重组腺病毒表达的融合蛋白SH2-caspase 8对K562细胞凋亡的影响

目的研究表达融合蛋白SH2-caspase 8的重组腺病毒AdE-SH2-caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的影响。方法将重组的腺病毒SC转染K562细胞(SC组),分别设突变AdE-SH2m-caspase 8-HA-GFP(SmC)组、病毒空载体AdEGFP(CMV)组和PBS对照组。用荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒转染效率,western blot检测融合蛋白及凋亡相关蛋白caspase 3、多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的表达情况,用光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况。结果 FCM和荧光显微镜检查结果显示,重组腺病毒在K562细胞中的转染效率较高;融合蛋白SH2-caspase 8-HA和SH2m-caspase 8-HA可在K562细胞中表达;瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变;FCM检测结果表明,SC组与SmC组、CMV组和PBS组相比较,其早期凋亡细胞明显增高(t分别为6.945、19.083和16.470,P均<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组和SmC组可出现细胞凋亡特异性的梯度条带,western blot结果表明,SC组和SmC组凋亡相关蛋白caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论重组腺病毒SC表达的SH2-caspase 8融合蛋白能明显诱导K562细胞的凋亡。

单位互联网接入模式设计

论述了网络设计的一般原则,并根据单位互联网接入的几个基本要求,分别提出了针对性的方案;对整个网络拓扑进行分层解说,指出设计的关键思路。

提高小学语文课堂阅读教学有效性的途径和方法

提高小学语文课堂阅读教学的有效性,培养学生的阅读兴趣,提高教育教学质量,为学生的终身学习奠定基础,这是广大教育工作者的永恒话题。《义务教育语文课程标准(2011年版)》明确指出,小学生各个年级的阅读教学要重视朗读,让学生充分地读,在读中整体感知,在读中有所感悟,在读中培养语感,在读中受到情感的熏陶。教与学是一对矛盾的统一体,教是外因,学是内因。学生是学习的主体,只有落实以生为本的理念。