我国流行的4株狂犬病街毒株G基因序列及分子流行病学研究

目的探讨我国流行的狂犬病毒(RV)基因差异,评价现有疫苗的适用性。方法通过RT-PCR并对其产物测序后获得4株RV街毒株的G基因序列以及G与M和L基因的区间序列。利用计算机分析软件比较4株RV与已经发表的毒株的核苷酸和推导的氨基酸序列。结果糖蛋白(GP)完整的编码基因序列长度为1575 bp。GP氨基酸序列同源性明显高于相应的核苷酸序列(除Mokola外),4株街毒与CTN的同源性高于aG株。GP不同区段比较显示,膜外区同源性高于膜内区。G-M区间核苷酸序列长度为5 bp;除广西4外,其余毒株100％同源。GL区间核苷酸序列长度为2,4 bp,越1与肥东同源性为100％。结论4株RV均属于基因I型。广西的毒株之间存在不同的来源。街毒与疫苗株之间基因存在差异。4株RV与SAD-B19进化途径相近,与PV株相差较远。越1与肥东株亲缘关系极近,可能是由同一毒株演化而来。

武汉市HIV-1相关基因序列分析及亚型分布

目的研究武汉市HIV感染人群中的HIV毒株的亚型分布特点和流行规律。方法采集武汉市60名已被确认为HIV-1感染者的抗凝全血样品,提取前病毒DNA,用巢式聚合酶链反应方法(nested-PCR)扩增病毒膜蛋白env基因的C2-V5区及gag基因的部分区段,对PCR纯化产物直接测序,并应用GCG软件对序列进行分析。结果通过PCR扩增得到60份样品的结果,其中env基因序列45份、gag基因序列52份。依据env和gag区基因序列,与HIV-1各个亚型国际参考株比较,通过系统进化分析,最后确定武汉市样品分属5个亚型,分别为HIV-1B亚型中的泰国B(B’)亚型32份,流行重组型CRF07-BC12份,流行重组型CRF01-AE9份,A亚型1份和C亚型6份。结论武汉市存在多种HIV-1亚型,应加强对HIV-1毒株亚型变异的监测,及时调整防治策略。

结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法的建立与应用

目的建立结核分枝杆菌的荧光定量PCR检测方法,探讨荧光PCR检测痰标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法根据结核分枝杆菌基因保守序列设计引物和探针,并构建标准品。对102例培养涂阳的结核痰液标本和45例非结核感染者的痰标本,应用荧光定量PCR法、痰涂片抗酸染色法检测结核分枝杆菌。结果荧光定量PCR、抗酸染色法检测结核分枝杆菌的特异性分别为100%、30%。结论荧光定量PCR是一种快速、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,具有重要的应用价值。

广东口岸HIV流行毒株基因亚型分析

目的通过对广东口岸国际旅行人员中人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的亚型分析,监测出入境口岸HIV毒株的流行状况及其变化。方法从36例HIV-1抗体阳性样品中提取病毒RNA,逆转录后套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增HIVgag基因核心蛋白p17/p24片断,对PCR产物直接进行核苷酸序列测定,所获序列与各亚型国际参考序列比对,确定基因型并进行系统进化树分析。结果36例样品gag区序列分析共发现8种HIV-1亚型和重组型,其中CRF BC重组型14例(38.9%)(CRF07 BC重组型13例,CRF08 BC重组型1例),CRF01AE重组型12例(33.3%),CRF02 AG重组型3例(8.3%),B亚型2例(5.6%),Al、C、G及J亚型各1例(2.8%),1例样品分型不明确。这些不同亚型的感染者来自包括中国在内的11个不同国家和地区。结论广东口岸国际旅行人员中HIV-1亚型和重组型种类复杂多样,通过监测国际旅行人员中HIV感染者基因型分布及其变异,发现和鉴定新型毒株,对于艾滋病的预防和控制十分重要。

乙型肝炎患者体内病毒复制水平的试验观察

目的探讨乙肝病毒感染者体内血清标志物与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)和转氨酶的相互关系及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标志物,采用实时荧光定量PCR方法检测HBV-DNA,采用速率法测定血清内的转氨酶。结果随着病毒复制水平的增加,"大三阳"的检出率具有逐渐增加的趋势,而"小三阳"的检出率具有逐渐减少的趋势;"大三阳"与患者体内血清转氨酶异常检出率显著高于"小三阳";在"小三阳"中,当HBV-DNA大于105时,转氨酶异常者的检出率显著增加,而"大三阳"中没有观察到该结果。结论"大、小三阳"可作为HBV复制和疾病进展评估的参考指标。

广州市2004-2005年HIV-1感染者亚型分析

目的了解广州市艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况。方法从2004-2005年采集的92份HIV-1抗体阳性者抗凝全血中,提取前病毒DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增gag和env区基因并测定序列,与国际标准参考序列比较确定亚型。结果经系统进化树分析,92份样本中34份为CRF01-AE,40份为CRF07-BC,7份为CRF08-BC,3份为欧美B,6份为泰国B(B’),2份为C。结论广州市HIV-1流行株以CRF01-AE和CRF07-BC为主,也存在CRF08-BC、B、B’及C亚型。

