抗人DcR3单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗DcR3单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性,并应用于ELISA、Western blot、Flowcytometry(FCM)检测。方法以纯化的可溶性DcR3(sDcR3)免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DcR3 mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DcR3mAb的亚类。用ELISA方法测定抗DcR3 mAb与sDcR3结合的特性,SDS-PAGE鉴定抗DcR3 mAb与SW480细胞上清中DcR3结合的特性,以鉴定mAb的特性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。Western blot检测mAb的特异性及应用,并用所获抗DcR3单克隆抗体(mAb)通过流式细胞仪检测肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结果获得4株可分泌DcR3 mAb的杂交瘤细胞系ZZ-393、ZZ-394、ZZ-151和ZZ-268。其中DcR3 mAb ZZ-268(下文简称为ZZ-268)的Ig亚类为IgG1(κ型);腹水效价为1×10-5;亲和常数为1.28×109水平;ZZ-268和ZZ-151可识别与其他2种抗体不同的抗原表位;Western blot证实,获得的ZZ-268可特异性地识别DcR3;通过流式细胞术可敏感地检测到不同肿瘤细胞表面DcR3的表达水平。结论获得4株抗DcR3的mAb,其中ZZ-268效价高、特异性强,将此抗体用于膜DcR3与sDcR3的检测分析。

微卫星DNA标记开发技术进展及其在经济植物研究中的应用

微卫星分子标记技术被广泛应用于分子生物学研究中,具有多态性高、重复性好、共显性表达、杂合度高等特点,在种群遗传多样性、遗传图谱构建等领域发挥不可替代的作用。近年来,随着新一代高通量测序技术的进一步成熟,简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)标记的开发技术与应用得到了进一步的发展。现主要对基于高通量测序的微卫星分子标记最新开发技术进行介绍,并从遗传多样性分析、遗传图谱构建、品种鉴定及分子辅助育种等方面,总结近年来SSR标记技术在经济植物研究中的最新应用,最后对SSR技术的应用前景进行展望,以期为利用微卫星技术进行经济植物研究提供参考。

Fas胞外区基因的构建、表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的构建Fas胞外区(eFas)基因的表达载体,表达纯化重组蛋白,进行多克隆抗体的制备,为进一步功能研究奠定基础。方法通过重叠PCR获得eFas基因的编码序列,构建pET-22b(+)/eFas表达载体,转化大肠杆菌Rosetta-gami,IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和纯化,SDS-PAGE鉴定重组蛋白的纯度。将纯化的eFas融合蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,通过ELISA方法检测多克隆抗体的效价。结果获得了eFas的编码序列与表达载体,目的蛋白主要在包涵体中表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化的重组蛋白纯度达95%以上。结论eFas融合蛋白基因的构建、表达、纯化以及多克隆抗体的制备,为进一步研究Fas提供了材料。

非小细胞肺癌中GRIM-19和HMGN5的表达及其临床意义

目的:研究非小细胞肺癌中诱导细胞凋亡相关基因 19(gene associated with retinoid/interferon induced mortality 19,GRIM-19)联合高迁移率蛋白5(high mobility group protein 5,HMGN 5)的表达及其与临床各病理学特征间的关系。方法:应用免疫组织化学技术检测67例非小细胞肺癌组织和39例远端正常组织(距癌灶>5 cm)中GRIM-19、HMGN 5的表达情况,并分析其与各临床病理特征之间的可能关系。结果:67例非小细胞肺癌组织中,GRIM-19阳性表达率为53.7%,低于在远端正常组织中的表达( P <0.01);HMGN 5阳性表达率为59.7%,高于在远端正常组织中的表达( P <0.01)。非小细胞肺癌组织中GRIM-19 、HMGN 5的表达可能有相关性( P <0.01)。结论:GRIM-19、HMGN 5在非小细胞肺癌中有不同程度的表达,可能与非小细胞肺癌发生、发展有关;临床检测非小细胞肺癌中GRIM-19、HMGN 5的表达,可能为治疗非小细胞肺癌提供新的理论研究基础和思路。

