定;该酶对有机溶剂的耐受性较好,10mmol/L的Ca2＋、K＋、Na＋和Fe3＋对PL1的酶活力有促进作用,其中Ca2＋促进作用最大,提高了146.07%,而10mmol/L的Cu2＋、Co2＋、Mn2＋、Mg2＋、Zn2＋、Ba2＋和Al3＋对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Al3＋抑制作用最强,抑制了98.55%;PL-1对C链长度小于或等于12的短链脂肪酸形成的甘油三酯具有较强的水解能力;1mmol/L的去氧胆酸盐（desoxycholate）和0.01%的Triton X100对酶活力具有提高作用,分别提高了30.74%和11.83%;0.01%的SDS和Tween-80、1mmol/L的EDTA和尿素对酶活都有抑制作用,其中EDTA的抑制作用最大,抑制了80%。

易错PCR对扩展青霉脂肪酶基因PEL的定向进化

以带有野生型扩展青霉碱性脂肪酶cDNA全长的载体psk-lip07为模板,利用易错PCR技术以及高通量筛选,最终获得了一株最佳突变体GS-pPIC3.5K-lip07-ER04,其最适作用温度比野生型提高10℃,酶活提高了约22%,热稳定性Tm值也提高了3.28℃。基因测序结果表明,脂肪酶(PEL)第82位的Lys突变成Arg,第241位的Glu突变成Pro。

P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E。将该质粒电转化至毕赤酵母Pichiapastoris GS115中,进行异源表达。与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40°C温育处理30min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%。叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51°C,比野生型酶PEL提高了2.81°C,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25°C。通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料。