水稻小GTP蛋白基因Osrab5B基因的克隆和鉴定

用已知遗传图位的BAC克隆片段 ,对水稻 (Oryzasativa)小穗cDNA文库进行筛选 ,获得一个水稻小GTP结合蛋白 (smallGTP bindingprotein ,SGP)的相关序列 ,序列测定后以该cDNA序列为基础将 4个表达序列标记 (EST)进行了电子克隆 (electroniccloning) ,根据电子克隆结果设计引物 ,利用RT PCR方法获得了一个水稻 (Oryzasati va)中尚未鉴定的cDNA克隆Osrab5B ,长 10 16bp。它与龙船海棠属 (Mesembryan themumcrystallinum)和百脉根属 (Lotusjaponicus)命名为rab5B基因 (序列登录号分别是AJ0 0 62 2 5和Z73939)有着高度同源性 (cDNA核苷酸序列ID值分别大于 74 %和76% ) ,同属rab家族的一个新的亚族。进而根据Osrab5B的cDNA序列设计引物 ,扩增得到Osrab5B的基因组克隆 ,序列分析表明它至少有 7个内含子和

水稻极度分蘖突变体的分离和遗传学初步研究

通过 EMS诱变处理栽培稻粳籼 89(Oryza sative L .indica JX89)种子 ,从 M2 代植株中筛选得到一株突变体 ,其植株形态表现为叶细、色谈、植株矮化和极度分蘖。在将近一年的营养生长过程中 ,分蘖总数达到 2 0 0 0多个 ,命名为极度分蘖突变体 (Excessive tillering mutant) ext37.ext37自交所得 M3和 M4 代植株表现同一表型。突变体自交及其与 JX89和丰矮占 5号 (FAZ- 5 )杂交的 F1 、F2 代结果表明该突变为显性遗传方式 ,可能涉及两对等位基因。为了观察突变基因对下游基因表达影响的程度 ,取生长期 4 4天的亲本 JX89和突变体 ext 37的节间分生组织提纯细胞总 RNA,进行基因表达谱差异显示分析。结果表明突变体与亲本的基因表达模式有明显的差异 ,说明可能是处在上游调控基因的突变影响了下游许多基因的表达。

SSH法获取水稻矮化突变体相关的cDNA片段

利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69作为检测子 ,TGA 2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA 2和dwarf69特异表达的cDNA。经反式Northern检测这两个文库共得到 1 0个阳性克隆。序列分析表明有两个序列为水稻中首次报道 ,一个序列有相应的基因组序列报道 ,但其cDNA序列是首次报道。

水稻重复序列RRD3在转基因植物中的启动子功能

来源于水稻 (OryzasativaL .)的一个 82 0bp多拷贝重复序列RRD3 ,含有植物启动子TATA_box、CAAT_box等特征保守基元。用RRD3取代Ti载体pBI12 1中的CaMV 35S启动子 ,通过植物转化鉴定RRD3的启动子功能。组织化学分析表明 ,根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)LBA44 0 4转化后的烟草 (Nico tianatabacumL .)再生植株和水稻愈伤组织都显示了gusA基因的表达 ,并且发现转基因烟草茎端组织的GUS活性比其他部位强。这些结果提示RRD3在转化的植物中行使了启动子功能 ,该DNA片段中启动子核心功能序列的确定正在进行中。

λDNA体外重包装法进行化学诱变的初步研究

λDNA体外重包装技术,是基因工程中的一个重要技术。该方法是先把带有目的基因的外源DNA片段插入到DNA载体上,然后再与发生了突变的特殊噬菌体提供的噬菌体壳蛋白混合。即可在离体条件下装配成有感染活性的噬菌体颗粒,以用于基因组文库的构建和外源基因表达的研究。λDNA体外重包装,要求λDNA长度约在野生型λDNA的75-105％之间。在此范围以外,就不能包装成噬菌体颗粒。另外,λ噬菌体是迄今为止研究得最为详尽的噬菌体,现在已经知道λ噬菌体约有61个基因,其中有一半参与了噬菌体的生命周期活动。

