miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

目的:构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型,并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果:成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除(KO)小鼠,鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型(WT)小鼠,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育,获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比,miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低(P<0.05)。结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功构建了纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠,miR-125a-5p基因的缺失参与靶基因Foxp3的表达调控,为进一步研究miR-125a-5p在自身免疫性疾病中的发生机制提供前期基础。

电刺激小脑治疗脑卒中后抑郁的临床探讨

目的评价电刺激小脑对脑卒中后抑郁患者的治疗作用,探讨其治疗机制。方法收集本院神经内科脑卒中住院患者97例,其中合并抑郁患者41例,分综合治疗和药物治疗组;其他56非抑郁患者为对照组。采用量表评定及血浆单胺类神经递质含量测定的方法对电刺激小脑及抗抑郁药物治疗后的脑卒中后抑郁患者进行评价,并与单纯药物治疗的脑卒中后抑郁患者及脑卒中非抑郁患者进行比较。结果综合治疗组治疗后HAMD分数为10±8,药物治疗组治疗后分数为14±8,其两组分数虽在统计学上差异无显著性意义(t=1.5948,P=0.1188),但治疗后综合治疗组分数有明显下降的趋势。综合治疗组治疗后MMSE分数为23±5,药物治疗组治疗后分数为19±5,综合治疗组的MMSE分值较药物治疗组增加(t=2.1774,P=0.0356)。综合治疗组治疗后血浆单胺类递质水平较治疗前明显升高(P<0.05)。药物治疗组治疗前后的单胺类递质含量除去甲肾上腺素外差异均无显著性意义。结论电刺激小脑与抗抑郁药物合用能显著改善脑卒中后抑郁患者的抑郁症状,其机制可能与电刺激小脑促进单胺类神经递质释放及改善认识功能有关。

青年缺血性脑卒中与血脂、脂蛋白关系的研究

目的 :探讨青年缺血性脑卒中的危险因素。方法 :对 4 7例青年缺血性脑卒中患者、4 2例同龄正常对照及 5 0例老年缺血性脑卒中患者的血脂、脂蛋白、血糖、血压等指标进行检测。结果 :青年缺血性脑卒中患者的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白明显高于同龄正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,高密度脂蛋白、载脂蛋白低于同龄正常对照组 (P <0 .0 5 )及老年缺血性脑卒中组(P <0 .0 1 )。结论 :脂代谢异常是引起青年缺血性脑卒中的主要原因 。

电刺激小脑治疗脑卒中后运动性失语的初步研究

目的评价电刺激小脑对脑卒中后运动性失语患者的治疗作用,探讨其治疗机制。方法选择在本院神经内科住院脑卒中运动性失语的患者66例,分常规药物组和药物加用脑循环功能治疗仪进行治疗的综合治疗组。疗程30天。均在治疗前后采用波士顿诊断性失语严重程度分级标准进行失语症严重程度分级及疗效评定。结果治疗前综合治疗组与常规药物组失语商(AQ)数值无显著差异。治疗后两组的AQ值均较治疗前明显增加,且综合治疗组AQ值(72.5±24.1)较常规药物组AQ值(59.7±25.5)增加更为显著(P<0.05)。治疗后综合治疗组患者的总有效率为81.0%,较常规药物组(55.1%)明显增高(P<0.05)。结论电刺激小脑与药物合用能显著改善脑卒中后运动性失语患者的语言功能,其机制可能与电刺激小脑激活小脑-大脑相关通路,调控语言的神经网络促进语言功能的恢复有关。

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后Ku70mRNA的表达

目的 研究大鼠脑缺血 /再灌注后 Ku70 m RNA的表达 ,以了解脑缺血 /再灌注后缺血半暗带 DNA修复酶的动态变化。方法 健康雄性 Wistar大鼠 ,体重 ( 2 5 0± 3 0 ) g,随机分为 2组即造模组和假手术组。造模组大鼠用线栓法成功制作可复流的 MCAO模型 ,2 h后再灌注。再灌注 6、2 4、48h时将大鼠断头取脑 ,作冷冻切片。通过原位杂交方法及末端标记法检测 Ku70 m RNA的表达及 Tunel阳性细胞数。结果 造模组脑缺血 /再灌注各时点 Ku70 m RNA表达均较假手术组明显减少 ( P <0 .0 1 )。随再灌注时间的增加 ,脑缺血半暗带 Ku70 m RNA的表达逐渐减少 ( P<0 .0 5 ) ,造模组脑缺血半暗带 Tunel阳性细胞数逐渐增加 ( P<0 .0 1 )。结论 Ku70下降可能在脑缺血损伤所致的细胞凋亡中起重要作用。

晚发型重症肌无力的研究进展(综述)

重症肌无力 ( MG)在老年人口中发病率上升。流行病学资料支持以 5 0岁来区分早发 MG与晚发 MG。早发 MG与晚发 MG主要的免疫学差异是存在抗连接素的自身抗体 ,可在约 5 0 %的晚发 MG患者的血清中探测到。晚发 MG的治疗需针对患者的年龄和其特殊的免疫学表现两方面。

