良性增生前列腺组织中鸟氨酸脱羧酶活性及多胺含量的变化

采用比色法和高效液相层析法分别测定了２１例良性增生和８例健康人前列腺组织全匀浆及不同细胞中鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）和多胺水平。结果显示增生组全匀浆和间质细胞中ＯＤＣ活性分别为正常组相应部分的３．２和２．５倍；增生组每克湿重组织中腐胺、精脒和精胺的含量分别为正常组的２．２、３．４和６．０倍。提示ＯＤＣ活性及多胺含量升高与良性前列腺增生症的发生可能有密切关系。

良性增生前列腺组织及上皮和间质细胞中γ-GT活性及GSH含量研究

本文报道测定正常人和良性前列腺增生症(BPH)患者前列腺组织匀浆、上皮及间质细胞中r-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性及其底物还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果显示:①BPH组织匀浆、上皮及间质细胞中γ-GT活性显著升高,分别为正常前列腺相应组分的4.5、3.2和4.1倍,而GSH含量则明显降低;②正常及BPH组织上皮细胞中γ-GT活性均显著高于相应间质细胞,而GSH含量则低于间质细胞。提示γ-GT活性升高及GSH含量降低与BPH发生发展有关。

人良性增生前列腺组织γ-GT活性

测定了8例正常和21例BPH前列腺组织全匀浆以及8例正常和14例BPH前列腺上皮细胞和间质细胞内的γ-GT活性。结果表明,BPH前列腺组织全匀浆、上皮及间质细胞内γ-GT活性分别为正常前列腺组织的4.5、4.0和4.3倍,正常及BPH前列腺上皮细胞内γ-GT活性均显著高于间质细胞,提示在良性前列腺增生中前列腺组织内γ-GT活性增高可能起重要作用。

EGF对前列腺细胞中鸟氨酸脱羧酶基因表达的调控

目的 :探讨EGF诱导前列腺增殖的分子机理。方法 :以MTT法测定不同浓度表皮生长因子(EGF)对前列腺癌细胞PC 3的促增殖作用 ;以最适浓度EGF(5 0ng/ml)刺激该细胞 ,分别于 0、1、3、6、12、2 4h提取总RNA ,用斑点杂交法分析测定各组细胞中ODCmRNA丰度 ;用免疫组化及流式细胞术两种方法检测EGF刺激细胞后ODC蛋白表达量的变化。结果 :①EGF能促进PC 3细胞的增殖 ,而且随着EGF浓度的升高 ,细胞增殖活性增加 ;②斑点杂交显示 ,EGF刺激细胞后 3h ,ODCmRNA开始明显升高 ,12h达高峰 (约为 0h的 3.6 6倍 ) ,至 2 4h时有所降低 ;③免疫组化及流式细胞术检测显示 ,EGF刺激细胞 3d后ODC蛋白阳性细胞表达率明显升高。结论

人良性增生前列腺及上皮和间质细胞的鸟氨酸脱羧酶活性

以比色法测定了正常人（８例）和良性前列腺增生症病人（２１例）前列腺组织的全匀浆、上皮和间质细胞中的鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）的活性。结果显示：正常组织的上皮部分ＯＤＣ活性高于间质部分，而增生组织相应的两部分ＯＤＣ活性无差异；增生组织的间质部分酶活性是正常组织该部分酶活性的２．５倍，两组间上皮部分的酶活性无差异；增生组织全匀浆的酶活性显著高于正常组织。结果表明前列腺组织中ＯＤＣ活性升高与良性前列腺增生症的发生有关。

雄激素相关酶活性与BPH关系的研究

测定良性前列腺增生症(BPH)和正常人前列腺组织及不同细胞中5α-还原酶、鸟氨酸脱羧酶(ODC)及γ-谷氨酰转肽酶(r-GT)活性。结果显示:(1)5α-还原酶主要存在于前列腺间质细胞核中,BPH前列腺间质细胞中5α-还原酶活性约为正常前列腺的2倍;(2)BPH前列腺全匀浆和间质细胞中ODC活性分别为正常组织相应组分的2.4和2.6倍;(3)BPH前列腺全匀浆、上皮和间质细胞中r-GT活性分别为正常前列腺相应组分的4.5倍、3.2倍和4.1倍。提示5α-还原酶、ODC及r-GT活性升高与BPH的发生可能有密切关系。

