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重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
被引量:
1
1
作者
刘行辉
刘若兰
+6 位作者
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1436-1444,共9页
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战...
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战。之前的研究已经表明,一种识别GlcNAc的茶树菇凝集素6(Agrocybe aegerita lectin recognizing GlcNAc,AANL6)对末端的GlcNAc糖结构特异性识别,但是亲和力较低。为了改造更高效的末端GlcNAc糖识别工具,AANL6通过二聚化来提高单体的亲和力。将AANL6单体通过中间的接头序列(linker)进行分子水平的二聚化,然后克隆到pET-30a质粒上,转化至大肠杆菌表达菌BL21中。确立最优的表达条件,并大量表达纯化AANL6二聚体蛋白(根据linker命名为PA6和EAA6)。随后对AANL6二聚体进行纯度、分子量和糖结合活性研究。SDS-PAGE结果显示,AANL6二聚体纯度较高(92.5%),分子量介于66.2~116 kD之间,符合预期值88 kD的大小。等温滴定热量法(isothermal titration calorimetry,ITC)检测结果显示,二聚化的AANL6显著提高了对GlcNAc的结合能力(P<0.01)。糖结合活性检测显示,AANL6二聚体对末端的GlcNAc糖基化修饰与单体相比有着更高的特异性。这些结果显示,AANL6二聚体通过二聚化显著提高了对末端GlcNAc糖基化的亲和力和特异性,这不仅为未来的末端GlcNAc糖基化修饰的功能提供有效的识别工具,而且提供了一种新的改造凝集素的策略。
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关键词
N-乙酰葡萄糖胺
糖基化修饰
二聚化
糖识别工具
下载PDF
职称材料
空肠弯曲菌β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)突变体的设计及活性鉴定
2
作者
邓梦雪
杨秀怡
+3 位作者
龙云峰
刘若兰
刘行辉
苏延停
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期20-25,共6页
来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸,在O-连接N-乙酰半乳糖胺(O-GalNAc)修饰后面添加一个半乳糖,目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具,C...
来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸,在O-连接N-乙酰半乳糖胺(O-GalNAc)修饰后面添加一个半乳糖,目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具,CgtB蛋白质用于突变体设计。在基因水平删除N端30个氨基酸及C端的30个氨基酸得到Cgt1,将Cgt1构建在pMal-c5x表达质粒上并通过大肠杆菌进行原核表达。可溶性的Cgt1经过麦芽糖结合蛋白(MBP)亲和层析柱进行纯化并利用糖结合实验进行活性分析。结果显示,大肠杆菌体系可以成功表达可溶性重组Cgt1蛋白质,相对分子质量约为70000,重组的Cgt1具备结合O-GalNAc修饰蛋白质的活性;针对不同的标准糖蛋白,Cgt1只识别含有O-GalNAc修饰的黏蛋白(mucin);对于复杂的细胞样品,Cgt1可以特异性识别细胞内的O-GalNAc修饰。该研究开发的识别O-GalNAc修饰工具,为进一步研究O-GalNAc修饰的功能奠定了基础。
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关键词
β1
3-半乳糖基转移酶
N-乙酰半乳糖胺
原核表达
O-GalNAc修饰
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职称材料
西部大开发中科技税收优惠问题探讨
3
作者
刘行辉
《甘肃科技》
2001年第2期8-8,共1页
关键词
西部大开发
中国
科技税收
优惠政策
优惠方式
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职称材料
68046部队注重车辆保养成效显著
4
作者
刘行辉
《军用汽车管理》
2005年第1期63-63,共1页
68046部队针对沙漠地区环境恶劣、车辆损耗快的特点,严格落实车场日制度,建立车辆技术档案,定期组织车辆维修人员对所属车辆进行检查、维修,对责任心不强,保养制度不落实的驾驶员进行及时更换、调整。多年来,该部车辆安全行车一...
