焦亡相关炎症因子与痛风性关节炎疾病活动度的相关性研究

目的分析焦亡相关炎症因子在痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者不同病程中的表达水平,探讨细胞焦亡是否参与GA的病理生理过程。方法收集2022年6月至2023年6月就诊于中日友好医院风湿免疫科50例急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者(AGA组)和50例健康体检者(健康对照组)的外周静脉血样本,分别检测两组患者血清生化指标、血常规指标及焦亡相关炎症因子如C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-18的表达水平;蛋白免疫印迹法检测尿酸钠结晶刺激的THP-1细胞中焦亡相关蛋白水平变化。采用SPSS统计学软件对受试者的尿酸水平、疾病活动度等指标进行统计分析。结果与健康对照组相比,AGA组患者外周血血清尿酸(uric acid,UA)、白细胞、CRP、IL-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Ca^(2+)水平显著升高,Mg^(2+)水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);AGA组急性发作期UA、白细胞、CRP、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、Ca^(2+)和数字分级评分法(numerical rating scale,NRS)评分显著高于缓解期,Mg^(2+)水平显著降低(P<0.05);NRS评分与血清IL-1β、IL-8、IL-18水平呈正相关(P<0.05)。尿酸钠结晶刺激的THP-1细胞中焦亡相关功能蛋白表达水平显著高于无特殊处理的THP-1细胞。结论GA患者焦亡相关炎症因子水平高于健康对照者,且GA急性期焦亡相关炎症因子水平高于GA缓解期,提示细胞焦亡可能参与了GA的免疫炎性反应。

巨噬细胞在PM_(2.5)暴露肺泡气血屏障损伤过程中的作用研究

目的探究巨噬细胞在细颗粒物(fine particulate matter,PM_(2.5))暴露肺泡气血屏障损伤过程中的作用。方法将18只10周龄、体质量24~27 g的雄性BALB/C小鼠随机分为(n=6):对照组(气管滴注生理盐水)、PM_(2.5)低剂量组与PM_(2.5)高剂量组(在实验第1、4、7天气管滴注PM_(2.5)样品悬液,染毒浓度分别为1.8和16.2 mg/kg体质量),末次染毒24 h后检测PM_(2.5)暴露后小鼠肺组织病理改变、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中总蛋白(total protein,TP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)释放水平以及肺组织中F4/80蛋白表达水平,观察小鼠肺泡气血屏障的损伤效应及肺组织中巨噬细胞的浸润情况。以肺泡上皮细胞A549和血管内皮细胞EA.hy926构建体外肺泡气血屏障模型,结合THP-1巨噬细胞模型,将PM_(2.5)上清、巨噬细胞培养上清和PM_(2.5)-巨噬细胞培养上清分别与屏障模型孵育24 h,通过检测屏障模型跨膜电阻值(transepithelial electrical resistance,TEER)、荧光素钠透过率和屏障细胞LDH释放情况,确认PM_(2.5)暴露诱导屏障受损过程中巨噬细胞的促进作用;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测PM_(2.5)暴露后巨噬细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和IL-8的表达情况,探究巨噬细胞在PM_(2.5)暴露中炎性应激效应。结果PM_(2.5)暴露可引起小鼠肺组织损伤,且随染毒剂量增加,BALF中TP、LDH、AKP含量及肺组织中巨噬细胞数量随之增加,PM_(2.5)高剂量组与对照组相比具有显著差异(P<0.01)。体外肺泡气血屏障模型暴露结果显示:与150、300μg/mL PM_(2.5)上清或巨噬细胞培养上清单独作用于屏障模型相比,将150、300μg/mL PM_(2.5)-巨噬细胞培养上清暴露于屏障后,屏障TEER显著降低(P<0.01),透过率显著增加(P<0.01),且300μg/mL PM_(2.5)-巨噬细胞上清处理的组别可以明显提高上皮和内皮屏障细胞LDH的释放(P<0.01)。150、300μg/mL PM_(2.5)刺激后巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8表达显著增加(P<0.01)。结论巨噬细胞促进PM_(2.5)引起的肺泡气血屏障功能损伤。