去势后大鼠前列腺腹侧叶γ-GT活性分析

分别测定了去势后0,1,2,3,4,5,7,10,14和21天的大鼠前列腺腹侧叶中γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性,并比较了组织湿重及蛋白质含量变化。结果显示,未去势大鼠前列腺腹侧叶γ-GT总活性为40.3±9.5U/腹侧叶,去势后1～3天酶活性无明显改变,4天开始迅速降低,至10天降低了72%,随后降低速度减慢,至21天时降低了83%,与组织湿重及蛋白质含量变化进程基本一致。表明γ-GT活性降低可能与前列腺萎缩和蛋白质含量降低有关。

人良性增生前列腺组织中GSH的含量

测定了9例正常人和20例良性前列腺增生症(BPH)患者前列腺组织全匀浆、上皮细胞及间质细胞中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量。结果表明BPH前列腺组织全匀浆、上皮细胞及间质细胞中GSH的含量均明显低于正常前列腺,以DNA为基数表示GSH相对含量时,正常和增生前列腺上皮细胞中GSH的含量均明显低于间质细胞。提示前列腺组织中GSH含量降低可能与BPH的形成有关。

HPLC法同时测定人血浆中舒必利、氯氮平、氯丙嗪浓度

目的:建立同时测定人血浆中舒必利、氯氮平、氯丙嗪药物浓度的高效液相色谱方法。方法:血浆样品用乙酸乙酯萃取,氮气吹干;残留物用甲醇溶解后进样。色谱柱为C_(18)柱(250 mm×4.6mm),流动相为甲醇-水(80:20,含0.5％三乙胺和0.05％冰醋酸,pH=7.6～7.8),流速:1.0mL·min^(-1),柱温:35T,紫外检测波长:250nm。结果:本法可同时测定血浆中3种药物浓度。舒必利在0.2～1.0μg·mL^(-1)、氯氮平在0.05～1.0μg·mL^(-1)、氯丙嗪在0.01～0.16μg·mL^(-1)范围内,峰面积与其浓度呈良好的线性关系;日内RSD分别为2.9％～3.9％,3.1％～4.1％,3.0％～4.3％;日间RSD分别为3.9％～4.8％,3.8％～5.1％,4.3％～5.3％(n=4)。结论:方法简便、快速、准确,适用于舒必利、氯氮平、氯丙嗪3种药物临床血药浓度的同时检测。

大鼠脑组织单胺类递质及其代谢产物的检测方法研究

目的 :研究大鼠脑组织中单胺类递质及其代谢产物的高效液相反相离子对色谱测定法。方法 :采用LiChrosorbC18,10 μm色谱柱 ,流动相为甲醇 :水 (4 0 :60 ) ,含 0 .0 2 8g LEDTANa2 ,0 .15g LSDS ,0 .2ml LH2 SO4(pH 2 .5～ 3 ) ,荧光检测波长 :λEX=2 85 ,λEM=3 3 3。结果 :对 87只大鼠脑组织中 4种单胺类递质及其代谢产物的含量进行了同时测定 ,高香草酸 (HVA) 2 .5 0～ 40 .0 μg ml、去甲肾上腺素 (NE) 0 .0 1～ 0 .5 0 μg ml、多巴胺 (DA)0 .0 5～ 1.0 0 μg ml、5 羟色胺 (5 HT) 0 .0 2 5～ 0 .5 0 μg ml,峰面积与其含量呈良好的线性关系。 结论 :该法操作简便、快速、准确 ,为组织中单胺类递质及其代谢产物检测的一种理想方法 ,并适用于临床相关研究。

RP-HPLC法测定六味地黄丸中没食子酸的含量

目的:建立 RP-HPLC 法测定六味地黄丸中没食子酸含量的方法。方法:色谱柱:日本岛津 GL Sciences Inc.C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%醋酸水溶液(30∶70),流速:1mL·min^(-1),检测波长为273nm。结果:没食子酸在4-40μg·mL^(-1)范围内,峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系(r=0.9995);平均回收率为99.5%,RSD 为2.1%。结论:该法准确、快速、灵敏,重复性好。

ODC,AdoMetDC双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的体外和体内研究(英文)

鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)是多胺体内合成的2个关键酶.研究腺病毒Ad-ODC-AdoMetDCas介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌多胺合成,细胞增殖以及侵袭的抑制作用.用活细胞计数和流式细胞术分别检测Ad-ODCas和Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞增殖的影响,蛋白质印迹和HPLC方法分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,TUNEL标记检测法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌细胞凋亡的影响,Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌A-549细胞侵袭活性的改变,裸鼠皮下移植瘤模型研究Ad-ODC-AdoMetDCas对体内肺癌生长的抑制作用.实验结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas明显抑制肺癌A-549细胞的增殖,导致细胞凋亡,显著降低肺癌A-549细胞的体外侵袭能力,肺癌A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后细胞内3种多胺含量都明显降低,Ad-ODC-AdoMetDCas对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用.实验表明,ODC和AdoMetDC双反义腺病毒具有显著抑制肺癌增殖和侵袭的作用,对于肺癌的防治研究具有一定的前景.

