驴皮成纤维细胞的体外培养研究

试验旨在比较不同培养方法对驴皮成纤维细胞培养的效果,以便建立其体外高效快速的培养体系。采集6~7岁健康的新疆驴真皮组织,分别用组织块贴壁法和双酶消化法对驴皮成纤维细胞进行原代培养,并检测分析细胞的生长特点、生长速度、细胞周期与支原体污染等指标。结果显示,双酶消化法(0.25%胰酶处理1h,再用0.5%胶原蛋白酶Ⅰ处理6h)培养驴皮组织3d后,成纤维细胞进入了对数增殖期,而组织块贴壁法则需要15d;细胞周期经流式分析发现,处于G0/G1期与S+G2+M期的细胞均约为50%,其余5.17%细胞处于凋亡期,表明大多细胞处于分裂增殖的活跃期,细胞具有很强的活力;试验中培养的细胞均无支原体污染。综上,应用双酶消化法可快速、高效地建立驴皮成纤维细胞体外培养体系。

年龄、部位对新疆驴皮中Ⅰ型胶原蛋白表达影响的研究

本研究旨在探究不同年龄、不同部位新疆驴皮中Ⅰ型胶原蛋白2个亚基基因(COL1A1、COL1A2)mRNA的表达量及其蛋白含量的差异,确定宰驴取皮的年龄段,以提高驴皮的利用率。对不同年龄段新疆驴背部皮肤组织,应用RT-qPCR、Western blotting技术检测胶原蛋白基因的表达量及其蛋白含量;对新疆驴不同部位皮肤进行HE染色切片与RT-qPCR技术分析。结果表明:6~7岁年龄段的驴皮中COL1A1、COL1A2基因的表达量及其蛋白含量显著高于其他各年龄段(P<0.05)。从组织切片上可以看到,驴皮背部与颈部的胶原纤维密集且多,而脸部的疏松且少,腿部和腹部居中;这与其胶原蛋白基因RT-qPCR的结果相一致。综上,6~7岁年龄段的新疆驴背部皮肤中,胶原蛋白基因的表达量及含量最高,故此年龄段可作为宰驴取皮的最佳年龄段。

驴内脏组织中脂肪沉积相关基因的差异表达

脂肪沉积相关基因在动物内脏中的异常表达与某些疾病相关。应用RT-qPCR技术分别检测2岁~3岁健康公、母新疆驴内脏器官心、脾、肾、肝、小肠、大肠和肺中脂肪沉积相关基因H-FABP、PLIN1、LPL、HSL、PPARγ和FASN的表达差异。结果显示,新疆驴内脏器官中脂肪沉积相关基因的表达,性别对基因的差异表达影响较小;在各组织间,H-FABP基因在心脏、PLIN1基因在肝脏组织中的表达都显著的高于其他组织;LPL、HSL基因在心脏、肾脏的表达量较高;PPARγ基因在脾、肺中表达最高,而FASN基因在心、脾中表达最低。研究结果可为新疆驴内脏器官有关疾病的监测与预防提供一定的参考。

芒硝对驴皮成纤维细胞增殖、凋亡的影响

为研究不同浓度的芒硝对体外培养的驴皮成纤维细胞增殖、凋亡的影响,本试验采用组织块法体外培养驴皮成纤维细胞,并用HE、Masson染色鉴定;再添加高(2000、1500μg/mL)、中(1000、500、250μg/mL)和低浓度(100、50、10μg/mL)芒硝体外培养驴皮成纤维细胞,用MTT和Caspase-3法分别检测成纤维细胞增殖率和凋亡率;最后用实时荧光定量PCR、ELISA法检测不同浓度(1500、250、10μg/mL)芒硝培养液中影响驴皮成纤维细胞胶原蛋白合成的相关基因表达量及蛋白浓度。结果显示,培养5 d时,驴皮成纤维细胞开始从组织块边缘爬出,25 d后长满培养皿;HE染色呈典型的梭形,驴皮成纤维细胞中胶原纤维经Masson染色呈蓝色。中浓度芒硝培养液组成纤维细胞的增殖率显著高于高、低浓度组(P<0.05),相应地,中浓度组的凋亡因子Caspase-3活性显著低于其他两组(P<0.05)。相比于24 h,芒硝作用于成纤维细胞48 h能显著提高胶原蛋白合成相关基因的表达量(P<0.05),250μg/mL浓度的效果最佳。综合上述结果,组织块培养法易于分离培养驴皮成纤维细胞,250μg/mL浓度的芒硝在48 h能显著提高驴皮成纤维细胞的增殖率及其胶原蛋白合成相关基因的表达量,此结果可为芒硝促进驴皮成纤维细胞的增殖作用以及驴皮伤口愈合机制的研究提供理论依据。

鸽肉营养成分与脂肪沉积相关基因的研究

为了明确卡努鸽肉中营养成分及与脂肪沉积相关基因的表达,试验选择同批孵化、体况较好的3,12月龄雌、雄鸽各10只,屠宰后取胸大肌检测主要营养成分(水、粗蛋白、粗脂肪)及雄鸽肉中脂肪酸含量,并用RT-qPCR技术分析了与鸽肉脂肪沉积相关基因LPL、PLIN1、FASN和PPARγ的表达规律。结果表明:雌、雄鸽3月龄肉中水分、粗蛋白含量均显著高于12月龄(P<0.05),粗脂肪含量则显著低于12月龄(P<0.05);12月龄雌、雄鸽肉中水、脂肪和蛋白含量均差异不显著(P>0.05);3月龄鸽肉中肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸等主要饱和脂肪酸含量显著高于12月龄(P<0.05),而油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸含量显著低于12月龄(P<0.05)。鸽肉中LPL基因mRNA表达量显著高于其他三种基因(P<0.05)。LPL、PLIN1和FASN基因表达量与肌内脂肪含量呈显著或极显著正相关(P<0.05或P<0.01),而PPARγ基因表达量与肌内脂肪含量呈显著负相关(P<0.05)。说明LPL基因的表达与鸽肉脂肪沉积关系更为密切,其中12月龄卡努鸽肉中脂肪酸含量更符合屠宰标准。