目的使用R6G-ddATP作为双脱氧荧光底物建立单碱基末端延伸(SNaPShot)-凝胶荧光法快速检测3种高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)(HPV18、HPV33、HPV35)基因型。方法使用HPV质控品作为样本,R6G-ddATP双脱氧荧光...目的使用R6G-ddATP作为双脱氧荧光底物建立单碱基末端延伸(SNaPShot)-凝胶荧光法快速检测3种高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)(HPV18、HPV33、HPV35)基因型。方法使用HPV质控品作为样本,R6G-ddATP双脱氧荧光试剂作为底物,首先利用通用引物对HPV进行扩增,得到第一轮扩增产物,经纯化后作为后续SNaPShot反应的模板;然后利用特异性的一步延伸引物进行SNaPShot反应,生成带有R6G荧光标记的DNA延伸产物;产物经过琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像仪下观察电泳结果,通过不同的一步延伸引物对HPV进行分型。每个样本均重复检测3次,并与DNA测序结果进行比较。结果优选的SNaPShot反应的退火温度为55℃;仅需3 h即可对HPV进行分型;在该最适条件下使用R6G-ddATP/SNaPShot-凝胶荧光法检测3种HPV基因型,检测结果与测序结果一致。结论成功建立了3种HR-HPV基因型的微量检测方法——R6G-ddATP/SNaPShot-凝胶荧光法,可用于HPV基因型的快速检测。展开更多
文摘目的使用R6G-ddATP作为双脱氧荧光底物建立单碱基末端延伸(SNaPShot)-凝胶荧光法快速检测3种高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)(HPV18、HPV33、HPV35)基因型。方法使用HPV质控品作为样本,R6G-ddATP双脱氧荧光试剂作为底物,首先利用通用引物对HPV进行扩增,得到第一轮扩增产物,经纯化后作为后续SNaPShot反应的模板;然后利用特异性的一步延伸引物进行SNaPShot反应,生成带有R6G荧光标记的DNA延伸产物;产物经过琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像仪下观察电泳结果,通过不同的一步延伸引物对HPV进行分型。每个样本均重复检测3次,并与DNA测序结果进行比较。结果优选的SNaPShot反应的退火温度为55℃;仅需3 h即可对HPV进行分型;在该最适条件下使用R6G-ddATP/SNaPShot-凝胶荧光法检测3种HPV基因型,检测结果与测序结果一致。结论成功建立了3种HR-HPV基因型的微量检测方法——R6G-ddATP/SNaPShot-凝胶荧光法,可用于HPV基因型的快速检测。