人ODC基因第三外显子反义RNA腺病毒载体的构建

目的:构建人鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因第三外显子反义RNA的腺病毒载体。方法:RT-PCR方法克隆出人ODC基因第三外显子的片段,插入pMD18-T载体中,经SalⅠ、BglⅡ酶切,插入穿梭质粒pAd-Track-CMV形成重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr。经PmeⅠ酶切线性化后,转入pAdesy-1细菌中与含腺病毒基因骨架的质粒pAdesy-1同源重组。将重组质粒pAdesy-ODCr经PacⅠ酶切后,转染293细胞包装成腺病毒颗粒,经荧光显微镜和PCR方法对重组腺病毒进行鉴定。结果:用RT-PCR方法从人前列腺癌组织中扩增出120bp的cDNA片段,经测序证实为ODC基因第三外显子的片段。重组质粒pAdTrack-CMV-ODCr转入pAdesy-1细菌中获得多个阳性克隆。重组质粒pAdesy-ODCr转染293细胞进行包装,经荧光显微镜观察可见其在293细胞中表达。进一步通过PCR法证实其含有目的基因。结论:成功地构建了ODC基因第三外显子反义RNA重组腺病毒载体,为研究其抗肿瘤的作用奠定了基础。

鸟氨酸脱羧酶基因反义RNA对前列腺癌细胞生长的抑制作用

为研究鸟氨酸脱羧酶 (ODC)基因反义RNA对前列腺癌细胞的生长抑制作用 ,将表达ODC第 3外显子反义RNA的重组腺病毒rAd ODC Ex3as分别感染前列腺癌细胞株PC 3和LNCap .通过MTT法观察其对前列腺癌细胞增殖的影响 ,并确定不同细胞合适的感染滴度 ,再采用Western印迹和流式细胞术检测rAd ODC Ex3as对细胞中ODC表达的抑制作用、对细胞周期和凋亡的影响以及与CDK抑制物p2 1的关系 .实验显示 ,rAd ODC Ex3as分别以 5 0MOI、2 5MOI感染PC 3和LNCap细胞可明显抑制其生长增殖 ,而不引起细胞毒性作用 ;其对两种细胞中ODC表达的抑制作用分别为4 5 %和 5 9% .流式细胞DNA含量分析证实 ,rAd ODC Ex3as可引起PC 3和LNCap细胞周期G1期阻滞 ,但并未引起凋亡 .通过Western印迹发现 ,细胞中ODC表达的降低可诱导p2 1蛋白的过表达 .结果表明 ,rAd ODC Ex3as在体外能有效地干扰ODC基因的表达 ,并通过诱导p2 1的过表达使其细胞周期停于G1期 ,从而抑制前列腺癌细胞PC 3和LNCap的增殖 ,为其进一步基因治疗的研究打下基础 .

亚麻籽木酚素的提取及其对裸鼠乳腺移植瘤生长的影响

目的分离、纯化亚麻籽木酚素——开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG),并研究其对裸鼠乳腺移植瘤生长的影响。方法从亚麻籽中提取、纯化SDG,高效液相色谱分析其纯度;选用人乳腺癌细胞株MDA-MB-231对裸鼠进行异种移植;第6周将移植成功的裸鼠随机分为3组:对照组、SDG组和亚麻籽组。每周测量瘤体大小并计算瘤表面积,同时记录裸鼠体重、摄食量。第10周处死动物,测量瘤体质量、瘤块大小,记录肿大淋巴结数。肝脏、肺脏进行病理切片检查。结果获得纯度为88.0%的SDG产品;与对照组相比,SDG、亚麻籽2组肿瘤表面积、瘤块质量、瘤体积明显降低(P<0.05),肿大淋巴结有所减少。各组动物体重及摄食量无明显差别,肝、肺均未见肿瘤转移。结论SDG可抑制裸鼠MDA-MB-231细胞乳腺移植瘤的生长。