水稻矮化突变体差异表达cDNA片段的克隆与分析

利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离本实验室获得的一株水稻矮化突变体dwarf6 9与其野生型对照品系特光矮_2 (Oryzasativa ,TGA_2indica)间表达有差异的cDNA片段 .分别以dwarf6 9作为驱赶子 ,TGA_2为检测子 ,以及以dwarf6 9作为检测子 ,TGA_2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA_2和dwarf6 9中特异表达的cDNA .经反式Northern检测这两个文库共得到

利用有序差异显示技术克隆受稻瘟病菌诱导表达的水稻cDNA的研究

利用有序差异显示技术 (ODD)分析受稻瘟病菌诱导表达的水稻基因 ,通过反式RNA印迹进行辅助筛选 ,获得了 37个在接种稻瘟病菌后表达量增强的水稻cDNA克隆 .采用RNA印迹对其中 5个克隆在接种稻瘟病菌后的表达分析表明 ,这些克隆在抗病以及感病的水稻株系中都具有诱导表达的特点 .根据序列同源性分析 ,与这些克隆序列相应的同源基因可能涉及抑制病原菌生长、清除真菌毒素、传递抗病信号以及调节宿主生理状态等几方面的功能 .

水稻rab5B基因在大肠杆菌中的表达、纯化和GTP结合分析

Rab5B类蛋白因为其编码产物的N端具有特殊结构而被认为是一类特殊的蛋白质 .水稻rab5B基因Osrab5B是这类蛋白质基因在单子叶植物中的首例发现 .将Osrab5B基因的编码序列按正确读码框重组到具有谷胱甘肽硫转移酶 (glutathioneS transferase,GST)融合标签的 pGEX 4T1表达载体中 ,转化大肠杆菌 ,获得了稳定表达目标融合蛋白的菌株 ,经GSTrapTM 柱纯化 ,获得了纯化的目标融合蛋白 .GTP结合试验表明 ,在原核细胞中表达出的GST

水稻矮化突变体G蛋白α亚基基因的结构和表达

利用γ-Co60辐射诱发水稻特光矮-2(Oryza sativa L.cv.TGA-2)产生变异,获得一种稳定遗传的新型水稻矮化突变体dwarf69。dwarf69和TGA-2及其杂交后代F1、F2、F3成熟期的株高数据表明矮化表型受一对隐性基因控制。进一步研究发现,虽然dwarf69和TGA-2的G蛋白α亚基基因(Rice G protein alpha-subunit,RGA)编码区核苷酸序列只有一个核苷酸的差异,但RGA在野生型TGA-2中的表达量明显高于在突变体dwarf69中的表达量。对矮化突变体dwarf69和野生型TGA-2的RGA基因5'上游区的序列分析表明,dwarf69 RGA 5'上游区比TGA-2RGA 5'上游区多出1 076 bp。首次报道水稻矮化突变体中的RGA 5'上游区序列与其野生种的RGA 5'上游区序列存在显著的差异。

一种水稻分蘖突变体的初步分析(简报)

通过EMS(甲基磺酸乙酯,ethylmethanesulfonate)诱变处理籼稻丰矮占5号的种子,在M2代中分离到一株少分蘖突变体,命名为ret5-5(reducedtillermutant)。植株表现为不分蘖,自交所得M3、M4和M5代植株表现为0-2个分蘖,而原正常品种FAZ-5同期平均分蘖数为8.2。突变体与FAZ-5的杂交结果显示该突变表型为隐性突变。在F1代自交所得F2和F3代植株出现性状分离,突变可能涉及2个或2个以上的基因。