氮肥效率的评价及其在马铃薯上的研究进展

氮在马铃薯生长发育过程中起着至关重要作用,氮肥的施用直接影响到马铃薯块茎的产量和品质。不同基因型马铃薯对氮肥的吸收、利用效率有显著差异。就氮效率的评价方法进行归纳,在对马铃薯氮素需求基础上,综述了马铃薯氮素效率评价方法的研究进展并进行展望,以期为不同氮效率基因型马铃薯的进一步研究和合理施用氮肥提供参考。

NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对急性痛风性关节炎大鼠的保护作用

目的:研究NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对急性痛风性关节炎大鼠的保护效果,并探讨MCC950抗急性痛风性关节炎的作用机制。方法:选取雄性SD成年大鼠,踝关节腔注射单钠尿酸盐(monosodium urate,MSU)晶体建立急性痛风性关节炎模型,注射生理盐水为对照组,注射MSU+MCC950为治疗组,每组7只。测量各组间踝关节肿胀程度,膝关节滑膜组织病理切片炎症细胞浸润情况,血清中的白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,关节滑膜组织NLRP3的表达量。结果:治疗组接受MCC950干预后,大鼠关节肿胀程度减轻,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量均下降,关节滑膜组织NLRP3表达量均下调(P<0.05),各项指标均得到显著的改善。结论:NLRP3炎性小体抑制剂MCC950对MSU诱导大鼠急性痛风性关节炎具有保护作用。

马骨髓间充质干细胞向软骨细胞的诱导分化

试验旨在建立马骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)细胞系,并诱导其向软骨细胞分化。通过获取马BMSCs,进行细胞培养和纯化,对第3代(P3)细胞进行干细胞特性鉴定,并诱导其向软骨细胞分化,对分化后的细胞染色,并检测其软骨细胞特异性基因的表达。结果显示,获得的马BMSCs表达标记基因Sox2和Nanog,并表达间充质干细胞表面标记因子CD44、CD90和CD105,不表达造血细胞表面标志物CD34和CD45。P3代细胞经诱导培养后形态发生改变,阿尔新蓝染色为阳性,并表达软骨细胞特异基因Col,且其表达量随着诱导分化时间的增加而增高。综上表明,本试验建立了马BMSC细胞系,并成功诱导其分化为软骨细胞,为软骨损伤的干细胞治疗提供了试验依据。

长链非编码RNA LINC00885在人食管癌细胞中的作用研究

探讨长链非编码RNA LINC00885对人食管癌细胞EC109增殖、迁移与侵袭的影响。构建LINC00885基因过表达质粒(pcDNA3.1-LINC00885)和shRNA敲低质粒(pLKO.1-LINC00885)。分别采用集落形成实验检测EC109细胞增殖能力;划痕实验检测EC109细胞横向迁移能力;Transwell实验检测EC109细胞纵向迁移能力及侵袭能力;流式实验检测LINC00885对于细胞周期的调控;实时定量PCR方法检测LINC00885 mRNA转录水平;Western blot检测BMP7及上皮间充质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)通路相关蛋白(VIMENTIN、β-catenim和ZO-1)表达水平。在过表达LINC00885的EC109细胞中,细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力均显著增强,BMP7蛋白表达升高;而在敲低表达LINC00885的EC109细胞中,细胞的增殖能力、迁移能力与侵袭能力均显著降低,BMP7蛋白表达也随之降低。另外,在过表达LINC00885的EC109细胞中,EMT通路蛋白VIMENTIN、β-catenim表达水平显著升高,而ZO-1表达水平显著降低。通过探究LINC00885对食管癌细胞增殖、迁移能力的影响,旨在验证LINC00885在食管癌中的功能,以期为临床治疗食管癌奠定理论基础。

