Wnt7a抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的探讨Wnt7a在胃癌发生发展中的作用及机制,为胃癌的临床治疗提供潜在靶点。方法实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)及Western blot技术检测胃癌组织中Wnt7a mRNA及蛋白水平的表达变化,通过免疫组织化学法检测癌胃癌组织中Wnt7a的表达和分布情况,以癌旁正常组织作为对照;观察Wnt7a的差异表达与胃癌临床病理参数及预后的关系;Wnt7a过表达质粒转染胃癌细胞系SGC7901,通过MTS实验和EDU实验检测细胞的活性和增殖状态,流式细胞仪检测细胞的凋亡状态,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移状态。结果 qRT-PCR及Western blot结果显示,与癌旁正常组织相比,Wnt7a在m RNA及蛋白水平表达下调,免疫组织化学结果显示Wnt7a阳性表达呈棕黄色颗粒状,主要分布于细胞胞质,在胃癌组织的阳性率明显低于正常胃组织;与高表达Wnt7a患者相比,Wnt7a低表达患者胃癌的肿瘤体积相对较大,TNM分期较高,淋巴结转移率较高,预后较差;在SGC7901细胞中过表达Wnt7a能够显著抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,对细胞的凋亡能力无明显影响。结论在胃癌的发生发展中,Wnt7a发挥了抑癌基因的作用,抑制细胞增殖、侵袭和迁移。

ALS转基因小鼠脊髓中miRNA-132表达减少BDNF表达增加

目的研究miRNA-132和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)转基因小鼠脊髓中的表达变化,探讨miRNA-132、BDNF在ALS发病中的作用。方法取SOD1-G93A ALS转基因鼠发病早期(95d)、中期(108d)和晚期(122d)脊髓组织,应用qRT-PCR及原位杂交(hybridization in situ, ISH)技术检测miRNA-132的表达及定位,应用qRT-PCR及Western blot技术检测BDNF在mRNA及蛋白水平变化,免疫荧光技术检测BDNF在脊髓中的表达及分布,以同窝野生型鼠作为对照。结果与野生型鼠比较,miRNA-132在ALS转基因鼠脊髓组织表达下降,miRNA-132阳性信号主要定位脊髓前角细胞胞体;在ALS转基因鼠脊髓组织BDNF mRNA及蛋白水平均增高,BDNF免疫阳性细胞主要表达于脊髓前角神经元,表达信号明显增强。结论 miRNA-132、BDNF可能在ALS发病过程中发挥了重要作用。

miR-181通过Prox1促进人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖并抑制凋亡

目的观察miR-181、同源异型盒转录因子(Prox-1)对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响,探讨miR-181及Prox-1在乳腺癌发生发展中的作用。方法荧光定量PCR检测癌旁乳腺组织、导管内癌组织、浸润性导管癌组织中miR-181的表达;pRFP-miR-181-inhibitor质粒转染乳腺癌细胞系MCF-7,荧光定量PCR和Westernblot检测Prox1mRNA及蛋白水平;EdU检测细胞增殖;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡。结果与癌旁乳腺组织比较,导管内癌组织、浸润性导管癌组织内miR-181mRNA表达上调(P<0.01);抑制MCF-7细胞内的miR-181的表达,Prox1在蛋白水平明显上调(P<0.05);MCF-7细胞的增殖能力减弱(P<0.05)而凋亡增强(P<0.05)。结论miR-181可能通过抑制Prox1促进细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,参与了乳腺癌的发生。

BDNF在ALS转基因小鼠活化星形胶质细胞中表达升高

目的探索脑源性神经营养因子(BDNF)在肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠神经元及星形胶质细胞(AS)表达及定位,进一步明确ALS发病机制。方法以同窝野生型(WT)小鼠为对照;免疫荧光法检测BDNF在95、108和122 d ALS转基因小鼠脊髓组织神经元及星形胶质细胞中的表达;以神经元样杂交细胞系NSC34(具有运动神经元特征)细胞为模型,建立野生型及SOD1-G93A突变型NSC34细胞模型;取同窝新生转基因小鼠,进行原代星形胶质细胞培养,免疫印迹检测BDNF在NSC34模型细胞及原代星形胶质细胞中的表达水平。结果与WT小鼠相比,在95、108和122 d ALS转基因小鼠脊髓组织中,BDNF在神经元内表达降低(P<0.05),而BDNF/GFAP(神经胶质纤维酸性蛋白)双阳性细胞明显增多;BDNF在SOD1-G93A突变型NSC34模型细胞中表达下降(P<0.05),在活化星形胶质细胞中表达增加(P<0.05)。结论BDNF在ALS转基因小鼠神经元及活化星形胶质细胞的表达变化及定位,提示神经元自主机制与星形胶质细胞介导的非自主机制在ALS的发病中起到重要作用。