水稻S_5区候选克隆R2I19的筛选及序列信息学分析

以水稻广亲和品种Cpslo17为材料 ,构建了一个覆盖 9倍核基因组的cosmid文库 ,其平均插入片段约4 0kb。以与广亲和位点紧密联锁的单拷贝分子标记BAC2 3D12的R末端为探针 ,从cosmid文库中筛选得到一个阳性克隆R2I19(～ 32kb)。结合S5位点的高密度连锁图和物理图谱 ,初步确定为S5区候选克隆。对该克隆的 2个TAC亚克隆TRW15 10 (～ 15kb)及TRW15 17(～ 15kb)进行了初步的生物信息学分析 ,证实与已知的水稻基因组序列有很高的同源性 ,并显示其中可能含有与水稻育性相关的基因。

水稻重复序列RRD3在CHO和3T3细胞中的启动子活性

RRD3是通过变性 -复性动力学从水稻基因组中克隆到的一个中度重复序列 .将 RRD3作为启动子亚克隆到氯霉素乙酰基转移酶基因为报告基因的 p CAT载体上 ,转染 5种动物细胞 .结果表明在 CHO、3T3细胞中能够启动 CAT基因的表达 .利用核酸外切酶 和 PCR构建了 RRD3的系列缺失体 ,经转染后的 CAT活性分析表明 ,该序列中存在多个与哺乳动物细胞中启动基因表达有关的调控元件 .结合 RRD3在大肠杆菌和高等植物烟草中启动报告基因表达的活性 ,对重复序列与生物进化的关系进行了讨论 .

丝裂霉素C和二甲基亚砜对家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)的诱变

该文报道强诱变剂丝裂霉素C(MMC)和化学溶剂二甲基亚砜(DMSO)在家蚕蛹体内对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的诱变结果。MMC对BmNPV具有诱变效应:(1)导致蚕蛹发病时间延迟,发病死亡率下降,有显著的剂量效应;(2)部分病蛹体内发生异常形态多角体,继代试验证实具有遗传稳定性。其中具对角线裂痕的四角形超大多角体(150～300μm)尚属首次发现;(3)诱变的BmNPV多角体内部结构发生变化;(4)诱变的BmNPVDNA经EcoRI、BglII和BamHI酶切消化,其电泳图谱出现某些DNA泳带的增加或丢失。以上结果说明,MMC可能诱导BmNPV基因组发生了多处位点的突变。DMSO处理剂量在90μL/蛹及其以下各剂量组,对BmNPV无诱变效应。

水稻核基因组DNA的YAC克隆和鉴定

将EcoRⅠ部分消化的水稻(Oryza saliva L.)细胞核高分子量DNA电泳分部,回收大于200kb的片段,与内切酶消化过的酵母人工染色体(YAC)双质粒载体pJS97,pJS98DNA连接,转化酵母YPH252感受态原生质球,用Ura^-,TrP^-双选择培养基直接筛选转化子,已获得2000多个克隆。转化子DNA的Southern杂交显示插入片段在200～820kb范围。

G蛋白与植物细胞信号转导

本文概述了植物细胞信号转导的一些情况，并以信号转导中的G蛋白模型为依据，着重介绍植物细胞中存在的G蛋白，指出植物细胞G蛋白对于植物细胞信号转导的重要性。

家蚕转座子表达载体pSVHK1.4的构建

研究利用PCR方法扩增黑腹果蝇 (D .melanogaster)hsp70启动子 ,然后插入到质粒pcDNA3上水母绿色荧光蛋白基因gfp的上游 ,与之顺向拼接构建成含hsp70和gfp的重组质粒pCGH。将家蚕K1 4转座子序列从pUK1 .4亚克隆到真核表达载体pSVL中PvuⅡ位点 ,获得中间载体pSK1 .4。最后将hsp70启动子和gfp报告基因的融合片段从pCGH中亚克隆到质粒pSK1 .4中K1 .4片段上的BglⅡ位点处 ,从而完成对转座子表达载体pSVHK1 .4的构建。

水稻染色体DNA的交变脉冲电泳分析

从水稻完整的细胞核中释放出来的染色体DNA在交变脉冲电泳申表现为一种“240kb单位”的形式。这种单位,经限制性内切酶消化,可产生连续分布的大至1500kb的染色体DNA片段。文章讨论了“240kb单位”作为水稻染色体DNA基本结构单位的可能性。