大鼠局灶性脑缺血/再灌注后氧化性损伤标记8-ohdG及其修复酶rOGG1表达的研究

目的:检测大鼠脑缺血/再灌注后8-ohdG及rOGG1的表达,以了解神经元损伤是否与修复酶活性下降有关。方法:健康雄性Wistar大鼠,体重250±30g,随机分为2组:①造模组;②假手术组。①组大鼠用线栓法成功制作可复流的MCAO模型,2小时后再灌注。在再灌注后6小时、24小时、48小时将大鼠断头取脑,保存于液氮。均匀切成2mm厚的脑片,取第三片提取DNA或RNA。DNA样品经酶解后上高效液相-电化学检测器检测8-ohdG。RNA样品通过RT-PCR的方法探测rOGG1mRNA的表达。结果:①造模组脑缺血再灌注各时点8-ohdG的含量均较假手术组明显减少(P<0.01)。随再灌注时间的增加,脑缺血区rooG lmRNA的含量逐渐增加。②随再灌注时间的增加,造模组脑缺血区rooGlmRNA的表达量逐渐增加,但仍较假手术组明显减少(P<0.01)。结论:脑缺血区受损DNA修复不完全将导致DNA损伤积累从而引起神经元死亡。

检测T细胞受体重排切除环的意义及应用研究

T细胞受体重排切除环是T细胞受体基因重排过程中切除的DNA环 ,可作为新近从胸腺迁出者的标记 ,应用于胸腺功能的评价。近年来由于免疫重建研究的缘故 ,检测T细胞受体切除环受到了重视。本文拟从T细胞受体切除环产生及应用的意义、方法上作一综述。

全脑血管造影术前、后血浆ET-1、vWF水平的初步探讨

目的探讨脑血管造影术(DSA)前、后血浆内皮素-1(ET-1)及血管性血友病因子(vWF)的水平变化,初步探讨DSA对血管内皮细胞的影响。方法测定106例缺血性脑血管病患者术前、术后即刻、术后1d血浆ET-1、vWF的含量。根据脑血管狭窄病变程度分为A、B两个亚组。结果 DSA术后血浆ET-1水平均明显升高,ET-1在术后即刻有明显升高(549.45±109.37)pg/mL,术后1d有所下降(519.71±111.68)pg/mL,但仍高于术前水平(500.08±112.23)pg/mL,3个时间点血浆ET-1水平有明显差异。血浆vWF水平术后未观察到明显升高。不同狭窄程度亚组相比,病变较重的亚组术前ET-1和vWF水平均较高,且术后也持续在较高水平。结论血浆ET-1和vWF水平可能与动脉狭窄程度相关;术后ET-1的升高提示DSA术可能对血管内皮细胞造成一定的损伤。

全身型重症肌无力患者异常胸腺microRNA表达谱的初步研究

目的比较全身型重症肌无力(generalized myasthenia gravis,GMG)患者异常胸腺(胸腺瘤、胸腺增生)与正常胸腺microRNA(miRNA)表达谱的差异,以探讨胸腺miRNA在重症肌无力发病机制中的作用。方法应用RiboArrayTMmiRNA芯片检测技术分别比较GMG伴胸腺瘤(4例)、胸腺增生(4例)患者胸腺与正常对照(4例)胸腺miRNA表达谱的差异,并利用生物信息学预测可能受其调控的靶基因。结果 GMG胸腺瘤组、GMG胸腺增生组与正常对照组之间胸腺miRNA聚类分析树状图差异明显;GMG胸腺瘤组较正常对照组显著差异表达的胸腺miRNA共有16个,其中14个下调,下调最显著的为hsa-miR-362-3p,2个上调,上调最显著的为hsa-miR-125a-5p;GMG胸腺增生组较正常对照组显著差异表达的miRNA共有38个,其中下调者37个,下调最显著的为hsa-miR-548av-3p,上调者1个,为hsa-miR-4442。结论异常表达的胸腺miRNA可能在重症肌无力发病中起作用。

自身免疫调节因子对EAMG模型小鼠发病的影响

目的探讨自身免疫调节因子(autoimmune regulator,AIRE)在实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)模型小鼠发病中的作用。方法采用亲和层析法从电鳐电器官中提取和纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR),并用其免疫C57BL/6小鼠,根据临床症状及重复电刺激试验结果将造模小鼠分为成模组及未成模组,检测各组小鼠胸腺内AIRE mRNA、AChRα1mRNA表达水平以及CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)比例和胸腺细胞增殖能力,并与未成模组、福氏佐剂对照组及健康对照组进行比较。结果与未成模组、福氏佐剂对照组及健康对照组相比,成模组小鼠胸腺内AChRα1亚基基因表达水平减少(P<0.01),胸腺内AIRE mRNA表达水平明显下降(P<0.01),胸腺内CD4+T细胞水平无统计学变化(P>0.05),而胸腺内Treg与CD4+T细胞水平的比例却明显下降(P<0.01),胸腺细胞对刀豆球蛋白A(ConA)刺激的增殖能力增强(P<0.01)。结论 EAMG小鼠模型存在中枢耐受缺陷,AIRE基因通过调节胸腺异位基因的表达和Treg细胞比例而在EAMG的发病中起作用。

