植物内生真菌分离方法的研究

目的:对准确分离植物内生真菌的方法和适宜的培养条件进行研究。方法:采用75%乙醇、次氯酸钠溶液(活性氯含量1.3%～5.2%)浸泡和无菌水洗涤工艺对植物材料进行表面灭菌,以灭菌强度逐步递减的方式,确定最佳分离植物内生真菌的表面灭菌强度;设置超净工作台无菌状态检测对照、漂洗液无菌检测对照和组织印迹无菌检测对照3种对照处理,确保适度的表面灭菌强度;采用不同的培养基分离培养内生真菌。结果:高浓度杀菌剂短时间处理比低浓度杀菌剂长时间处理更适合植物内生真菌的分离;使用10%马铃薯葡萄糖双抗培养基、22℃低温培养,能抑制快生型菌株的疯长,从而使慢生型菌株拥有一定的生长空间,最大限度地分离所有植物内生真菌;同时设置3种对照处理可以确保植物内生真菌分离的准确性。结论:设计合适的表面灭菌方法、表面灭菌效果检测方法和分离培养方法对植物内生真菌的分离至关重要。

洛阳市非EV71、非CA16肠道病毒中优势毒株状况分析

目的了解洛阳市引起手足口病的普通肠道病毒的构成情况,警惕比例较高毒株发展为新的优势毒株,为洛阳市的手足口病防控提供科学依据。方法采用实时荧光PCR(RT-PCR)对洛阳市手足口病的送检粪便标本进行核酸鉴定,随机选取9例普通肠道病毒阳性,而柯萨奇病毒A16型(CA16)和新肠道病毒71型(EV71)阴性的标本,进行5′UTR测序,确定毒株的亚型。利用CA6的特异性引物,选取75例普通肠道病毒阳性标本(CA16和EV71阴性),用RT-PCR方法鉴定CA6的阳性数量,分析CA6的构成比。结果 9个普通肠道病毒5′UTR测序结果进行BLAST初筛,结果显示CA6为5株,在普通的肠道病毒中为优势毒株;75例普通肠道病毒中,共检测出CA6 20例。CA6在普通肠道病毒中的比例为29.76%(25/84);25例CA6中,男13例,女12例;引发重症的病例为2例;城市地区5例,乡村20例。结论洛阳市引起手足口病的普通肠道病毒的构成较为复杂,在引起手足口病的普通肠道病毒中CA6病毒所占比例较高,对此应引起重视。

洛阳市2009～2018年手足口病实验室诊断病例病原构成变化情况调查

目的:调查洛阳市2009~2018年手足口病(HFMD)实验室诊断病例病原构成变化情况。方法:对洛阳市疾病预防控制中心病原微生物实验室2009~2018年诊断病例病原构成情况进行统计,按照肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)、其他肠道病毒进行分类,分析三个类型病原构成及变化情况。结果:(1)2009~2011年,EV71构成比占优势,并在50.00%~67.00%区间内上下波动,但出现下降趋势;其他肠道病毒出现上升趋势;CA16则呈相对稳定态势;(2)2012~2016年,EV71下降速度有所减缓,并在29.00%~39.00%小区间内波动;CA16呈相对稳定态势,且上下波动幅度相对稳定;其他肠道病毒构成比占优势,并在41.00%~53.00%区间上下波动,且在2012年构成比(43.48%)首次超过EV71(38.08%);(3)2016~2018年,其他肠道病毒构成比占优势,并呈快速升高趋势;EV71则呈快速下降;CA16呈相对稳定态势,上下波动幅度相对稳定并略有下降。结论:2009~2018年,洛阳市HFMD病原构成持续发生变化,且其他肠道病毒构成比呈明显上升趋势,因此需实时关注病原构成动态,明确其构成特点,了解其流行规律,为HFMD防控提供良好技术支撑。

