等热量低碳水化合物高蛋白饮食对非酒精性脂肪性肝病血清脂质的影响

目的 研究等热量低碳水化合物高蛋白饮食(CRD)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者的影响及形成的脂质代谢差异。方法 收集2019年1月—2022年6月在上海市普陀区中心医院消化内科诊断为NAFLD的患者25例与健康志愿者25例,NAFLD患者采用CRD干预。采集受试者基本信息,检测肝功能、血脂等生化指标,使用超高效液相色谱串联高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap/MS)技术进行血清脂质分析。主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别法(OPLS-DA)用于分析血清脂质代谢标志物。结果 经过4周的饮食干预后,患者的体质量由(77.88±10.76) kg降至(76.62±10.78) kg,(P<0.001)、体质指数(BMI)由25.63(24.40-26.80)kg/m^(2)降低至24.88(24.5-26.34)kg/m^(2)(P<0.01)、腰围无显著性变化(P>0.05)。CRD干预后NAFLD患者AKP水平[(3.12±23.90) U/L]显著低于干预前[(93.36±30.41) U/L],(P<0.01)。GGT、ALT水平分别由干预前的(43.84±27.78) U/L、35.0(25.0-76.5)U/L降低至(35.16±17.51) U/L和28.0(14.5-45.5)U/L(均P<0.05)。患者血清TC水平由4.56(3.82-6.31)mmol/L降低至3.15(1.79-4.32)mmol/L(P<0.001)。CHE、AST、TG、HDL、LDL水平无显著变化(均P>0.05)。脂质组学研究发现,CRD干预后,血清中OAFHA、LPC、MG、LPG、PI、PS、PG、PA和SM的含量发生显著变化(P<0.05)。结论 CRD干预可以减轻NAFLD患者体质量、降低BMI和腰围,改善患者肝功能和血脂异常。脂质组学分析表明,CRD饮食能缓解脂肪肝脂毒性、调控鞘脂代谢进而改善NAFLD的发生、发展。本次研究发现的53个脂质成分亦可作为NAFLD的生物标志物。

等热量低碳高蛋白饮食结合有氧运动干预非酒精性脂肪性肝病的血清代谢组学分析

目的收集非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者的血清并对生活方式干预前后的血清代谢生物标志物变化情况进行分析。方法收集2019年1月—2020年1月于上海市普陀区中心医院消化科及住院部诊断为NAFLD的患者23例,患者采取有氧运动及等热量低碳水化合物高蛋白饮食进行干预,从体检中心选择13例健康志愿者作为对照组。NAFLD患者于干预前后进行常规的基本信息采集,并分别采血2次检测肝功能、血糖、血脂等指标,另分装部分血清用于血清代谢组学分析。将血清样本通过处理后使用超高效液相色谱串联高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap/MS)进行分析。采集的数据经Compound Discover处理后运用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别法分析构建患者与正常健康人的差异血清代谢物谱,并对差异代谢通路进行富集分析。正态分布的计量资料两组比较采用独立样本t检验;非分正态分布的计量资料两组比较采用Wilcoxon非参数检验。结果经生活方式干预后,患者的BMI及体质量均明显降低(P值均<0.01);血清生化指标ALP、Alb、GGT、ALT表达水平均降低(P值均<0.05),总蛋白(TP)显著降低(P<0.01),胆碱酯酶(ChE)、AST、血糖(GLU)改善不明显;血脂四项中TG的水平显著减低(P<0.01),HDL-C、LDL-C、TC改善不显著。代谢组学研究发现NAFLD患者生活方式干预前后,血清中的代谢产物有33种代谢物发生了明显改变。此外,PCA结果显示NAFLD患者经干预后,体内的代谢产物水平趋于健康人。通过信号通路分析,发现运动饮食主要影响了胆汁酸、不饱和脂肪酸合成及苯丙氨酸代谢等通路。结论生活方式干预可不同程度的减轻NAFLD患者的体质量,改善血清生化指标,改善NAFLD患者的异常代谢途径,这对指导临床医生为NAFLD患者制订合理的饮食及运动策略,预防NAFLD进展具有一定的临床价值和意义。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析加味参芪地黄汤的化学成分

