索拉非尼基于Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬在肝细胞癌中产生耐药机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,它的形成是一个复杂的过程,其具体形成机制尚不明确,由于大多数HCC患者被诊断出来时已是晚期,通常已丧失良好的手术时机。而靶向药物的出现给当前HCC患者带来了新的希望,同时还可作为术后治疗措施,在HCC中发挥着巨大的作用。索拉非尼是第一个被用于治疗HCC的靶向药物,它可抑制肝肿瘤组织血管生成和细胞增殖,可诱导肝肿瘤细胞凋亡,进而提高部分肝癌患者的生存率。但据目前研究显示,有50%~60%HCC经治患者对该药物出现了敏感性下降。主要是由于索拉非尼使用后会抑制体内相关信号通路,从而致使耐药的发生,故进一步探索索拉非尼耐药机制,使其逆转索拉非尼耐药对于改善肝癌治疗的预后具有极其重要的临床价值。近些年来,许多学者致力研究索拉非尼通过Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬与耐药性的产生有着密切联系。并探讨其耐药分子机制,使该领域获得了巨大的发展。因此,本篇文章主要从Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路展开,探讨其与细胞自噬之间的关系以及介导的耐药机制,为索拉非尼治疗肝癌产生耐药性提供可靠的科学理论依据。

m6A修饰的circRNA在肝细胞癌中的研究进展

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是一种可逆的表观遗传修饰,是真核细胞中最丰富的修饰物之一,在信使RNA和非编码RNA中被普遍报道。m6A修饰可调节RNA的转录、加工、剪接、降解和翻译等,在肿瘤生物学行为中发挥重要作用。缺乏5’帽子结构的circ RNA(circular RNA)一直被误认为是转录过程中偶然剪切生成的“垃圾序列”,然而研究发现,circ RNA可以通过micro RNA、结合蛋白、翻译多肽和m6A修饰等多种方式参与肿瘤侵袭和转移。本文就m6A修饰在circ RNA调控作用及其在肝细胞癌中的功能作一综述,并讨论其在该领域的潜在临床应用和可能的未来发展方向。

肝癌中环状RNA的表达模式及其编码潜能的研究

目的:环状RNA作为一类特殊的非编码RNA,近些年多有报道其可以通过编码多肽的方式参与多种恶性肿瘤的演变和进展,然而其在肝癌中的研究是有限的。本研究基于RNA-seq结合在线数据库,探讨肝癌中环状RNA的表达模式并评估其编码潜能。方法:应用Novaseq 6000 PE150高通量测序仪对3对肝癌与癌旁组织行circRNA测序。生物信息学分析寻找差异性表达的circRNA并行序列分析,应用GO、KEGG和Reactome分别进行功能、通路富集分析;联合在线数据库Transcirc和Ribocirc筛选可翻译的circRNA;应用IRES finder识别IRES元件;ORFfinder识别ORF序列;m6A SRAMP识别m6A位点序列;CPAT法评估编码潜能。qPCR检测上述寻找到的差异性表达circRNA表达情况。结果:本研究共发现了416个丰度相对可观的circRNA,包括35个上调和31个下调的circRNA(均P<0.05),序列分析提示这些基因多以小分子量(长度<1 000 nt)、外显子-外显子类型及(2-5)外显子个数构成为主。GO分析显示这些表达差异性的circRNA主要富集在GTP酶活性的调节(P<0.001)、小GTP酶介导的信号转导的调节(P<0.001)、GTP酶活性阳性调节(P<0.001)(生物学过程),核散斑(P=0.016)(细胞成分),GTP酶调节因子活性(P<0.001)、GTP酶激活因子活性(P<0.001)(分子功能)等;KEGG分析显示这些表达差异的circRNA主要富集在补体系统(P=0.002)、mRNA监测通路(P=0.003)和血小板激活(P=0.005)等;Reactome分析显示主要富集在RHO GTP酶周期(P=0.008)、RHOA GTP酶周期(P<0.001)和CDC42 GTP酶周期(P=0.001)等。进一步联合Transcirc和Ribocirc数据库交集获得17个circRNA,其中以hsa_circ_0000231、hsa_circ_0000417、 hsa_circ_0000745、 hsa_circ_0005455、 hsa_circ_0000847、 hsa_circ_0005552、 hsa_circ_0060849、hsa_circ_0008234、hsa_circ_0075796、hsa_circ_0001742及hsa_circ_0001686共11个基因编码潜能评分最显著且均大于0.9分。同时在10例肝癌和癌旁组织中qPCR验证提示:hsa_circ_0000231、hsa_circ_0000745、hsa_circ_0005552、和hsa_circ_0000847在肝癌组织中高表达,hsa_circ_0060849和hsa_circ_0008234呈低表达,差异具有意义(P<0.05)。结论:综合分析了肝癌中cicRNA的表达模式,发现了6个circRNA存在差异性表达且具有高的翻译潜能评分,值得进一步研究。

