基于Cyt-B基因鉴定肉制品中鸭源性成分的研究

基于Cyt-B基因设计特异性引物,建立高效快速检测肉制品中鸭源性成分的方法。选取Cyt-B基因作为检测靶标,应用生物信息学技术设计各物种特异性引物,建立聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系检测肉制品中鸭源性成分,并将鸭特异性基因片段进行克隆和测序分析。该检测体系可以对鸭肉含量为1pg的肉制品实现稳定检测,灵敏度髙,特异性好。测序分析结果显示克隆的特异性基因序列与Genbank中相同物种(序列ID:EU755253.1)的核苷酸同源性达100%。该文建立的基于Cyt-B基因的PCR检测方法,可实现对肉制品中鸭源性成分高效快速的检测,既为肉类产品DNA鉴定试剂盒的研发提供试验基础,也有望对肉制品的市场监管和相关执法提供有力的技术保障。

中药材沙苑子及其伪品的超微指纹特征研究

目的:应用扫描电子显微镜技术对沙苑子及其伪品紫云英子超微结构进行研究,建立沙苑子的超微指纹鉴别方法。方法:分别在35倍、800倍、3000倍电镜下观察沙苑子正品(扁茎黄芪种子)及其伪品紫云英子的超微指纹特征,并进行对比分析研究。结果:沙苑子和紫云英子在颜色、形状上略有差异,在扫描电镜下观察其超微结构有显著差异。结论:本研究建立的超微指纹鉴别方法可简便、快速、准确的区分沙苑子和紫云英子,为沙苑子药材鉴别提供科学依据。

中药材地肤子与其伪品灰菜子超微指纹特征的对比研究

目的研究中药材地肤子及其伪品灰菜子的鉴别,建立中药材地肤子超微指纹特征鉴定标准。方法应用扫描电镜技术分别在70倍、800倍、3000倍电镜下对地肤子及其伪品灰菜子表面超微指纹特征进行比较研究。结果地肤子与其伪品灰菜子表面超微指纹特征存在明显区别。结论该方法可通过表面的超微指纹特征的研究快速准确鉴别地肤子与其伪品灰菜子,可为地肤子真伪鉴别提供一种有效、简单的快速鉴定方法。

阿胶真伪鉴定方法的建立与应用

针对阿胶中动物源性DNA成分,建立阿胶真伪鉴定方法,定量分析阿胶样品中驴源性成分。DNA纯化柱法建立阿胶基因组DNA提取方法,阿胶标准品及常见伪品验证引物特异性,克隆目的片段,重组质粒pGMT-Equ66 bp构建阳性对照标准;灵敏性试验确定阿胶驴源性DNA成分最低检测限,制备标准曲线,建立定量分析方法,分析22批市售阿胶。结果表明,所提取阿胶基因组DNA质量浓度为(82.17±0.09)~(172.81±1.81)ng/μL,A 260/A 280为(1.561±0.07)~(1.821±0.04)。特异性试验结果显示,阿胶标准品有单一特异性条带(或特定温度单一峰)。灵敏性试验结果表明,CT值小于32为阿胶正品,22份阿胶样品CT值为19.83~28.85,均为正品阿胶,与《中国药典》质谱检测结果一致。该研究应用分子生物学技术,有效提取阿胶基因组DNA成分,成功构建阿胶中驴源性DNA成分定量分析体系,可有效鉴定阿胶真伪,有助于阿胶质量监管的实施,对研究阿胶指纹检测方法及研制检测试剂有重要的指导意义。

核糖核酸还原酶基因对虫草素的转录调控作用

检测和分析核糖核酸还原酶大亚基(RNR-LC)基因、小亚基(RNR-M2)基因在不同蛹虫草菌株中m RNA的相对表达量与虫草素含量的变化关系,探究核糖核酸还原酶在虫草素合成途径中的转录调控作用。检测不同蛹虫草菌株虫草素含量,采用荧光PCR技术对蛹虫草RNR-LC基因、RNR-M2基因表达的m RNA进行定量分析,并应用双内参基因对试验数据进行校正。以虫草素含量最低的野生蛹虫草组为对照,米基虫草组RNR-LC、RNR-M2基因的m RNA表达量分别是野生蛹虫草组的1.28倍和1.47倍,蚕蛹虫草组分别是其2.35倍和3.84倍。与对照组相比,RNR-M2 mRNA表达随虫草素的增加总体呈现升高的变化规律。两种基因在不同蛹虫草菌株中的相对表达量存在显著性差异(p<0.05)。RNR-M2基因在高虫草素菌株中存在明显的表达优势,而RNR-LC基因表达量与虫草素含量无明显变化关系,二者不存在协同调控作用。推测RNR-M2基因在虫草素合成途径中起着重要的正向调控作用。

