广州地区新生儿遗传代谢病串联质谱法筛查结果及筛查性能评估

目的:了解广州地区新生儿遗传代谢病病种的分布特征、发病率及确诊患者的临床转归,优化筛查指标以提高串联质谱法遗传代谢病筛查效能。方法:采用串联质谱法对2015年1月至2020年12月在广州市出生的272117名新生儿进行多种遗传代谢病筛查,以主要筛查指标2次超出阳性切值判断为筛查阳性,召回复查,对疑似母源性疾病连同母亲一并召回,复查仍阳性者进行生化及相关基因测序确诊。回顾性分析筛查结果、确诊病例的临床特点及转归,并进一步优化筛查指标。结果:在272117名新生儿中,初筛阳性1808例,阳性率为0.66%;召回复查1738例,召回率为96.13%;临床诊断时间中位数为15 d,确诊新生儿遗传代谢病79例,包括氨基酸代谢病23例、有机酸代谢病17例及脂肪酸氧化障碍39例。共计21个病种,常见病种为原发性肉碱缺乏症(26.6%)、甲基丙二酸血症(12.7%)及苯丙氨酸羟化酶缺乏症(11.4%),发现假阴性病例4例,均为citrin蛋白缺乏症。272117名新生儿遗传代谢病筛查总体发病率约为1/3444,阳性预测值为4.5%。确诊母亲患者32例,包括原发性肉碱缺乏症30例、异丁酰基辅酶A脱氢酶缺乏症及3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症各1例。遗传代谢病筛查总体检出率为1/2451。所有确诊病例随访至今,5例重型患儿(枫糖尿症1例、单纯型甲基丙二酸血症2例、肉碱-酰基肉碱移位酶缺乏症2例)早期死亡,10例有机酸代谢病患儿出现轻度精神运动发育迟缓。优化各病种筛查指标后,初筛阳性数降至903例,阳性预测值提高至9.1%,未遗漏确诊病例。结论:广州地区新生儿脂肪酸氧化障碍发病率相对较高,串联质谱法能有效筛查多种遗传代谢病,优化筛查指标可提高筛查效能。

疑似甲状腺素合成障碍性永久性先天性甲状腺功能减低症患儿TPO、DUOX2及DUOXA2基因突变分析

目的 探讨疑似甲状腺素合成障碍性永久性先天性甲状腺功能减低症（congenital hypothyroidism,CH）患儿TPO、DUOX2及DUOXA2基因突变特点及其与临床表型的关系.方法 回顾分析广州市新生儿筛查中心诊治随访的9例（含2011-2012年筛查获诊的6例）疑似甲状腺素合成障碍性永久性CH患儿临床资料,采用Sanger测序方法对TPO、DUOX2及DUOXA2基因所有外显子及其相邻内含子进行测序,分析基因型与临床表型的关系.结果 9例患儿中,4例检出TPO基因突变（其中3例为双等位基因突变,1例为单等位基因突变）,4例检出DUOX2单等位基因致病性突变,1例为DUOXA2基因已知致病突变c.738C＞ G（p.Y246X）携带者.TPO基因新突变c.1784G＞C（p.R595T）经SIFT及PolyPhen-2软件预测提示致病性可能性大.2例TPO双等位基因突变的青春期患儿呈典型永久性CH表型,伴有甲状腺肿大或结节.6例TPO、DUOX2或DUOXA2单等位基因突变者表现为不同程度的甲状腺功能低下.2011-2012年广州市433 578名新生儿CH筛查确诊156例CH,6例疑似甲状腺素合成障碍性永久性CH,其中1例确诊为TPO双等位基因缺陷,其余均为TPO、DUOX2或DUOXA2突变携带者.结论 TPO及DUOX2基因突变是广州地区疑似甲状腺素合成障碍性永久性CH患儿较常见的分子发病基础,TPO、DUOX2及DUOXA2单等位基因突变与CH发病有关,其临床表现具有显著异质性.广州地区TPO基因突变所致永久性CH罕见,新突变p.R595T致病性可能性大.

疑似甲状腺激素合成障碍性先天性甲状腺功能减低症患儿DUOX2基因热点变异及临床转归

目的探讨广州地区先天性甲状腺功能减低症(CH)患儿DUOX2基因变异及其临床表型特点。方法广州市新生儿筛查中心对2015年4月1日至9月30日出生的108899例新生儿进行CH筛查,确诊CH 83例,其中52例疑似甲状腺素合成障碍性CH(SDH)患儿进行了DUOX2变异热点区域(11个外显子)测序分析,随访3年。选择2011年至2012年确诊并进行DUOX2基因测序分析的96例SDH患儿为对照,比较不同时期CH患病率、DUOX2变异检出率及其临床特征。结果1.CH总体患病率2015年为1∶1312,其中SDH占73.5%(61/83例),与2011年至2012年比较,CH患病率增高(1∶1312比1∶2779),差异有统计学意义(P<0.001),SDH所占比例差异无统计学意义(73.5%比76.6%,P=0.593)。2.共52例SDH患儿进行了DUOX2热点区域测序,其中27例(51.9%)检出双等位基因变异(6例)或单等位基因变异(21例),发现1个可能致病新变异p.S1091F。无义突变p.K530X占已检出变异位点的51.5%(17/33位点),涉及16例(30.8%)SDH患儿。SDH患儿DUOX2变异检出率、突变谱特征与2011年至2012年比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。3.DUOX2无变异组与DUOX2变异组患儿新生儿干血斑促甲状腺素(bsTSH)、确诊时血清TSH(sTSH)、游离甲状腺素(FT4)及甲状腺球蛋白水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。27例DUOX2变异患儿中,24例(88.9%)为暂时性CH,3例为永久性CH。结论广州地区CH患病率呈增高趋势,51.9%的SDH患儿可检出DUOX2热点变异,临床转归以暂时性CH为主。p.K530X为最常见变异。