目的采用超高效液相色谱-离子阱-静电场轨道阱质谱(UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)技术分析鉴定加味参芪地黄汤中化学成分。方法采用Warters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,流动相:0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B),梯度洗脱,流速为0.3 ml/min。质谱采用电喷雾(ESI)离子源及静电场轨道离子阱质量分析器,采集质谱碎片信息为正、负离子模式,通过与对照品的相对保留时间进行比对,并根据质谱碎片信息进行分析,同时,结合文献报道,实现对加味参芪地黄汤中化学成分的准确鉴定。结果研究发现加味参芪地黄汤水煎剂采用UPLC-LTQOrbitrap-MS技术共鉴定出62个化学成分,包括13个芳香酸类、9个黄酮类、8个皂苷类成分、5个芳香胺类、3个酮酸类、2个酚类、1个芳香醌类及其他成分。结论本研究所采用的鉴定分析方法高效、准确,可应用于加味参芪地黄汤中化学成分的鉴定分析,为其后期的药效物质基础作用机制提供重要的实验数据。

基于脂质组学研究黄芩-黄连药对的降脂作用

基于脂质组学研究黄芩-黄连药对干预非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠的作用机制。将36只SD大鼠分为空白组、模型组、不同剂量黄芩-黄连组和辛伐他汀组,每组6只。除空白组给予普通饲料外,其余各组给予高脂饲料,饲喂4周后,开始给予药物干预,12周后处理。使用试剂盒检测血清肝功能和血脂指标,通过HE染色与油红O染色法评价肝组织的病理形态。使用LC-MS/MS技术检测大鼠脂质水平变化,采用多元统计分析筛选其中的差异脂质代谢物,并绘制脂质代谢通路。进一步通过Western blot验证脂质相关的蛋白水平变化。结果表明,与空白组比较,模型组大鼠谷丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c)水平显著升高(P<0.01),γ-谷氨酰基转移酶(gamma-glutamyl transferase,γ-GT)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-c)含量显著降低(P<0.01);黄芩-黄连干预后显著回调。HE染色与油红O染色表明不同剂量的黄芩-黄连均可逆转大鼠肝脏的脂肪性病变,且呈剂量依赖性。脂质组学分析发现模型组与空白组大鼠的脂质代谢存在明显差异,有54个脂质发生了显著改变,主要有甘油脂类、磷脂酰胆碱类、鞘脂类等。给药后,有44个脂质差异物趋于正常水平,这表示不同剂量的黄芩-黄连给药后显著改善了NAFLD大鼠的脂质代谢水平。Western blot结果表明,黄芩-黄连能显著降低甘油三酯合成酶1(TG-synthesis enzyme 1,DGAT1)、脂素1(recombinant lipin 1,LPIN1)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)和乙酰辅酶a羧化酶1(acetylCoA carboxylase 1,ACC1)蛋白的水平,升高ACC1的磷酸化水平,这些变化可显著降低TG的合成,且提高其分解速度,提升机体的脂质代谢水平,最终实现降脂的作用。黄芩-黄连能够通过抑制脂肪酸和TG的合成改善NAFLD。

葛根芩连汤抑制TNF-α诱导的Caco-2细胞氧化损伤配伍规律研究

目的探讨葛根芩连汤缓解肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人结肠癌Caco-2细胞氧化应激损伤作用及其配伍规律。方法将Caco-2细胞随机分为对照组、TNF-α(80μg/L)组、小檗碱(6.73μg/mL)组及葛根芩连汤配伍组(全方组、去甘草组、去葛根组、葛根甘草组和黄芩黄连组,18.75μg/mL)。除对照组外,其余各组细胞给予TNF-α预处理2 h,再给予相应药物处理24 h。MTT检测Caco-2细胞活力;流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法检测细胞中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;qRT-PCR和Western blotting分别检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、还原型辅酶I/II醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1]和血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)m RNA和蛋白表达;荧光显微镜观察Nrf2蛋白入核情况。结果5.0~25.0μg/mL的含药培养基和10~80μg/L的TNF-α对Caco-2细胞活性无明显影响。与TNF-α组比较,各给药组Caco-2细胞ROS水平显著降低(P<0.01);除去葛根组和黄芩黄连组外,其余各组MDA水平显著降低(P<0.01),GSH水平明显升高(P<0.01);除去葛根组外,其余各给药组Nrf2基因表达明显升高(P<0.01),全方组和去甘草组NQO1基因表达明显升高(P<0.05、0.01),全方组和葛根甘草组HO-1基因表达明显升高(P<0.05、0.01);除黄芩黄连组外,其余各组Nrf2和HO-1蛋白表达显著升高(P<0.01);除去葛根组和黄芩黄连组外,其余各组NQO1蛋白水平显著升高(P<0.05、0.01),Nrf2蛋白入核明显增加(P<0.05、0.01)。结论缺少葛根对葛根芩连汤抑制Caco-2细胞氧化应激损伤有较大影响。