乳腺癌分子分型与新辅助化疗后P-gp和Topo-Ⅱ表达的相关性研究

目的探讨不同分子分型的乳腺癌患者在新辅助化疗后P—gP和Topo～Ⅱ表达的相关性研究。方法选取本院86例乳腺癌患者，其中常规手术切除的乳腺癌标本的48例，术前新辅助化疗的乳腺癌标本38例，应用免疫组织化学法检测P—gp和Topo-Ⅱ的表达，分析新辅助化疗的临床病理特征及在不同分子分型中乳腺癌对其的影响。结果对照组P—gP、Topo-Ⅱ的阳性表达分别为43．8％、39．6％；观察组分别为39．5％、34．2％。P—gP的阳性表达与乳腺癌患者的年龄、组织学分级及淋巴结转移有关；Topo-Ⅱ的阳性表达与乳腺癌患者的年龄、组织学分级有关。在LuminalB型中，P—gP的阳性表达在两组之间有统计学差异，P〈O．05；在HER-2过表达型中Topo-Ⅱ的阳性表达中两组之间有统计学差异，P〈0．05。结论乳腺癌中P—gP的高表达可能是多药耐药的高危因素；而Topo-Ⅱ表达量的高低与化疗药物作用成正相关，P—gp和Topo-Ⅱ的表达对判断乳腺癌的预后及用药选择方面提供依据。

高强度聚焦超声治疗系统治疗子宫小肌瘤的临床效果

目的探讨HIFU-2001型高强度聚焦超声治疗系统治疗子宫小肌瘤的效果。方法选择2012年5月—2014年5月我院肿瘤科收治的子宫小肌瘤26例,均予高强度聚焦超声治疗系统治疗,观察比较治疗后3个月、6个月和1年的效果,治疗前及治疗后3个月、6个月、1年肿瘤直径和体积,并观察治疗后不良反应发生情况。结果本组治疗后3个月、6个月及1年效果判定一致:显效5例,有效16例,部分有效2例,无效3例,总有效率88.5%。治疗显效、有效和部分有效23例治疗后3个月、6个月及1年的肿瘤直径和体积与治疗前比较均有不同程度的缩小,治疗后3个月、6个月及1年随着时间推移,肿瘤直径及体积逐渐缩小,不同时间两两比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。8例术后第1次月经量较前减少,3例术后自觉腹部轻度疼痛,2例术后阴道少量出血,给予相应处理或未做处理自行恢复,治疗后随访1年未再发生不良反应。结论高强度聚焦超声治疗系统治疗子宫小肌瘤效果可靠、安全性高,且无创伤及严重不良反应。

同步推量调强放疗治疗多发脑转移瘤的疗效分析

目的了解同步推量调强放疗治疗多发脑转移瘤近期临床疗效和毒性反应。方法 43例多发脑转移患者随机分为同步推量调强放疗组（调强组22例）与序贯推量适形组（适形组2 1例）。调强放疗组：全脑放射剂量45Gy,1.8Gy/次;转移病灶55Gy,2.2Gy/次,5次/周,共25次。适形组：全脑放疗剂量40Gy,2Gy/次,5次/周,共20次;局部缩野总剂量50-60Gy,2Gy/次,5次/周,共5-10次。结果调强放疗组和适形放疗组近期有效率（CR）分别为90.9%和6 1.9%,具有显著性差异（P〈0.05）。调强组和适形组1年生存率分别为分别为59%和42%。不良反应发生率调强组和对照组,无显著性差异（P=0.846）。结论同步推量调强放疗治疗多发脑转移瘤是一种更有效的放疗手段,值得临床推广。

诱骗受体3在胃癌组织中的表达

本研究旨在观察诱骗受体3（DcR3）在胃癌组织中的表达，现报道如下。

调强放疗联合腔内放疗同步热疗治疗中晚期宫颈癌的临床疗效

目的探讨调强放疗结合腔内放疗同步热疗治疗中晚期（Ⅱb~Ⅳa）宫颈癌的近期疗效及毒副反应。方法选取2012年6月至2014年4月间收治的60例中晚期宫颈癌患者,按照随机数字表法分为实验组和对照组,每组30例。实验组患者在调强放疗联合腔内放疗的基础上加用热疗,对照组患者采用调强放疗联合腔内放疗,比较两组患者的近期临床疗效和毒性反应。结果实验组患者完全缓解（CR）21例,部分缓解（PR）7例。对照组CR 17例,PR 5例,实验组和对照组患者的缓解率分别为93.3%和73.3%,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验组和对照组的毒性反应均为骨髓抑制、消化道反应、放射性直肠炎及放射性膀胱炎,实验组患者毒性反应发生率略高于对照组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论调强放疗结合腔内放疗同步热疗是治疗中晚期宫颈癌的一种较好方案,值得临床推广应用。