肾透明细胞癌中核蛋白1对阿昔替尼耐药的作用及机制

目的:寻找肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)对阿昔替尼耐药的潜在机制,以期拓展对阿昔替尼耐药的理解,便于设计更有针对性的治疗方案,提高患者的治疗效果及生存预后。方法:通过摸索阿昔替尼对ccRCC细胞系786-O与Caki-1的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50)),使用此浓度下的阿昔替尼体外反复刺激细胞30个周期,构建对阿昔替尼耐药的细胞系,未被阿昔替尼处理过的细胞系为敏感细胞系,检测耐药细胞系及敏感细胞系在细胞增殖、细胞凋亡水平上的表型差异。通过转录组测序,在两耐药细胞系共同上调表达的差异基因内筛选出可能参与耐药过程的基因,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)验证耐药细胞系中靶基因的表达量。在基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库中分析靶基因在ccRCC肿瘤及瘤旁组织的表达差异,在卡普兰-梅尔绘图(Kaplan-Meier Plotter,K-M Plotter)数据库中分析靶基因对ccRCC患者的预后影响。对耐药细胞系的靶基因使用慢病毒载体的核糖核酸干扰进行敲低后,再次检测细胞表型差异。使用WB检测不同处理细胞系的细胞凋亡相关蛋白的水平,寻找可能导致耐药的分子通路。结果:体外成功构建出对阿昔替尼耐药的ccRCC细胞系786-O-R与Caki-1-R,其较敏感细胞系的IC_(50)显著升高(分别高出10.99μmol/L,P<0.01;11.96μmol/L,P<0.01)。细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、集落形成、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)实验结果显示耐药细胞系的增殖能力较敏感细胞系下降,但凋亡染色结果显示耐药细胞系的细胞凋亡水平显著降低(P<0.01)。尽管对阿昔替尼耐药,但耐药细胞系在20μmol/L阿昔替尼环境中无明显的新生肿瘤细胞产生。转录组测序筛选出核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)基因,其核糖核酸(P<0.0001)及蛋白表达水平在耐药细胞系中显著上升。GEPIA数据库分析结果显示NUPR1在ccRCC肿瘤组织中显著高表达(P<0.05);NUPR1高表达的ccRCC患者生存预后更差(P<0.001)。细胞凋亡染色结果显示,敲低NUPR1后抑制了各耐药细胞系对阿昔替尼的抗凋亡能力(786-O,P<0.01;Caki-1,P<0.05)。WB结果显示,敲低NUPR1,被阿昔替尼处理后耐药细胞系的B细胞淋巴瘤(B-cell lymphoma-2,BCL2)蛋白水平下降,BCL2相关X蛋白(BCL2-associated X protein,BAX)水平增加,前体caspase3蛋白表达水平下降,剪切体c-caspase3水平上升。结论:ccRCC细胞系通过NUPR1-BAX/BCL2-caspase3通路减少细胞凋亡,参与了对阿昔替尼的耐药过程。

早期慢性阻塞性肺疾病诊断及治疗进展与争议

慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)作为呼吸系统重要的慢性疾病之一,其早期识别与干预是国内外关注的热点。本文围绕国内与国际对早期慢阻肺定义上存在的争议、早期慢阻肺相关实验室评估与早期筛查、是否需要药物干预等相关问题与进展进行综述,以期对早期慢阻肺的识别和防控有进一步的认识。

血嗜酸性粒细胞作为生物标志物在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展

慢性阻塞性肺疾病全球倡议(global initiative for chronic obstructive lung disease,GOLD)2017首次推荐将血嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)作为慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)生物学标志物,GOLD 2020再次强调血EOS对于指导急性加重高风险的慢阻肺稳定期患者吸入糖皮质激素(ICS)的治疗大有裨益。血EOS指导临床决策强调个性化评估、精准治疗,对于推动慢阻肺治疗由"风险管理型"向"靶向型"发展具有巨大潜力。但其临床应用的有效性和安全性仍存在争议:①血EOS能否真实反映慢阻肺患者气道EOS炎症程度、疾病严重程度和急性加重风险;②血EOS升高患者加用ICS对于预防急性加重的疗效是否确切;③血EOS升高患者加用ICS的疗效与ICS本身带来的肺炎等副作用的效益-风险比仍需权衡;④血EOS用以预测急性加重风险和ICS疗效的阈值仍未得到统一;⑤血EOS相关的靶向治疗疗效参差不齐。近年来,血EOS逐渐成为慢阻肺患者治疗领域的热点和争议的焦点,相关领域研究层出不穷,本文针对血EOS自身稳定性、对慢阻肺气道炎症反应、疾病严重程度、急性加重风险预测的有效性、指导ICS临床应用的价值、靶向治疗等方面的研究进展和争议进行综述,以期对血EOS临床应用的有效性和安全性有更深入的理解。

慢性阻塞性肺疾病患者血嗜酸粒细胞分布及临床特征

目的分析社区与门诊慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者的血嗜酸粒细胞(EOS)分布,并研究高EOS型慢阻肺患者的临床特征和相关因素。方法本研究纳入237例稳定期慢阻肺患者,其中男193例,女44例,年龄范围58~76岁,中位数为68岁,45例来源于2012—2013年“中国成人肺部健康”流行病学调查获取的社区患者,192例为2013年8月至2014年11月以及2015年9月至2018年5月期间就诊于北京大学第三医院呼吸科门诊的患者。以血EOS计数100个/μl为界值,分为高EOS组(146例)和低EOS组(91例),比较患者的人口学特征、呼吸道症状、急性加重、肺功能、炎症、影像学等指标。结果社区慢阻肺患者的血EOS中位数为111.4个/μl,门诊患者中位数为110.0个/μl,二者差异无统计学意义(P>0.05)。总体患者的EOS计数中位数为110.0个/μl,EOS百分比中位数为1.8%。高EOS组中,EOS≥300个/μl占11.4%。高EOS组男性比例较高(85.6%比74.7%),GOLD分级较重,中性粒细胞百分比较低(61.7%比64.7%),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素分析后,高EOS与患者年龄增加(OR=1.035,95%CI:1.004~1.067,P=0.029)、GOLD分级较重(P=0.015)以及中性粒细胞百分比较低(OR=0.956,95%CI:0.923~0.991,P=0.015)存在相关性。结论社区和门诊慢阻肺患者的血EOS分布无明显差异。约60%的慢阻肺患者血EOS≥100个/μl,与高龄、男性、严重气流受限和低中性粒细胞相关。