聚苯乙烯微塑料对质粒DNA的吸附及其转染效应研究

微塑料(MPs)长期存在于自然环境中,可通过呼吸和食物摄入的方式危害人体健康.微塑料不仅本身具有生物毒性,还能吸附多种组分构成复合污染物.为了探究微塑料对质粒DNA的吸附特性及介导的质粒转染效果.本研究利用琼脂糖凝胶电泳和透射电子显微镜表征聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)对质粒DNA(pcDNA 3.1-EGFP)的吸附作用.微塑料及其质粒DNA吸附复合物转染人食管上皮细胞EC109后,利用RTqPCR检测EC109细胞中源自质粒pcDNA 3.1-EGFP的eGFP基因及新霉素抗性基因(neoR)的转录,利用共聚焦显微镜观察EC109细胞中源自质粒pcDNA 3.1-EGFP的绿色荧光蛋白表达,并利用显微镜和CCK-8实验检测了微塑料及其质粒DNA吸附复合物对食管上皮细胞EC109的毒性效应.结果显示,聚苯乙烯微塑料可以有效吸附质粒DNA,且聚苯乙烯微塑料对质粒DNA的吸附效果与微塑料的粒径呈负相关,与微塑料的浓度呈正相关.微塑料对质粒DNA的吸附作用平衡时间约为12 h.聚苯乙烯微塑料-质粒DNA复合物呈串聚现象.转染细胞中检测出细胞中eGFP基因和抗性基因(neoR)的有效转录及绿色荧光蛋白的表达,细胞的形态及活性无显著改变.研究表明,聚苯乙烯微塑料有效吸附质粒DNA,并可介导质粒DNA对真核细胞的转染.

基于转录组测序探究PM_(2.5)引起THP-1细胞发生炎性反应的关键因子

大气细颗粒物(PM_(2.5))作为空气污染的主要污染物,由于其具有颗粒小、比表面积大的特点,很容易沉积于肺泡细胞或进入血流.现有的研究报道指出,许多呼吸道疾病都与暴露于环境PM_(2.5)有关.肺泡巨噬细胞作为一种固有免疫细胞,是抵御外来污染物和致病微生物的第一道防线.本研究以THP-1细胞为人巨噬细胞模型,探究了PM_(2.5)暴露引起巨噬细胞发生炎症反应的机制.通过对暴露于PM_(2.5)后的THP-1细胞进行RNA-Seq测序,筛选出3967个差异表达基因,对这些差异表达基因进行GO分析、KEGG富集分析,结果显示,多条通路与免疫反应及炎症信号有关.通过对230个富集于炎症相关通路的差异表达基因进行蛋白质-蛋白质相互作用分析,结果显示,CXCL8(C-X-C motif chemokine ligand 8)在蛋白质相互作用中处于核心地位.因此,进一步利用实时荧光定量PCR和ELISA对PM_(2.5)暴露的THP-1细胞中的CXCL8表达水平进行验证,发现在低浓度PM_(2.5)暴露的前24 h以内,CXCL8的相对转录水平及分泌水平随着PM_(2.5)暴露时间的延长和暴露浓度的增加而升高.研究表明,CXCL8在PM_(2.5)暴露的THP-1细胞中表达显著,且处于通路蛋白互作的核心位置,提示CXCL8在PM_(2.5)暴露引起的肺部炎症反应中发挥着重要作用.

北京市冬季空气中PM_(2.5)对THP-1细胞焦亡的影响

为了验证PM_(2.5)进入肺部后,在肺巨噬细胞清除PM_(2.5)组分中是否发生细胞焦亡效应,本研究以THP-1细胞作为人巨噬细胞模型,以不同浓度PM_(2.5)暴露于THP-1细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)释放水平,荧光显微镜下观察细胞PI染色情况,流式细胞仪检测Annexin V/PI染色,蛋白免疫印迹(Western blotting)检测焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD的表达,以及ELISA法检测IL-1β、IL-18的分泌等来检测PM_(2.5)暴露诱导THP-1细胞的焦亡发生和炎症因子释放水平.结果显示:THP-1细胞暴露于PM_(2.5)后,细胞存活率的降低与PM_(2.5)暴露浓度的增加呈正相关;THP-1暴露PM_(2.5)48 h后,细胞胀大并呈气泡状;与空白对照(PBS)组相比,PM_(2.5)暴露组与阳性对照组(1.0μg·mL^(-1)LPS+5.0 mmol·L^(-1)ATP)的细胞上清中LDH水平显著提高;流式细胞仪检测显示Annexin V/PI染色双阳区的细胞比例显著提高;Western blotting结果显示,与对照组相比,PM_(2.5)暴露组炎症小体蛋白NLRP3、ASC、caspase-1表达水平显著提高,而且caspase-1和焦亡执行蛋白GSDMD发生了切割;ELISA结果显示,与对照组相比,PM_(2.5)暴露组IL-1β与IL-18分泌显著提高.研究表明,PM_(2.5)暴露可诱导THP-1细胞炎症性细胞焦亡效应.