质粒载体系统介导的人肿瘤细胞RNA干扰作用

目的研究质粒载体介导的肿瘤细胞RNA干扰效果.方法构建以H1 RNA为启动子的针对GFP基因不同序列片段的RNAi质粒pLasRiGFP1/2/3.将其与pcdna3.1EGFP共转染HEK293、Hela和SPCA1细胞或单独转染SPCA1-GFP,用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪分析GFP表达.结果 pLasRiGFP1、pLasRiGFP2和pLasRiGFP3在HEK293中对GFP表达的抑制率分别为97.5%、97%和89%,Hela细胞中为83%、90%和90%,SPCA1细胞中为65%、55%和40%.pLasRiGFP1与pLasRiGFP2在SPCA1-GFP细胞对GFP的抑制率分别为53%和58%.RNAi作用在48～96 h最强,并随RNAi质粒增加抑制效果呈增强趋势,但到达一定量后作用趋势平缓.结论 H1 RNA为启动子的RNAi质粒能有效介导肿瘤细胞RNAi,其作用存在剂量和时间效应,受靶序列、细胞类型等因素的影响.

抑癌基因p73 FHIT和PTEN蛋白表达与肺癌临床病理学特征及预后关系探讨

目的:探讨抑癌基因p73、FHIT和PTEN与肺癌发生、发展的关系。方法:应用免疫组化SABC法检测65例肺癌组织、癌旁组织和正常肺组织中p73、FHIT和PTEN基因蛋白的表达。结果:肺癌组织中p73蛋白阳性表达率明显高于正常肺组织和癌旁组织(P<0.05),正常肺组织和癌旁组织中FHIT和PTEN蛋白阳性表达率明显高于肺癌组织(P<0.05);不同类型和不同分化程度肺癌组织中p73、FHIT和PTEN蛋白的阳性表达率比较差异无显著性(P>0.05);肺癌组织中p73、FHIT和PTEN蛋白阳性表达率与临床分期和患者预后有明显相关性(P<0.05)。结论:p73、FHIT和PTEN基因蛋白表达缺失在不同类型和不同分化程度在肺癌发生、发展中可能存在着普遍意义,三者可作为判断肺癌生物学行为和患者预后的参考指标。

大肠癌组织酶标志物研究

目的：探讨大肠癌的发病机理及早期诊断的酶标志物。方法：采用酶学方法测定大肠癌及近心端和远心端癌旁组织中鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）、γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及ＬＤＨ同工酶谱。结果：（１）大肠癌组织中ＯＤＣ、γ－ＧＴ及ＬＤＨ活性均显著高于癌旁正常组织；（２）大肠癌组织中ＬＤＨ５同工酶及ＬＤＨ４＋ＬＤＨ５／ＬＤＨ１＋ＬＤＨ２的比值也显著升高，ＬＤＨ同工酶谱向Ｍ型转移。结论：肠组织中ＯＤＣ、γ－ＧＴ、ＬＤＨ活性升高，ＬＤＨ同工酶谱向Ｍ型转移与大肠癌的形成有关，提示ＯＤＣ。

人肺癌细胞株化疗敏感性与基因表达的关系

目的探讨人肺癌细胞株对化疗药物的敏感性与多药耐药相关基因和凋亡调控基因表达的关系。方法采用MTT法检测5株肺癌细胞SPCA1、NCI-H446、SH-77、95C和95D对阿霉素(ADM)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、卡氮芥(BCNU)的敏感性。流式细胞术检测多药耐药基因P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(GST-π)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)等耐药相关基因和Fas、bcl-2、p53和p16等凋亡调控基因的表达。结果不同肺癌细胞株对同一药物敏感性有较大差异。相关分析显示,肺癌细胞株对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达呈负相关,P值分别为0.040和0.030,GST-π和bcl-2的表达水平较高者,MMC的IC50较高,敏感性较低;对DDP的敏感性与p53蛋白表达水平呈负相关(P=0.036);对其余药物的敏感性与所检基因的表达水平无关(P>0.05)。结论人肺癌细胞株对不同化疗药物敏感与否有不同的机制,对MMC的敏感性与GST-π和bcl-2的表达有关,对DDP的敏感性与p53的表达有关。

气相色谱法测定大鼠血清脂肪酸

目的:用气相色谱法测定大鼠酒精性脂肪肝血清中7种游离脂肪酸的含量。方法:选用10%丁二酸二乙二醇酯(DEGS)色谱柱,样品经乙酸乙酯提取后,用三氟化硼-乙醚/甲醇甲酯化处理。内标采用正十七碳酸。结果:月桂酸、豆蔻酸、硬脂酸与花生四烯酸的线性范围在1～50mg/L,棕榈酸、油酸与亚油酸的线性范围在10～100mg/L。7种脂肪酸的变异系数在0.9991～0.9998之间。7种脂肪酸的加样回收率在85.6%～94.3%之间。结论:本法简便、快速、可靠,为临床科学研究及疾病的诊断提供参考依据。