洛阳市2009～2013年手足口病病原学分析

目的通过对洛阳市2009-2013年手足口病（HFMD）病原学进行分析,为该地区HFMD的防治提供一定理论依据。方法按照洛阳市手足口病防控要求,每月要求洛阳市辖内9县6区定点医院采集一定量HFMD患儿粪便标本,采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测人肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CA16）及其他类型病原类型并进行分析。结果洛阳市2009-2013年共检测标本4 225例,实验室确诊3 248例,阳性率为76.88%;洛阳市引发HFMD病原主要是EV71,但其降低趋势明显,而CA16和其他肠道病毒引起HFMD所占比例逐年稳步升高;2010年HFMD病原性别分布比较,差异有统计学意义（χ^2=9.48,P=0.009）;其他年度HFMD病原性别分布比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。除2013年外,HFMD病原的城乡分布比较,差异均有统计学意义（χ^2=9.48,P=0.009）。结论洛阳市2009-2013年HFMD病原构成存在一定变化趋势且城乡分布存在显著差异,应及时对HFMD病原进行检测,并分析流行原因,以便更好地对HFMD进行防治。

对2009年～2013年洛阳市重症手足口病的流行情况和病原分析

目的 :分析2009年~2013年期间洛阳市重症手足口病(Hand-foot-mouth Disease,以下简称HFMD)的流行情况和病原学特点。方法 :按照国家对于HFMD的防治要求,在洛阳市九县六区的定点医院采集一定量的重症HFMD患儿的粪便标本。采用逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)与实时荧光定量PCR相结合的方法对肠道病毒71型(以下简称EV71)、柯萨奇病毒A16型(以下简称CA16)及其他的肠道病毒进行分析与检测。结果 :在2009年~2013年期间,只有2010年重症HFMD患儿的患病时间主要分布在5~8月份,其他年份的重症HFMD患儿的患病时间均主要分布在4~6月份。因感染EV71病毒致病的患儿人数均明显多于感染其他病毒致病的患儿人数,二者相比差异具有显著性(P<0.05)。重症HFMD男性患儿的人数均多于女性患儿的人数,二者相比差异具有显著性(P<0.05)。2010年因感染EV71病毒致病的农村患儿的人数明显多于城市患儿的人数,二者相比差异具有显著(p<0.05)。其他年份重症HFMD患儿的城乡患病人数相比差异不具显著性(p>0.05)。结论 :洛阳市手足口病有明显的地区、季节和人群特征,其主要的病原为EV71病毒,同时也存在CA16病毒及其他肠道病毒感染致手足口病的情况,重症手足口病的病原以EV71病毒为主。洛阳市手足口病的防治工作应以采取综合性的防控措施为主。

洛阳市疾病预防控制中心检验监测中心病原微生物室

目的调查2017-2018年洛阳市手足口病优势病原构成,为洛阳市手足口病防控提供技术支撑。方法按照洛阳市手足口病监测方案,每月对所辖县(区)手足口病患儿按要求采集一定数量的粪便标本,共收集粪便标本1710例,发病时间为2017-2018年。采用荧光聚合酶链反应(PCR)对采集粪便标本进行肠道病毒核酸检测,对比分析其优势病原构成情况,对优势病原患儿的社会人口学特征进行统计。结果经实验室诊断,肠道病毒总阳性率为64.44%,其中EV71阳性构成比为9.89%,CA16阳性构成比为11.62%,CA6阳性构成比为45.92%,其余肠道病毒阳性构成比为32.58%;506例CA6阳性患儿中男性占比57.3%,女性占比42.7%;2岁及以下患儿占比76.5%,5岁及以下占比93.3%;散居患儿占比83.2%,入托患儿占比16.8%;城区患儿占比56.9%,乡村患儿占比43.1%。5岁及以下儿童为CA6易感群体。结论洛阳市最常见的手足口病致病类型为EV71、CA16及CA6,其中新优势病原为CA6,5岁及以下儿童为CA6易感群体,临床上需要对上述病原体进一步加强鉴别、诊断,并深入分析其临床特点。