神经菌毛素1参与肝细胞癌侵袭及转移的研究进展

肝细胞癌是世界上极具侵袭性的实体恶性肿瘤之一,发病隐匿,早期易发生浸润和转移,导致多数患者确诊时已失去手术最佳时期。神经菌毛素1(NRP1)在肝细胞癌中发挥巨大的作用,其可促进血管生成、肿瘤生长以及肿瘤侵袭和转移,甚至介导免疫逃逸,值得注意的是,NRP1还可与微小RNA相互作用介导肝细胞癌的发生、发展。故进一步研究NRP1在肝细胞癌中的作用机制,使其未来能够作为肿瘤侵袭转移的诊断标志物以及新治疗靶点具有极其重要的意义。本文将从NRP1出发,对其与肝细胞癌之间的关系以及介导的肿瘤侵袭转移的潜在机制进行综述。

肝癌细胞仑伐替尼耐药的基因筛选及其通路研究

目的基于CRISPR/Cas9技术筛选肝癌仑伐替尼耐药相关基因并探究其潜在关系。方法应用CRISPR/Cas9 sgRNA全基因组文库技术结合Affymetrix表达谱芯片筛选肝癌对仑伐替尼耐药的相关基因。通过TCGA数据库分析这些基因在肝癌中的表达及预后的关系,最终确定采用THOC2为肝癌仑伐替尼耐药基因并用于后续研究。采用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色、Western blotting、RT-PCR检测THOC2在肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3、SMMC-7721)及仑伐替尼耐药/敏感肝癌组织中的表达情况。通过慢病毒感染构建高表达THOC2的SMMC-7721-THOC2肝癌细胞,采用免疫共沉淀(Co-IP)等技术探讨THOC2介导肝癌仑伐替尼耐药的可能机制。结果发现7个与肝癌仑伐替尼抵抗密切相关的耐药基因,包括THOC2、CTNNB1(β-catenin)、MET(c-Met/HGFR)、HTATIP2、C10orf11、PRDX3、MAST4。TCGA分析提示THOC2在肝癌与癌旁中表达存在统计学差异,且与肝癌临床分期及预后密切相关。IHC染色、Western blotting、RT-PCR检测发现THOC2主要分布于胞核中,其在仑伐替尼耐药组患者中的表达水平高于药物敏感组患者;THOC2在高转移潜能的肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3)中的表达较在SMMC-7721中更显著;Western blotting、Co-IP进一步表明上调THOC2后Wnt/β-catenin通路下游靶点BAX、cyclinD1和c-myc蛋白水平显著增高,且THOC2与β-catenin存在相互作用关系。结论THOC2基因高表达可能通过Wnt/β-catenin通路参与调控肝癌对仑伐替尼的耐药。

环状RNA翻译多肽在恶性肿瘤中的作用

作为特殊的非编码RNA,环状RNA(circular RNA,Circ RNA)是一种由pre-mRNA通过反式剪接形成的新型闭合环状的RNA分子。随着生物技术的飞速发展和研究的不断深入,对于CircRNA的鉴定和功能已有了新的认识。CircRNA由于缺乏5’帽子结构一直被认为不可翻译成蛋白质,已有证据表明其可通过核糖体内部进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)和N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)诱导的方式编码多肽,在多种恶性肿瘤的生物学行为中扮演重要角色。本文结合国内外研究,回顾CircRNA翻译多肽的可能机制,对其多肽产物在常见的恶性肿瘤中的功能及作用进行综述,探讨其可能存在的问题及潜在临床应用价值。

