获得重构基因的简捷方法——重叠延伸PCR

目的 :构建 IFN- β信号肽序列与白细胞介素 18(IL- 18)成熟肽的重组嵌合分子。方法 :从 BAL B/ c鼠基因组 DNA扩增 IFN- β信号肽序列 ;由小鼠 Pro- IL- 18真核表达质粒获得 IL- 18成熟肽序列 ;以非对称 PCR技术得到IFN- β信号肽编码区的反义链和 IL- 18成熟肽正链 ;采用重叠延伸 PCR(SOE- PCR)产生具有 IFN- β信号肽与 IL- 18成熟肽的嵌合编码序列 ;定向连方式构建嵌合 IL- 18的表达质粒并测序。结果 :连续胶 PAGE表明非对称 PCR可分别扩增出两个靶序列的特异性单链 ,大小符合预期。IFN- β信号肽对称 PCR产物与 IL- 18非对称 PCR产物混合作为模板 ,进行重叠延伸 ;电泳分析可见清晰的嵌合片段 ;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成 ,且无移码。结论 :重叠延伸 PCR是一种获得重构基因的简捷方法。

双重政策下汽车动力电池再制造闭环供应链决策与协调

考虑回收补贴与碳交易双重政策下由电池生产商和零售商组成的汽车动力电池再制造闭环供应链,构建由生产商主导的集中定价决策模型与分散定价决策模型,采用数值仿真的方法量化分析动力电池梯次利用质量门槛、回收补贴、动力电池再制造碳排放量三种因素对回收价格、供应链利润以及回收价格与销售价格比值的影响。结果表明:集中决策能够带给消费者更低的购买价格和更高的回收价格;梯次利用质量门槛、动力电池再制造碳排放量的降低均会带来回收价格、供应链利润以及回收价格与销售价格比值提高;回收补贴的升高会带来回收价格、供应链利润以及回收价格与销售价格的比值的增加。

用有限差分法分析列车对隧道中电磁波传播特性的影响

文章推导出复杂边界条件下二维Helmholtz方程的差分公式,实例分析了列车对矩形隧道和半圆形隧道中电磁波截止频率的影响、列车-矩形隧道中主模的衰减常数。实例计算结果表明:有限差分法的计算结果与有限元法计算结果完全一致,有限差分法是分析列车-隧道中电磁波传播问题的一种有效方法。

白念珠菌感染特异性Csa2蛋白双抗体夹心ELISA体系的建立与评价

目的以白念珠菌Csa2蛋白为靶标,建立双抗体夹心ELISA检测体系,评价该方法的检测灵敏度和特异性。方法构建pPIC9K-Csa2重组表达载体,电转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达、纯化重组蛋白rCsa2。rCsa2蛋白分别免疫新西兰大白兔和豚鼠制备免疫血清。以纯化兔多抗和豚鼠抗血清配对,利用棋盘滴定法,确定最佳实验条件,建立双抗体夹心ELISA检测系统。检测rCsa2和白念珠菌不同培养时间的上清,确定检测方法的灵敏度;检测其他3种念珠菌、5种曲霉、新型隐球菌和马尔尼菲青霉的培养上清,评价检测方法的特异性。结果成功构建表达载体并获得真核表达重组蛋白rCsa2,经SDS-PAGE鉴定相对分子质量(Mr)为13 300,符合预期值;Western blot法证实该蛋白可与特异性抗体结合。免疫动物获得高效价免疫血清,并以此成功建立双抗体夹心ELISA,可检测rCsa2蛋白的灵敏度约为240 pg/mL,并最早可检测到培养18 h的白念珠菌培养上清,与其他10种临床常见真菌的培养上清无交叉反应。结论建立了有较高的检测灵敏度和特异性的Csa2的双抗体夹心ELISA,为区别诊断白念珠菌感染提供新的方法。

考虑风险和时间窗约束的冷链多式联运路径优化研究

针对冷链物流高时效性、高成本、高风险的特点,综合考虑中间节点及目的地时间窗约束、运输温度以及各地区外界温度差异性的影响、运输途中及节点换装风险因素的影响,构建了以运输费用和运输风险最小化为目标的数学模型并采用NSGA-II算法求解。以重庆到上海的冷藏集装箱多式联运网络为算例,对运输路径和联运方式进行决策,并针对收货时间窗因素进行灵敏度分析,验证了模型和算法的有效性。结果表明:算法可求解模型有效帕累托解集,且在不同的收货时间窗下帕累托解集存在差异,运输费用和运输风险的偏好都会影响联运方案的选择。