广州市2007年至2016年新生儿高苯丙氨酸血症筛查结果及36例苯丙氨酸羟化酶缺乏症患儿基因分析

目的了解广州市高苯丙氨酸血症（hyperphenylalaninemia，HPA）的患病率、临床分型、苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，例Ⅳ）基因突变特点，探讨删何基因型与表型的关系。方法回顾性分析2007年1月1日至2016年12月31日在广州市新生儿筛查中心进行HPA筛查的1936735例新生儿的筛查结果及临床病例资料。新生儿生后3～7d采集足跟血，制成滤纸血片，采用荧光定量分析法检测苯丙氨酸浓度，当苯丙氨酸〉120μmol／L为HPA初筛阳性，临床召回。复查血苯丙氨酸〉120μmol／L，苯丙氨酸／酪氨酸〉2．0，诊断为HPA。进一步行尿碟呤谱分析、红细胞二氢蝶啶还原酶活性测定、四氢生物蝶呤（tetrahydrobiopterin，BH4）负荷试验进行鉴别诊断。采用聚合酶链反应及sanger直接测序法对删日基因或6丙酮酰四氢碟呤合成酶（6-pyruvoyl tetrahydropterinsynthase，PTS）基因进行基因分析。结果1936735例进行筛查的新生儿中，64例HPA，患病率为l／30261。64例HPA中，54例（84．4％）PAH缺乏症，患病率为1／35865，其中17例（31．5％）经典型苯丙酮尿症（phenylketonuria，PKU），24例（44．5％）轻度PKU，l3例（24％）轻度HPA；10例（15．6％）BH4缺乏症，患病率约1／193674。54例PAH缺乏症患儿中，36例（66．7％）进行了剧H基因突变分析，其中，23例（63．9％）发现2个突变位点，13例（36．1％）发现1个突变位点，突变检出率为81．9％（59／72）。共发现34种突变，其中c．156G〉T（p．L52F）、c．462C〉A（p．Y154X）、c．854A〉G（p．H285R）、c．188196delCCCACATTG／c．1977insA（p．T63Kfs＊65）为4个新突变。高频突变位点主要有c．721c〉T（p．R241c）、c．728G〉A（p．R243Q）及c．1301c〉A（p．A434D），分别占检出突变位点的11．86％、10．17％及8．47％。18例轻度PKu中，4例检出c．721c〉T，4例检出c．1301c〉A；9例轻度HPA中，2例检出c．721c〉T，1例检出c．130lc〉A。结论广州市PAH缺乏症患病率低于全国平均水平，且多数表现为轻度PKu及轻度HPA。朋H基因c．721c〉T、c．728G〉A及c．1301c〉A为相对常见突变，其中c．721c〉T及c．1301C〉A临床表型较轻。

根据采血时间调整新生儿先天性甲状腺功能减退症筛查切值的初步研究

目的探讨采血日龄和季节对先天性甲状腺功能减退症(congenital hypothyroidism,CH)筛查的影响,建立切合广州地区实际情况的筛查切值.方法选择2015年1月至2017年12月广州市出生并进行促甲状腺素(thyroid stimulating hormone,TSH)初筛的新生儿进行回顾性分析.按采血日龄分为24~<48 h、48~<72 h、3~<7 d和≥7 d共4组,按出生季节分为春、夏、秋、冬4组.将2015—2016年筛查结果作为TSH初筛切值调整的依据,2017年筛查结果用来验证调整后切值的准确性.切值的设定采用百分位数法和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线确定,计算切值的特异度、敏感度、阳性预测值和阴性预测值.结果 2015—2016年共筛查新生儿459854名,初筛阳性7329例,复筛阳性371例,确诊CH 318例.根据不同TSH值的ROC曲线计算最佳的TSH切值为9 mIU/L(P98.7).按照采血日龄和季节进一步分析,最终确定采血日龄≥48 h时春夏秋季TSH切值设定为9 mIU/L,冬季为10 mIU/L;采血日龄24~<48 h时各季节切值均为10 mIU/L.2017年筛查新生儿264993名,应用调整后切值验证,整体初筛阳性率从1.27%降至1.02%,阳性预测值从6.07%增至7.58%,且未增加假阴性例数.结论根据采血日龄和季节调整TSH筛查切值能减少假阳性.

自回归求和移动平均模型在广州市新生儿先天性甲状腺功能减低症发病率趋势预测的应用

目的分析构建并应用自回归移动平均模型(ARIMA)对广州地区先天性甲状腺功能减低症(CH)发病率进行预测的可行性,为合理制定CH的防治、保健的策略及措施提供科学依据。方法汇总广州市1991-2018新生儿CH筛查发病率数据,基于1991-2016年CH发病率数据建立最优ARIMA模型,通过比较2017-2018年预测发病率和实际发病率对模型预测性能进行检验,并预测未来3年CH发病率趋势。结果1991-2018年CH发病率总体呈现上升趋势。基于1991-2016年CH发病率数据进行模型拟合,ARIMA(0,1,0)为最优模型,可以较好的拟合CH发病率的时间变化趋势。模型拟合的2017-2018年CH预测发病率和实际发病率相对误差最大值为7.9%,提供较准确的预测。预测的2019-2021 CH发病率分别为86.1/105、90.7/105、94.3/105。结论ARIMA(0,1,0)模型对新生儿CH发病率的拟合效果较好,可用于广州地区CH发病率的短期预测及动态分析。