慢病毒表达circLIFR对Hep3B肝癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨慢病毒稳定高表达circLIFR对Hep3B肝癌细胞生物学行为的影响。方法:通过慢病毒包装circLIFR表达质粒,感染Hep3B细胞以构建稳定circLIFR高表达的肝癌细胞株。其中构建肝癌Hep3B细胞株感染circLIFR高表达序列的慢病毒为circLIFR高表达组,感染circLIFR高表达空载体序列的慢病毒为阴性对照组,无感染组为空白对照组。qPCR检测circLIFR的表达,Sanger测序鉴定其环状拼接位点。细胞增殖试剂盒检验细胞活力,Transwell鉴定侵袭能力。结果:qPCR和Sanger测序显示成功建立circLIFR稳定表达细胞株。circLIFR高表达组细胞增殖活力优于阴性对照组以及空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组、空白对照组的穿透Matrigel滤膜细胞数目依次为(270.8±18.9)个、(266.2±17.6)个,circLIFR高表达组穿透Matrigel滤膜的细胞数为(396.6±32.9)个,差异具有统计意义(P<0.05)。结论:circLIFR高表达明显提高Hep3B肝癌细胞增殖活力,促进细胞侵袭。

HBx不同表达水平对HepG2肝癌细胞增殖、侵袭以及索拉非尼耐药的影响

目的探讨HepG2肝癌细胞不同乙型肝炎病毒X(HBx)表达水平对增殖、侵袭以及索拉非尼耐药的影响。方法肝癌HepG2细胞株感染HBx高表达序列的慢病毒为HBx高表达组,阴性对照组同HBx高表达组,但仅感染空载体。干扰组在HBx高表达组的基础上感染HBx干扰序列病毒,降低HBx表达。干扰对照组同干扰组,但感染的空载体。空白对照组无任何处理。Western印迹检测HBx的蛋白表达。细胞增殖检测试剂盒检测增殖,Transwell侵袭实验检测侵袭能力,检测索拉非尼半抑制浓度(IC50)。结果Western印迹结果显示成功构建各组稳定表达细胞株。HBx高表达组细胞增殖能力优于空白对照组、阴性对照组,干扰组细胞增殖能力低于干扰对照组和HBx高表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白对照组、阴性对照组、干扰组穿过Matrigel胶的细胞数分别为(46.2±4.1)个、(50.7±5.1)个、(48.2±5.2)个。HBx高表达组穿过Matrigel胶的细胞数(124.2±8.3)个、干扰对照组(117.2±7.5)个,均高于上述三组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HBx高表达组和干扰对照组细胞IC50分别为(5.36±0.31)μmol/L和(5.48±0.20)μmol/L,高于空白对照组、阴性对照组、干扰组的(4.75±0.22)μmol/L、(4.60±0.14)μmol/L和(3.98±0.03)μmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论HBx高表达促进HepG2肝癌细胞增殖和侵袭,提高HepG2肝癌细胞对索拉非尼的抵抗能力,抑制细胞凋亡。

环状RNA在乙肝病毒相关性肝细胞癌中的研究进展

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,肝细胞癌是最常见的病理类型,在我国80%以上的肝癌患者合并了乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染。近年来研究发现,环状RNA(circular RNA,circ RNA)作为非编码型RNA(non-codingRNA,nc RNA)中的一员,其可由pre-m RNA反向剪接生成,具有充当mi RNA海绵、调节转录、翻译多肽等多种功能,在恶性肿瘤包括肝癌的发生发展中扮演重要角色,已经成为目前研究的热点,引起了人们广泛关注。本文对Circ RNAs的分类及主要功能、Circ RNAs与乙肝相关性肝细胞癌的关系、Circ RNA可作为乙肝相关的HCC分子标志物等方面的研究现状进行了综述,探讨了Circ RNAs的临床应用价值。