水稻(Oryza sativa)新型液泡Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的特征分析和表达

以拟南芥AtNHX1cDNA片段作为探针,筛查水稻盐胁迫植株叶片cDNA文库,获得与AtNHX1同源的水稻新型液泡Na+/H+逆向转运蛋白基因(OsANT1)。序列分析表明,OsANT1全长cDNA为2 178 bp,包括一个长度为1608 bp的完整开放阅读框,编码535个氨基酸残基。在DNA水平上,OsANT1基因含有15个外显子和14个内含子,长度为4 835 bp。OsANT1含有12个跨膜域,系统进化树分析结果表明,与来自拟南芥、水稻、小麦、玉米、大麦、马蔺和芦苇等的Na+/H+逆向转运蛋白高度同源。盐胁迫条件下,OsANT1的表达具有盐分诱导特征,且随着胁迫的增大而增加,表明该基因可能在水稻抵御盐分胁迫的过程中具有一定作用。

农杆菌介导白三叶草高效遗传转化和转基因植株再生

利用子叶下胚轴为外植体，通过农杆菌Ti质粒介导途径，建立了白三叶草高效遗传转化及转基因植株高频率再生体系。PCR检测及Southern印迹鉴定结果表明，外源T—DNA片段已整合到转基因植株的基因组中，且多以1～2个少数拷贝存在。Northem印迹结果和对报告基因GusA编码蛋白的活性检测结果表明，目的基因在部分转基因植株中高水平表达。适宜条件下外植体遗传转化后的植株再生比例达58．23％～62．12％。与对照相比，转基因植株在外部形态上没有发生改变。