ALYREF对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的探讨ALYREF在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用TCGA数据库分析ALYREF在肺腺癌中的表达及其与预后的关系;应用免疫组化验证肺腺癌及其癌旁组织中ALYREF的表达水平。构建沉默ALYREF的A549和H1299稳转细胞株;通过RTCA和克隆形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验评估细胞迁移,运用Western blot检测增殖、迁移及EMT相关蛋白的表达水平。RNA-seq测序沉默ALYREF的A549细胞及对照细胞,进行GO/KEGG通路富集分析,分析ALYREF可能参与的功能通路,并通过功能回复实验进行验证。结果TCGA数据库分析结果显示:ALYREF在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.001);高表达ALYREF患者的总生存期(overall survival,OS)更短(P<0.05)。沉默ALYREF可以抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和EMT进程。RNA-seq测序显示:差异表达基因在TGF-β通路富集最明显;Western blot检测显示沉默ALYREF可抑制肺腺癌细胞中TGF-β的表达;功能回复实验显示激活TGF-β可以逆转沉默ALYREF引起的细胞迁移能力下降。结论ALYREF在肺腺癌组织中高表达,且与不良预后相关,可能通过TGF-β通路促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和EMT。

免疫功能正常者肺诺卡菌感染并支气管扩张1例

肺诺卡菌感染多发生于免疫功能低下或免疫功能缺陷及肺部有结构性病变的患者,免疫功能正常者肺诺卡菌感染的病例报道甚少,且此类患者的临床表现缺乏特异性,易出现漏诊、误诊。现对2020年1月十堰市太和医院收治的一例免疫功能正常者肺诺卡菌感染并支气管扩张的患者临床资料进行分析,并结合近年来国内外报道的相关文献进行复习,提高医务人员对肺诺卡菌感染的认识,以减少误诊,避免延误诊疗,降低该病的死亡率。

MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度、最佳扩增时间选择及评估

目的筛选多交叉置换扩增技术(MCDA)结合纳米生物传感条(LFB)检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度、最佳扩增时间,并对MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的效果进行评估。方法根据肺炎克雷伯菌特异的保守基因rcsA的核苷酸序列,采用Primer Premier Version 5.0软件设计一套特异性MCDA引物,其中交叉引物CP1和扩增引物C1分别标记异硫氰酸荧光素(FITC)和地高辛(Dig),建立25μL的MCDA反应体系。将温度按60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃依次递增,分别扩增1 h,然后85℃加热5 min后终止反应,使用实时浊度仪观察DNA浓度曲线,绘制MCDA扩增反应动力学图,确定最佳扩增温度。在筛选出的最佳扩增温度下,选择10 min、20 min、30 min和40 min 4个时间点分别对10 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL和1 fg/μL的肺炎克雷伯菌DNA进行MCDA扩增,使用LFB进行检测,根据LFB检测结果确定最佳扩增时间。使用MCDA-LFB法检测36株肺炎克雷伯菌和18株非肺炎克雷伯菌,使用临床分离培养法和MCDA-LFB法检测呼吸道感染患者的42份痰液样本和3份健康对照痰液样本,观察MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的灵敏度、特异度。将肺炎克雷伯菌ATCC700603标准株基因组DNA分别稀释至10 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL和1 fg/μL,使用MCDA-LFB法检测,依据结果是否阳性判定检测下限。结果MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度为63℃,最佳扩增时间为30 min。MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的灵敏度、特异度均为100%。MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的检测下限为100 fg/μL。结论MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度为63℃,最佳扩增时间为30 min。MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的方法简单、快速、特异、灵敏,可以用于临床呼吸道标本中的肺炎克雷伯菌早期筛选。