应用6σ质量管理方法评价c16000全自动生化分析系统检测质量水平

目的应用六西格玛(6σ)质量管理方法评价c16000全自动生化分析系统质量水平,以促进质量改进,提高检测质量。方法收集2018年海南省人民医院c16000全自动生化分析系统42项生化检测项目的室内质量控制(IQC)和室间质量评价(EQA)数据,通过IQC数据计算累计合成变异系数(CV),根据EQA数据评估偏移(Bias),依据我国卫生行业标准WS/T403-2012要求的允许总误差(TEa)计算各检测项目的西格玛σ水平及质量目标指数(QGI),分析导致性能不佳的主要原因。通过σ性能验证图评价各项目的分析性能及应采用的质控规则。结果 42项生化检测项目中有13项(31%)检测水平≥6σ,3项(7%)检测水平为5σ~6σ,7项(17%)检测水平为4σ~5σ,8项(19%)检测水平为3σ~4σ,7项(17%)检测水平为2σ~3σ,4项(9%)检测水平<2σ。在<6σ的检测项目中,2项需优先改进正确度,21项需优先改进精密度,6项正确度和精密度均需改进。结论 6σ质量管理方法是临床生化检验项目质量控制的有效管理方法,可提示生化检测项目需要改进的方向,促进临床实验室生化检验水平的提高。

金标记免疫层析法测定沙眼衣原体检测下限的确定

目的比较金标记免疫层析法与定量PCR的方法检测沙眼衣原体的结果,确定金标记免疫层析法检测沙眼衣原体的最低下限。方法25例临床标本同时进行金标记免疫层析法与定量PCR的方法检测,比较这两种检测方法的结果差异。结果定量PCR方法检测结果拷贝数在105指数级的标本8例。其金标记免疫层析法检测2例为阴性,6例为弱阳性。结论金标记免疫层析法检测沙眼衣原体的最低下限为105拷贝数。

星形胶质瘤患者癌组织中S100、Survivin和Ki-67表达及其临床意义

目的观察S100、Survivin和Ki-67在星形胶质瘤患者癌组织中的表达情况及其临床意义。方法 68例脑星形胶质瘤患者采用免疫组化方法检测不同临床病理级别肿瘤组织中S100、Survivin和Ki-67的表达情况,分析上述指标与星形胶质瘤恶性程度的相关性。结果正常脑组织中S100阳性率为100.0%,低级别胶质瘤组织中为76.67%,高级别为18.42%,随肿瘤恶性程度增高,S100阳性率明显降低(χ2=12.79,P<0.05)。正常脑组织中Survivin阳性率为0.0%,低级别胶质瘤组织中为30.0%,高级别为73.68%,随肿瘤恶性程度增高,Survivin阳性率明显升高(χ2=14.41,P<0.05)。正常脑组织中Ki-67阳性率为5.0%,低级别胶质瘤组织中为30.33%,高级别为78.95%,随肿瘤恶性程度增高,Ki-67阳性率明显升高(χ2=12.69,P<0.05)。Survivin表达与Ki-67呈高度正相关(r=0.31,P<0.05)。结论 S100低表达,Survivin和Ki-67高表达提示星形胶质瘤恶性程度较高。S100、Survivin和Ki-67可反映星形胶质瘤的增殖状态,有助于鉴别肿瘤的恶性程度。

浅谈如何在药理学实验教学中激发学生的创造性思维

目的研究加在药理学实验教学中激发学生的创造性思维的方法和效果。方法对我校2009年以及2010年药理学实验开课学生进行研究,其中2009年实验课学生设为对照组,2010年实验课学生设为实验组,对实验组进行干预性实验教学,对照组进行常规实验教学,对两组学生进行托伦斯创造思维测验和考试成绩测试。结果实验组学生其流畅性、独特性、标题抽象性以、总体评分以及考试成绩均明显优于对照组(P<0.05)。结论在药理学实验教学中通过改革其教学方式可以明显激发学生的创造性思维能力。

