qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达

奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3kJ/mol降低到最小-80.5kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。

奎尼酸的生物合成与应用

奎尼酸是一种具有极高价值的精细化工产品和医药中间体,在医药、食品、化工等行业均有广泛的应用价值。奎尼酸广泛存在于多种植物中,其咖啡酰类衍生物在抗病毒、治疗心血管疾病等研究中得到越来越多的关注和应用。目前获得奎尼酸的方法主要有4种,即植物提取法、化学合成法、酶工程法和微生物发酵法。随着分子生物学的不断发展,结合现代生物技术,应用基因工程方法,必将成为获得奎尼酸的重要途径。本文综述奎尼酸的分布、生物合成及其应用。

pH值响应的共轭聚合物纳米粒子的制备、表征与细胞成像研究(英文)

共轭聚合物纳米粒子(CPNs)因其高荧光亮度、低毒性、表面易修饰的特性,近年来在生物材料和生物医药领域备受关注。本论文中我们设计、合成了一种新的pH值响应共轭聚合物(PFPA),并通过纳米沉淀方法制备了其纳米粒子。动态光散射实验表明PFPA纳米粒子在水中分散性较好,其粒径约为8nm。PFPA纳米粒子的最大吸收峰为379nm,其摩尔吸光系数为2.1×106 L·mol-1·cm-1;另外该纳米粒子的荧光最大发射峰为422nm,其荧光量子产率为35%。PFPA纳米粒子在汞灯(100瓦)照射下表现出较好的光稳定性,另外MTT实验表明其具有较低的细胞毒性。该纳米粒子具有pH响应的光学特性,并可以用于活细胞成像。PFPA纳米粒子在癌症诊断、药物与基因传递等方面具有潜在的应用价值。

浅析半坡乡提高小麦单产的关键技术

本文介绍了半坡乡小麦种植的基本情况,分析了存在的问题,提出了提高单产的关键技术,为今后发展小麦种植提供技术参考。

实施有轨尝试学习搞好初高中数学衔接

自2005年暑假后，全国很多省市的学校将参加国家数学新课程标准的实验，并使用新教材。新的数学教材精简、整合了传统高中数学教学的内容，与义务教育初中阶段的课程相比，其教学容量和教学难度大为提高。然而，高中新课程标准中数学的课时数却减少了。因此，如何研究新教材，如何按高中生的个性特点和认知结构设计出指导学生高效学习的方法，使学生能够适应新教材，顺利完成初高中数学衔接的学习任务，适应新课程标准的要求，成为我们高中数学教师急需解决的问题。为此，我们提出了“有轨尝试学习”这一切实可行的学习方法。

BGA芯片的制球重新利用

手机主板中有很多芯片是BGA封装的，而回流焊期间会出现一定比例BGA焊接缺陷，如虚焊、短路等等。对于这种BGA的维修，一般只是把这个芯片取下，然后重新焊上新的芯片。可是取下的芯片就没用了，实际上很多这类芯片本身并没有坏，如果给芯片重新制球，就可以重新利用，从而节约成本。

0201元器件的应用试验

现在，手机产品正向功能更强大方面发展，要想在同样的空间内使手机有更强大的功能，只有用和更小的元器件，使手机有更多的空间来贴装功能更强大的芯片。因此，0201元器件也就成了我们的一个趋势。我们公司对0201元器件进行了一系列应用的试验。

半坡乡玉米纹枯病综合防治策略

本文介绍了玉米纹枯病的病原与症状、发生规律,提出了采用农业防治和化学防治相结合的综合防治策略。

水稻旱育稀植高产栽培技术

从苗床准备、整地作畦、播种、苗期管理、大田管理、综合防治病虫草害、适期收获等方面介绍了水稻旱育稀植高产栽培技术,为水稻种植户提供技术参考。

回流焊中元件立碑的防止

SMT的发展导致我们面临更多的问题，和更多的挑战，尤其元件尺寸越来越小，体积越来越轻，重量也更低，从而给生产工艺带来更多问题，如：立碑（Tombstone）效应就是最常见的一种。本文就回流焊接过程中出现的立碑现象做点个人见解。