68046部队针对沙漠地区环境恶劣、车辆损耗快的特点,严格落实车场日制度,建立车辆技术档案,定期组织车辆维修人员对所属车辆进行检查、维修,对责任心不强,保养制度不落实的驾驶员进行及时更换、调整。多年来,该部车辆安全行车一千多万公里,从来没有因车辆技术问题而发生事故,多次被卜级机关评为“安全管理先进单位”。
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关键词
车辆保养
车辆技术
车辆维修
车辆安全
驾驶员
行车
沙漠地区
定期
保养制度
检查
原文传递
题名
重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
被引量:
1
1
作者
刘行辉
刘若兰
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
机构
湖北科技学院医学部药学院药理学教研室
湖北科技学院医学部基础医学院生物化学与分子生物学教研室
江汉大学环境与健康研究院持久性有毒污染物环境与健康危害湖北省重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第10期1436-1444,共9页
基金
国家自然科学基金(No.32000906)
湖北科技学院博士启动基金(No.BK202038)
国家级大学生创新创业训练计划(No.202210927009)资助。
文摘
N-连接糖基化的N-乙酰葡萄糖胺(N-acetylglucosamine,GlcNAc)末端修饰是一种缩短的糖基化修饰,与多种疾病密切相关,例如自身免疫性疾病、癌症和神经退行性疾病等。然而,因为缺乏有效的识别工具导致对这种修饰的功能研究仍然是一个挑战。之前的研究已经表明,一种识别GlcNAc的茶树菇凝集素6(Agrocybe aegerita lectin recognizing GlcNAc,AANL6)对末端的GlcNAc糖结构特异性识别,但是亲和力较低。为了改造更高效的末端GlcNAc糖识别工具,AANL6通过二聚化来提高单体的亲和力。将AANL6单体通过中间的接头序列(linker)进行分子水平的二聚化,然后克隆到pET-30a质粒上,转化至大肠杆菌表达菌BL21中。确立最优的表达条件,并大量表达纯化AANL6二聚体蛋白(根据linker命名为PA6和EAA6)。随后对AANL6二聚体进行纯度、分子量和糖结合活性研究。SDS-PAGE结果显示,AANL6二聚体纯度较高(92.5%),分子量介于66.2~116 kD之间,符合预期值88 kD的大小。等温滴定热量法(isothermal titration calorimetry,ITC)检测结果显示,二聚化的AANL6显著提高了对GlcNAc的结合能力(P<0.01)。糖结合活性检测显示,AANL6二聚体对末端的GlcNAc糖基化修饰与单体相比有着更高的特异性。这些结果显示,AANL6二聚体通过二聚化显著提高了对末端GlcNAc糖基化的亲和力和特异性,这不仅为未来的末端GlcNAc糖基化修饰的功能提供有效的识别工具,而且提供了一种新的改造凝集素的策略。
关键词
N-乙酰葡萄糖胺
糖基化修饰
二聚化
糖识别工具
Keywords
N-acetylglucosamine(GlcNAc)
glycosylation modification
dimerization
glycan identification tool
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
空肠弯曲菌β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)突变体的设计及活性鉴定
2
作者
邓梦雪
杨秀怡
龙云峰
刘若兰
刘行辉
苏延停
机构
湖北科技学院基础医学院
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第6期20-25,共6页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(32000906)
湖北科技学院博士启动基金项目(BK202038)。
文摘
来自空肠弯曲菌的β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)主要负责蛋白质O-连接糖基化的第二步延伸,在O-连接N-乙酰半乳糖胺(O-GalNAc)修饰后面添加一个半乳糖,目前CgtB已经被广泛应用于体外O-连接糖基化的合成。为了开发O-GalNAc修饰的识别工具,CgtB蛋白质用于突变体设计。在基因水平删除N端30个氨基酸及C端的30个氨基酸得到Cgt1,将Cgt1构建在pMal-c5x表达质粒上并通过大肠杆菌进行原核表达。可溶性的Cgt1经过麦芽糖结合蛋白(MBP)亲和层析柱进行纯化并利用糖结合实验进行活性分析。结果显示,大肠杆菌体系可以成功表达可溶性重组Cgt1蛋白质,相对分子质量约为70000,重组的Cgt1具备结合O-GalNAc修饰蛋白质的活性;针对不同的标准糖蛋白,Cgt1只识别含有O-GalNAc修饰的黏蛋白(mucin);对于复杂的细胞样品,Cgt1可以特异性识别细胞内的O-GalNAc修饰。该研究开发的识别O-GalNAc修饰工具,为进一步研究O-GalNAc修饰的功能奠定了基础。
关键词
β1
3-半乳糖基转移酶
N-乙酰半乳糖胺
原核表达
O-GalNAc修饰
Keywords
β1,3-Galactosyltransferase
N-acetylgalactosamine
prokaryotic expression
O-GalNAc modification
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
西部大开发中科技税收优惠问题探讨
3
作者
刘行辉
机构
甘肃庆阳镇原县地方税务局
出处
《甘肃科技》
2001年第2期8-8,共1页
关键词
西部大开发
中国
科技税收
优惠政策
优惠方式
分类号
F812.42 [经济管理—财政学]
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职称材料
题名
68046部队注重车辆保养成效显著
4
作者
刘行辉
出处
《军用汽车管理》
2005年第1期63-63,共1页
文摘
68046部队针对沙漠地区环境恶劣、车辆损耗快的特点,严格落实车场日制度,建立车辆技术档案,定期组织车辆维修人员对所属车辆进行检查、维修,对责任心不强,保养制度不落实的驾驶员进行及时更换、调整。多年来,该部车辆安全行车一千多万公里,从来没有因车辆技术问题而发生事故,多次被卜级机关评为“安全管理先进单位”。
关键词
车辆保养
车辆技术
车辆维修
车辆安全
驾驶员
行车
沙漠地区
定期
保养制度
检查
分类号
U471 [机械工程—车辆工程]
U472 [机械工程—车辆工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组茶树菇凝集素6二聚体的原核表达、纯化及糖结合活性鉴定
刘行辉
刘若兰
龙云峰
陈邦航
张峥嵘
敖欣
樊洁柔
李准洁
苏延停
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
2
空肠弯曲菌β1,3-半乳糖基转移酶(CgtB)突变体的设计及活性鉴定
邓梦雪
杨秀怡
龙云峰
刘若兰
刘行辉
苏延停
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
下载PDF
职称材料
3
西部大开发中科技税收优惠问题探讨
刘行辉
《甘肃科技》
2001
0
下载PDF
职称材料
4
68046部队注重车辆保养成效显著
刘行辉
《军用汽车管理》
2005
0
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