出入境人群HIV-1型env C2-V3区段基因序列分析和亚型研究

目的了解出入境人群艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者毒株基因亚型分布及流行特征。方法收集2001年以来上海口岸HIV抗体检测确认阳性的血样标本,提取前病毒DNA,使用套式聚合酶链反应进行体外扩增,获得包膜蛋白区基因(env)的核酸片段,测定其序列和进行亚型分析。结果获得20例标本的亚型分析结果,共检出8个亚型,包括B亚型7例,CRF02-AG3例,C亚型3例,CRF01-AE 2例,A亚型2例,B、CRF07-BC和CRF08-BC亚型各1例。上海口岸HIV-1毒株亚型分布于11个国家和地区,主要流行B亚型。结论上海口岸流行的HIV-1毒株复杂多样,出入境人员是我国HIV毒株输入的主要渠道,流行毒株以性接触传播为主。

中国首例HIV-1 J亚型毒株的鉴定

目的通过对1例来自刚果的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者样品进行序列分析,鉴定其亚型种类。方法从该感染者血浆样品中提取RNA,经逆转录后采用套式PCR扩增HIV env、gag及pol基因的部分区段,PCR产物直接测序,将所获序列与参考序列进行比对分析,计算基因距离及构建系统进化树。结果该感染毒株样品序列与HIV-1 J亚型国际参考株J.SE.93及J.SE.94聚在一起,与两参考株序列在env基因区距离均为8.2%,pol基因区距离分别为6.4%和6.3%,gag基因区距离分别为8.9%和8.0%,证实其为HIV-1 J亚型。这是国内首次报道检出HIV-1 J亚型。结论HIV-1 J亚型毒株已随国际旅行者传入我国,加强对国际旅行人员中HIV毒株亚型的监测具有重要意义。

C群脑膜炎球菌结合疫苗的质量控制与生产的科学挑战

世界卫生组织 (WHO)生物制品标准化专家委员会于 1976年通过了脑膜炎球菌多糖疫苗的建议 ,并于 1978年和 1981年进行了修订。在临床研究中 ,疫苗的有效率至少达 90 % ,证明其在疫苗接种计划中高度有效。然而 ,不能在幼婴中诱生保护性应答或免疫记忆制约了其在英国婴儿免疫接种计划中的应用。随着 b型流感杆菌 (Hib)结合疫苗的成功引入 ,C群脑膜炎球菌 (Men C)荚膜多糖结合疫苗的研究取得了显著的进展。临床对照试验已证实它们在所有年龄组中均可诱生针对 Men C多糖的保护性水平的抗体 ,并且作为 T细胞依赖性抗原 ,能诱导免疫记忆和抗荚膜抗体的亲和力成熟。英国引入 Men C结合疫苗后 ,证实该疫苗可提供保护性免疫。 WHO已经制定了有关这些新疫苗生产和检定的建议。

两年来的反向疫苗学研究

上世纪从减毒活菌的免疫接种到更安全的亚单位疫苗的制备 ,都是采用传统的疫苗研制方法。该法要求在体外培养病原体并用生物化学、免疫学、微生物学方法对它进行分析。尽管这种方法在几种疫苗研制中已取得成功 ,但耗时长且对许多人类病原体无法研制相应的疫苗。目前 ,基因组法能够从在基因芯片上预测所有抗原开始设计疫苗 ,而不依赖其丰度 ,也不需在体外培养微生物。在过去几年里已被成功运用的新策略反向疫苗学已根本改变了疫苗的研究方法。本文论述了第一个反向疫苗学的例子—— B群脑膜炎球菌的研究以及该法对于研制抗其他人类病原体的新型疫苗的应用。

免疫接种质量标准指导方针

这是 1997年免疫接种质量标准的修订版 ,也是受美国传染病学会 (IDSA)实施指导方针委员会委托建立的系列指导方针之一。这个资料被视为卫生保健标准 ,而不仅仅是实施指导方针 ,因为这些建议有着强有力的证据 ,可以普遍实施 ,很少例外。这些指导方针的目的是为了给那些对婴儿、儿童、青少年以及成年人作出免疫决定的临床医师提供帮助。这个文件是对以前由国家组织制定的基于证据的方针的概括。对每个指导方针均采用标准分级系统确定建议的力度以及审核被文献引用的论据的质量。其应用对象为包括儿科医生、通科医生、内科医生 (包括专家 )、产科医生以及其他提供免疫接种的卫生保健人员。专家组成员都是成人和儿科传染病领域的专家。实施指导方针委员会及有关评论家已对该文件作了客观评价 ,并由 IDSA委员会通过。对遵照这些标准的检测指标也包括在内。该文件将被公布在 IDSA的主页 (http://www.idsociety.rog/.)上。