班主任如何转化班级后进生

陶行知先生说过:“你的教鞭下有瓦特,你的冷眼里有牛顿,你的讥笑里有爱迪生。”班主任工作的核心是德育工作,德育工作中最令班主任头痛的是转化后进生,班主任如果不注意关爱后进生,不努力促使其进步,他们很难感受班级的温暖从而更加自卑,觉得在班上可有可无,有的后进生不仅耽误自己的学习还会影响整个班集体。转化后进生是班主任所肩负的重大而艰巨的任务,也是教育工作者不容推卸的责任。班主任要想转化后进生就必须要从观察、了解做起,“不抛弃,不放弃”只是开始,用耐心和真诚的爱长期坚持,家长和其他老师共同辅助,我相信他们会一天比一天有进步。

共轭聚合物生物电子体系研究进展

共轭聚合物类的有机共轭分子由于其特殊的电子离域效应,具有优异的光电性能.另外该类材料骨架结构丰富、能带可调、易于修饰与制备,使得这类材料除了在发光二极管、场效应晶体管和光伏电池等方面有广泛的研究和应用之外,在生物成像、生物传感、疾病诊断和治疗中也发挥了重要作用.本文综述了近年来基于水溶性共轭聚合物的生物电子体系构建和应用,主要介绍了水溶性共轭聚合物在光合作用、生物燃料电池、生物光伏、生物电子催化等方面的最新研究进展.

大肠杆菌aroE基因的克隆与表达

目的:克隆表达大肠杆菌莽草酸脱氢酶基因aroE,并测定其生物学活性。方法:根据大肠杆菌中aroE基因的序列设计了一对引物,利用PCR技术扩增得到aroE基因,将其克隆入高效原核表达载体pBV220,以双脱氧法进行测序,然后对该重组子利用温度诱导表达,并测酶的生物活性。结果:构建了aroE基因的克隆和表达重组子,aroE基因获得高效表达,SDS-PAGE图谱显示新增30×103蛋白带,酶活性测定结果表明奎尼酸脱氢酶的相对酶活性是5.6倍。结论:实现了莽草酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效表达,证明了其具有奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌种奠定了基础。

基于水溶性共轭聚合物的多色荧光体系的构建及生物医学应用

共轭聚合物(CPs)具有强的光捕获能力和独特的荧光信号放大效应,已经被广泛地用于生物大分子的检测以及细胞及动物水平上的荧光成像.在过去的十几年里,为了满足多色荧光检测及成像的需要,科研工作者设计并发展了一系列基于共轭聚合物的荧光共振能量转移(CPs-FRET)的多色荧光体系.这类多色荧光体系具有荧光强度高、光稳定性好以及细胞毒性低的优点.利用这类体系在单波长的激发光激发下即可实现目标分子的多色荧光检测及多色荧光成像.本文阐述了CPs的FRET机制以及基于CPs-FRET的多色荧光体系的构建方法,同时介绍了近期这类体系在生化检测和细胞成像领域中的研究进展以及目前所存在的问题和未来的发展展望.

寡聚芴纳米粒子的制备、表征与细胞成像应用

利用Suzuki偶联反应合成了疏水性寡聚芴分子OF,并对其在氯仿溶液中的紫外吸收和荧光光谱进行了表征,表明其具有较大的摩尔吸光系数(1.08×105mol-1 L cm-1)和高荧光量子产率(96%).OF分子分散到水中可形成纳米粒子,动态光散射实验表明其粒径大小约为230 nm.该纳米粒子在水相中仍保持了较大的摩尔吸光系数以及高的荧光量子产率.我们利用MTT的方法对OF纳米粒子对人肺癌A549细胞的毒性进行了测试,结果表明其具有低的细胞毒性,因此可以用于细胞成像.共聚焦激光扫描显微镜成像结果显示OF纳米粒子主要分布在细胞质中,特别是在近核区域周围.与溶酶体染料Lyso Tracker Red共定位结果表明OF纳米粒子主要存在于溶酶体中,因此可以用于对溶酶体的特异性荧光成像.

共轭聚合物在病原微生物识别、成像与杀伤中的应用研究

共轭聚合物骨架为离域电子结构,当在侧链引入正电荷基团或者选择性基团时,能与病原微生物通过静电作用或者特异性作用等结合,从而实现对不同病原微生物的识别与成像.此外,共轭聚合物还具有光毒性与暗毒性,光照下直接敏化或者通过能量转移产生活性氧,而且末端带有季铵盐基团具有广谱杀伤能力,所以共轭聚合物可用于病原微生物的杀伤.本文综述了共轭聚合物在病原微生物识别、成像与杀伤领域中的研究进展.