2017年洛阳市流感流行病学特征及病原学分析

目的分析2017年洛阳市流感流行特征,为今后流感防控策略提供科学依据。方法对2017年洛阳市流感监测哨点医院上报的流感样病例(ILI)和病原学检测结果进行描述流行病学分析。结果 2017年洛阳市3家哨点医院平均ILI%为6.07%(29 644/488 026),其中0～4岁年龄组ILI最多,占ILI总数的71.32%。3家哨点医院共采集ILI样本2 000份,流感病毒核酸检测阳性率为26.15%,检出阳性样本以新甲H1和Yamagata为主,占阳性样本的82.22%。洛阳市流感流行呈冬春季单峰特点,5～14岁年龄组是ILI阳性率较高的人群(41.97%),病毒阳性检出率男女差异无统计学意义(P>0.05)。结论 2017年洛阳市流感流行呈现暴发态势,15岁以下儿童仍然是流感防控的重点人群。

2015年-2017年洛阳市流感监测结果分析

目的分析洛阳市2015年-2017年流感流行特征,为今后流感防控策略提供科学依据。方法对2015年-2017年洛阳市流感监测哨点医院上报的流感样病例(influenza-like illness, ILI)和病原学检测结果采用描述性流行病学分析。结果 2015年-2017年洛阳市3家哨点医院平均ILI百分比为4.61%,其中0岁～4岁年龄组ILI最多,占ILI总数的77.56%。3家哨点医院共采集ILI样本6 116份,流感病毒核酸检测阳性率为17.17%,检出阳性样本以季H3型为主,占阳性样本的48.29%。洛阳市流感流行呈现冬春季单峰特点,5岁～14岁年龄组是ILI阳性率最高的人群(27.96%),病毒阳性率男、女差异无统计学意义(χ~2=0.003,P>0.05)。结论 2015年-2017年洛阳市流感流行强度保持平稳,不同亚型病毒交替流行,15岁以下儿童是流感防控的重点人群。

2013-2016年洛阳市手足口病病原学及流行病学特征分析

目的分析洛阳市手足口病的流行病学特征,为制定手足口病防治策略提供科学依据。方法采取描述性流行病学方法对2013-2016年洛阳市手足口病监测资料和病原学监测结果进行统计分析。结果 2013-2016年洛阳市共确诊手足口病2 911例,发病呈现周期性和季节性;发病高峰集中在4～7月;病例以4岁以下儿童为主,占总病例数的91.24%;男性发病率高于女性,病例主要为散居儿童,占总病例的74.51%;引起手足口病流行的病原体为肠道病毒71(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)和其他肠道病毒,其中EV71是引起手足口病的主要病原体。结论洛阳市2013-2016年手足口病流行存在明显的季节、人群特征,尤其应该注意其他肠道病毒引起的手足口病例的增多现象,应继续加强监测、宣传教育以及重点人群的综合防控。

2012-2018年洛阳市外环境中禽流感病毒状况及职业暴露人群禽流感抗体水平调查

目的了解洛阳市外环境中禽流感病毒存在状况、职业暴露人群血清中禽流感病毒抗体水平,为洛阳市人感染禽流感疫情防控、预测和预警提供依据。方法在洛阳市禽流感监测点采集外环境标本,用PCR方法对标本进行禽流感病毒核酸检测;采集职业暴露人群的血清标本,采用血凝抑制实验进行H5N1、H7N9、H9N2抗体检测。结果2012年01月至2018年12月,共采集外环境标本587份,检出A型禽流感病毒56份,检出A型禽流感病毒阳性率为9.54%。其中H9亚型阳性率7.50%,H5亚型阳性率0.00%,H7亚型阳性率0.00%,其他A型(排除H5、H7、H9)亚型阳性率2.04%。不同类型监测场所,活禽市场及家禽屠宰售卖点禽流感病毒检出率较高;不同标本类型,笼具、案板表面擦拭标本及清洗禽类污水的禽流感病毒阳性率较高;月份分布主要集中在每年的1月~3月及12月,2月高于其他月份。共采集595份职业暴露人群血清进行检测,没有检出H5N1、H7N9、H9N2抗体。结论洛阳市禽类相关外环境中存在禽流感病毒,以H9亚型为主,活禽市场和家禽屠宰售卖点禽流感病毒存在较多;职业暴露人群血清中H5N1;H7N9;H9N2抗体较低。