灵芝多糖抗肿瘤免疫调节机制的研究进展

灵芝多糖是灵芝水溶性提取物的主要生物活性成分。作为一种免疫调节剂对癌症患者具有明显的辅助治疗作用。灵芝多糖抗癌作用主要通过免疫调节、抗增殖、促凋亡、抗转移和抗血管生成的作用。本文综述了灵芝多糖调节机体固有免疫系统、T/B淋巴细胞及细胞因子等免疫机制发挥抗肿瘤作用。

驴源性DNA检测试剂盒的研制与评价

本实验旨在研究开发常见肉样DNA提取及驴源性DNA检测试剂盒。应用分子生物学技术,提取常见肉样DNA并进行PCR鉴定,克隆种属特异性DNA片段,并组装驴源性DNA提取及检测试剂盒;对试剂盒的特异性、稳定性和重复性进行评价。结果表明:驴源性DNA检测试剂盒能在6 h内准确检测出样品中的驴源性成分,试剂盒反复冻融5、10、20次后依然有效,可于-20℃保存1年。综上可知,驴源性DNA检测试剂盒对驴肉制品检测简单方便、准确有效,适用于驴肉及驴肉制品的快速鉴别。

中药材川贝母聚合酶链式反应法-限制性片段长度多态性分析的鉴别及应用研究

目的应用中药材川贝母聚合酶链式反应法-限制性片段长度多态性分析的鉴别试剂盒,对北京市、天津市、长春市、吉林市等全国16个城市的70个样品进行真伪鉴定。方法试剂盒法提取川贝母基因组DNA,进行PCR反应和RFLP鉴定,并应用2015年版《中国药典》方法进行比较和复检。结果采用试剂盒法提取出的川贝母基因组DNA纯度良好,OD260/OD280值均在1. 90～2. 1之间,浓度能达到PCR的要求;对70份样品进行检测,正品川贝母37份,伪品33份,伪品率为47. 1%。结论试剂盒法提取核酸的纯度和浓度能满足PCR及RFLP的要求,对全国16个城市川贝母样品进行检测结果表明,市场上川贝母伪品率较高,有关部门应加强对中药市场的质量管理。

原发性高血压SCNN1G基因多态性特征分析

目的:本实验通过分析SCNN1G基因rs5729的基因型及等位基因分布特点,探究此基因单核苷酸多态性与原发性高血压(EH)的关系。方法:采用高分辨率熔解曲线法(high resolution melting,HRM)对rs5729位点进行基因多态性分型检测。样本来自2018-06-2019-07吉林市中心医院高血压患者115例(病例组)和非高血压人群88例(对照组)。同时,在上述样本中随机选取81例采用测序法进行验证。结果:病例组的基因型频率是TT 67.82%、AT 25.22%、AA 6.96%,T、A等位基因频率分别为80.43%和19.57%;对照组中rs5729位点TT、AT、AA基因型频率分别为89.77%、9.10%、1.13%;T、A等位基因频率分别为94.32%和5.68%;病例组和对照组的基因型与等位基因频率在2组间分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利用HRM法对SCNN1Grs5729位点进行基因分型,发现其在高血压人群中分布存在差异。

阿胶中动物源性DNA提取方法的改进及驴源性成分鉴定

目的从高温熬制的阿胶制品中提取微量动物源性DNA,建立并优化聚合酶链反应(PCR)方法快速鉴定阿胶中驴源性成分,建立分子生物学鉴定阿胶品质新方法。方法应用DNA纯化柱替代十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)方法中酚、氯仿等毒性较大的有机溶剂提取阿胶中驴源性基因组DNA,并对SDS-PK方法进行优化。结果提取驴源性基因组DNA最佳阿胶样本量为0.20 g,水浴消化1 h再进行DNA纯化柱处理可快速获得高质量阿胶基因组DNA,纯度均在1.70~1.80之间,可达到(187.8±0.56)ng·μL^-1。应用特异性引物进行PCR扩增、克隆、测序,与Gen Bank已登记的驴物种(MG931481.1)相似性为100%。结论本实验能在90 min内从深加工的阿胶及阿胶制品中提出动物源性基因组DNA片段,提取的DNA纯度和浓度能满足阿胶分子生物学鉴定的要求,建立的PCR方法可快速鉴定阿胶中驴源性成分;克隆得到驴特异性基因片段可作为鉴定阿胶真伪的标准化阳性对照,预期将广泛应用到阿胶及相关制品的质量监督工作中。