加强药理学实验教学中学生综合能力的培养

目的研究加强药理学实验教学对学生综合能力培养的作用。方法对2008级以及2009级专科生进行研究,2008级学生采用常规实验教学,2009级学生进行加强药理学实验教学。结果 2009级专科生其学生满意度以及考核成绩均明显优于2008级专科生(P<0.05)。结论加强药理学实验教学可明显提高学生对教学满意度以及其考核成绩,增强专科生的综合能力。

武汉市城市交通可持续发展研究

本文简要介绍武汉市交通存在的主要问题,并分析其产生的原因。在此基础上,提出了促进武汉城市交通可持续发展的主要对策和措施。

季节性产品供应链中的供需管理策略研究

文章针对季节性产品的需求特性提出了基于供应链的季节性产品供需管理策略,并在分析促销对需求的影响的基础上,结合总体计划的制定,探讨了促销时机的选择问题。

应急物流供应链构建研究

文中在阐释应急物流及其供应链概念的基础上,分析了应急物流供应链的特点及流程,构建了应急物流供应链结构模型,探讨了应急物流供应链的构建原则、参与主体构成、协同机制的建立及信息平台的构建等相关问题。

模拟电路教学改革初探

作为电子类专业教学中的重要组成部分,模拟电路教学具有较强的实践性、理论性和工程性。传统模拟电路教学已经无法满足学生的学习需求,并且对学生未来的学习与发展造成严重的制约。因此,在素质教育理念的背景下,教师需要及时更新自己的教学理念,以学生的实际学习情况为基础,结合有效的方式来提升模拟电路教学的质量与效率。基于此,本文针对模拟电路教学的改革进行探究。

复杂直流电路的分析方法

复杂直流电路是电路知识中的难点但同时也是电路知识中的重点,复杂直流电路中包含欧姆定律、叠加原理、基尔霍夫定理等等知识,所以计算、分析的过程比较复杂。笔者在文中对复杂直流电路的分析方法,做出了相关的分析。

交通工程项目物流管理问题探讨

科学合理地进行物流规划与管理是优化实现交通工程项目目标的重要保证。本文基于交通工程项目物流活动特点的分析,针对目前交通工程项目物流管理中存在的主要问题,提出了加强交通工程项目物流管理的措施。

就业市场导向下电子专业实践性教学改革的思考

随着我国高等教育就业体制的转变,我国高校人才培养模式和市场需求之间的差距越来越大,使大学生就业难问题日益凸显,尤其是一些应用性较强的专业。本文以电子专业为例,探讨以就业市场为导向的实践性教学模式,对提高电子类专业大学毕业生的就业竞争力、满足企业对实用型人才的迫切需求具有深远的现实意义。

列车顶部对半椭圆形隧道中电磁波截止频率的影响

列车的存在改变了隧道的截面形状和尺寸,从而影响了电磁波的截止频率。本文在对列车-隧道导波问题进行物理建模的基础上,应用FEM法研究了列车的高度、位置以及半椭圆形隧道和列车顶部椭圆的偏心率的变化对半椭圆形隧道电磁波截止频率的影响。其结果对铁路隧道、公路隧道、煤矿井下巷道等有限空间的无线通信有重要的参考价值。

列车对半椭圆形隧道中电磁波截止频率的影响

将隧道看成波导,列车的存在改变了隧道的截面形状和尺寸,从而影响了电磁波的截止频率.在对列车—隧道导波问题进行物理建模的基础上,应用有限元法研究了列车的高度、宽度和位置以及半椭圆形隧道椭圆的偏心率的变化对半椭圆形隧道电磁波截止频率的影响.

流式细胞术检测细胞毒方法的建立

目的 :建立一种用流式细胞仪测定细胞介导细胞毒活性的方法。方法 :用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记靶细胞 ,再用碘化丙碇 (PI)标记DNA筛选细胞膜已破坏的靶细胞。效靶比为 10 0∶1～ 6 2 5∶1,共孵育时间为 1～ 6小时 ,流式细胞仪收集 10 0 0个靶细胞并测定被杀细胞的百分率。结果 :CFSE是合适的标记靶细胞的荧光染料 ,18小时后也能很好地区分效靶细胞 ;靶细胞的自然死亡率低于 5 % ;杀伤百分率随着效靶比和共孵育时间的增加而增加。最佳效靶比为5 0∶1～ 2 5∶1,共孵育时间为 2～ 4小时。结论 :CFSE PI双荧光染料标记的流式细胞分析检测细胞毒具有多个优点 :避免放射性试剂的应用 ,敏感性增强 ,单细胞水平的分析。