醒脾胶囊调控血管活性肠肽干预功能性腹泻脾虚证大鼠机制研究

目的探讨醒脾胶囊通过血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)修复肠道屏障且调节RhoA/ROCK2信号通路抑制肠道运动亢进,缓解功能性腹泻(functional diarrhea,FDr)脾虚证的作用机制。方法将50只SPF级大鼠按照随机数字表均分成正常组,模型组,洛哌丁胺组和醒脾胶囊高、低剂量组。采用高浓度番泻叶水煎剂连续灌胃14 d制备脾虚型FDr膜型。依据临床脾虚泄泻诊断标准,动态采集并量化排便情况、体质量、饮食量、疲劳程度、皮毛情况等大鼠宏观体征;28 d测定小肠推进率并取结肠组织和腹主动脉血;采用酶联免疫吸附试验测定血清和结肠组织中VIP含量,通过检测苏木精-伊红(HE)染色法和蛋白质印迹法评价结肠屏障完整性、肠道运动及相关通路蛋白的表达情况。结果与正常组相比,14 d后,模型组大鼠便多稀溏,体质量增长减缓,喜眯眼蜷卧,毛枯少泽,食少乏力,量化后各项指标评分及总分显著升高(P<0.01),小肠推进率明显上升(P<0.01),血清和结肠组织中VIP含量升高(P<0.01)。HE染色提示模型组结肠黏膜层不完整,可见明显充血、水肿,结肠紧密连接蛋白Occludin和Claudin-5表达下调(P<0.01),结肠收缩蛋白RhoA和ROCK2表达均上调(P<0.01,P<0.05)。与模型组相比,各治疗组大鼠腹泻及其伴随症状和结肠组织切片的病理表现有不同程度缓解;其中,高剂量的醒脾胶囊可有效缓解腹泻并促进结肠黏膜结构恢复整齐致密同时有效减轻充血水肿,显著上调Occludin和Claudin-5表达(P<0.01),降低血清和结肠组织中VIP含量(P<0.01),显著减缓小肠推进率(P<0.01),明显下调结肠组织收缩蛋白RhoA和ROCK2表达(P<0.01)。结论醒脾胶囊可有效缓解大鼠脾虚症状并改善腹泻,调控VIP从上调肠屏障紧密连接与抑制肠道过亢运动两个方面达到缓解脾虚型FDr的功效。