沉默miR-223对川崎病冠状动脉血管内皮细胞的影响

目的分析沉默冠状动脉血管内皮细胞(HCAEC)miR-223的表达,研究miR-223对川崎病(Kawasaki disease,KD)冠状动脉血管内皮细胞凋亡和管腔形成的影响。方法收集正常儿童和川崎病儿童的血清。将实验分为3组:正常儿童患者血清组(N组)、川崎病患者血清阴性组(KD组)、川崎病患者血清+miR-223 inhibitor组(M组),每组均处理HCAEC细胞48 h。QRT-PCR法检测各组细胞miR-223、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide synthase,eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)mRNA的表达。化学比色法检测各组细胞上清NO的表达。流式细胞术检测其凋亡情况。Matirgel胶体外管腔形成试验检测HCAEC细胞管腔形成。结果 QRT-PCR检测结果表明,miR-223 inhibitor干扰可显著降低iNOS mRNA表达量(P<0.05),提高eNOS mRNA表达量(P<0.05)。KD组细胞凋亡率增加,管腔数量增多,miR-223 inhibitor干扰可降低细胞凋亡,降低管腔形成数量(P<0.05)。结论沉默miR-223的表达可使冠状动脉血管内皮细胞凋亡减少,NO表达降低,HCAEC生成血管数减少。miR-223可能是川崎病冠状动脉损害基因治疗的潜在靶基因之一,用来预测冠状动脉瘤的形成。

过表达miR-30b对人胃癌细胞株SGC-7901和AGS生物学功能及其肿瘤形成的影响

目的研究过表达miR-30b对人胃癌细胞株SGC-7901和AGS的增殖、细胞周期、凋亡、侵袭等生物学功能的影响及对体内肿瘤形成的抑制作用。方法 SGC-7901和AGS细胞中转染miR-30b类似物和miR-对照后,qRT-PCR检测转染后细胞miR-30b的表达变化;Western blot检测eIF5A2蛋白的表达;CCK-8检测SGC-7901和AGS细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Transwell实验检测细胞体外侵袭能力。转染miR-30b类似物和miR-对照的SGC-7901和AGS细胞,分别注射裸鼠体内,观察肿瘤的形成及肿瘤组织中eIF5A2蛋白的表达。结果qRT-PCR结果表明miR-30b类似物组的相对表达量显著高于miR-对照组(P<0.05);Western blot结果显示,miR-30b类似物组的eIF5A2蛋白表达降低;CCK-8实验表明miR-30b类似物组中细胞增殖受到抑制;流式细胞术显示miR-30b类似物组的细胞周期减慢,凋亡增加;在Transwell迁移实验中,miR-30b类似物组细胞侵袭能力明显低于miR-对照组(P<0.05)。细胞体内成瘤实验显示,miR-30b过表达抑制肿瘤的形成,肿瘤组织中eIF5A2蛋白表达降低。结论 miR-30b过表达抑制人胃癌细胞的增殖、侵袭和肿瘤的形成,降低eIF5A2蛋白的表达,为胃癌治疗提供了一个潜在的靶点。

癌胚抗原与基质蛋白22双标记时间分辨荧光检测试剂盒的研制及效能评价

目的研制膀胱癌早期诊断指标癌胚抗原(CEA)和核基质蛋白22(NMP22)的双标记时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)试剂盒,并评价其效能。方法将抗CEA和NMP22的单克隆抗体作为捕获抗体包被96孔板,用Eu^(3+)标记CEA单克隆抗体和Sm^(3+)标记NMP22的单克隆抗体作为检测抗体,建立CEA和NMP22的双标记TRFIA试剂盒,并评价试剂盒的灵敏度、精密度、稳定性等指标。结果自制试剂盒稀释回收率高。CEA的线性范围为0~600 ng/mL,最低检出浓度为0.12 ng/mL;NMP22的线性范围为0~1000 U/mL,最低检出浓度为0.21 U/mL。精密度良好,分析内精密度分别为2.5%~4.3%,1.1%~4.2%,分析间精密度分别为3.0%~5.7%,4.7%~5.5%。定性试验表明该试剂盒可在4℃稳定半年,37℃稳定7 d。自制试剂盒与膀胱癌镜检的阳性符合率为97.7%,阴性符合率为100%。结论所研制的试剂盒的各项性能及检测指标均达到临床检验的要求,且准确度高、灵敏性高、可测范围宽,稳定性好,具有良好的应用前景。