丘脑梗死后丘脑放射纤维继发变性的磁共振弥散张量成像

目的应用磁共振弥散张量(diffusion tensor imaging,DTI)技术动态观察局灶性丘脑梗死后丘脑放射纤维的弥散变化,探讨丘脑梗死后,病灶上方的丘脑放射纤维继发性损害的发生发展规律。方法连续收录首次发病、单侧丘脑梗死患者17例为实验组,选择健康志愿者17例作对照研究。患者分别在发病的第1周(W1)、第4周(W4)和第12周(W12)进行1次DTI检测,对照组进行1次DTI检测。每次DTI检测之前进行美国国立卫生研究院卒中评分(national institute health stroke scale,NIHSS)和Barthel生活指数(BI)以及自订的感觉障碍分级评分(Sensory disturbance rating,SDR)评定。结果梗死灶上方的半卵圆中心部分异向(fractional anisotropy,FA)值随时间延长逐渐减少(W1:0.42±0.02,W2:0.38±0.02,W12:0.34±0.03,P<0.01),而平均弥散量(mean diffu-sion,MD)却无明显变化。梗死灶上方的半卵圆中心FA值的变化百分数与NIHSS、和BI的变化百分数无明显相关(P>0.05),与SDR变化的百分数呈负相关(r=-0.246,P<0.05)。结论局灶性丘脑梗死可以引起丘脑放射纤维继发性损害,在12周内这种继发性损害逐渐加重,而且还可能阻碍患者感觉功能的恢复。

重症肌无力患者甲状腺功能的观察

目的:研究重症肌无力(MG)患者甲状腺的机能状态。方法:检测70例重症肌无力患者血清TT3、TT4、FT3、FT4、TSH浓度、循环抗甲状腺球蛋白抗体(TGab)结合率、抗甲状腺微粒体抗体(TMab)结合率,并与健康对照组比较。结果:除TSH外,重症肌无力患者总T3、总T4、FT3、FT4平均血清浓度、TGab、TMab平均结合率均明显高于健康对照组。眼肌型重症无肌力与全身型重症肌无力患者血清中甲状腺激素增高者所占的比例无显著差异。合并胸腺瘤或胸腺增生的重症肌无力患者与无胸腺病变的重症肌无力患者比较,其血清中甲状腺激素水平无显著性差异。结论:重症肌无力患者存在明显的甲状腺损害,但其甲状腺功能异常与其疾病类型及是否伴有胸腺病变无关。

实验性重症肌无力小鼠模型的研究

目的:采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors,AChR)免疫小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力(experi mental autoi mmune myasthenia gravis,EAMG)动物模型。方法:以亲和层析法从电鳐电器官提取和纯化AChR,并用其免疫接种BALB/C和C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状、电生理变化以及血清AChR抗体水平的情况。结果:与对照小鼠相比,发病小鼠出现临床肌无力症状,重复神经电刺激(repetitivenerve sti mulation,RNS)显示动作电位波幅衰减,血清AChR抗体水平升高。结论:用电鳐电器官提纯TAChR作为免疫原,成功诱导产生EAMG小鼠模型,C57BL/6小鼠较BALB/C小鼠易感。

眼肌型重症肌无力的治疗进展

眼肌型重症肌无力引起上睑下垂和（或）复视等临床症状，影响患者的日常生活和工作。它被认为是一种轻型的疾病，但临床上约有一半的眼肌型患者肌电图表现为全身神经肌肉功能紊乱，且44％～53％的眼肌型患者有可能进展为全身型的重症肌无力。有资料证实应用免疫抑制疗法减少了眼肌型患者进展成全身型的频率。在权衡免疫抑制疗法的利弊后可根据患者的情况制定个体化的治疗方案。

广西壮族3例肯尼迪病患者的临床特征及基因突变

目的研究广西壮族肯尼迪病患者的基因突变及临床特征。方法收集2个壮族肯尼迪病家系共3例患者的临床表现、生化、神经电生理、病理等临床资料;运用基因分析的方法,明确家系先证者雄激素受体(androgen receptor,AR)基因第1号外显子CAG序列的重复数。结果 3例肯尼迪患者均中青年起病,缓慢进展,表现为四肢乏力,无感觉异常、姿势性震颤及乳房发育;2例患者睾酮升高,肌酶中度升高;肌电图呈神经源性损害电生理改变,感觉神经传导均未见异常;2个肯尼迪病家系的AR基因第一号外显子CAG重复数分别为:53、54。结论广西壮族肯尼迪病患者具有明显的临床及遗传异质性,雄激素受体基因检测可以作为肯尼迪病诊断的可靠依据。