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尼罗罗非鱼Cullin-1基因克隆及表达
被引量:
1
1
作者
刘鑫潮
黄瑜
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2020年第5期27-33,共7页
【目的】探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Cullin-1(CUL1)基因在尼罗罗非鱼抵抗病原细菌过程中的作用。【方法】从尼罗罗非鱼脾脏组织中克隆Cullin-1基因(记为On-CUL1),对其进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术分析On-CUL...
【目的】探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Cullin-1(CUL1)基因在尼罗罗非鱼抵抗病原细菌过程中的作用。【方法】从尼罗罗非鱼脾脏组织中克隆Cullin-1基因(记为On-CUL1),对其进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术分析On-CUL1在健康鱼胸腺、鳃、肝、脾、肠道、头肾、脑、肌肉、皮肤、血液组织,以及经无乳链球菌刺激后病鱼脾、肠道、头肾中的表达。【结果与结论】On-CUL1(GenBank登录号XM003459470.5)编码区为2 331 bp,编码776个氨基酸,理论分子质量为89 ku,理论等电点为8.16。氨基酸序列分析显示,On-CUL1有1个高度保守的泛素样蛋白结构域CUL1 Nedd8(ubiquitin-like domain),N′端有一个的信号肽序列。系统进化树分析表明,On-CUL1序列与伯氏拟丽鱼(Haplochromisburtoni)CUL1相似性最高,为98.7%。q RT-PCR显示CUL1在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,其中在头肾中表达量最高,其次是胸腺、脑、皮肤,在肠道中表达量最低。经无乳链球菌刺激后,On-CUL1表达量在脾脏和肠道中均显著上调,头肾、脾脏和肠道均在48h表达量最大。CUL1参与尼罗罗非鱼抵抗无乳链球菌过程中的免疫应答。
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关键词
尼罗罗非鱼
CUL1
基因表达
免疫应答
无乳链球菌
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职称材料
尼罗罗非鱼Galectin-4基因的原核表达及诱导条件优化
被引量:
4
2
作者
张志强
刘鑫潮
+3 位作者
牛金中
黄瑜
王蓓
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2020年第5期118-123,共6页
【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)Galectin-4基因(记作OnGal-4)的原核表达,为大量获取尼罗罗非鱼Galectin-4蛋白(OnGal-4)和后续功能研究奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的尼罗罗非鱼Galectin-4基因序列(Genbank:XM-0193...
【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)Galectin-4基因(记作OnGal-4)的原核表达,为大量获取尼罗罗非鱼Galectin-4蛋白(OnGal-4)和后续功能研究奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的尼罗罗非鱼Galectin-4基因序列(Genbank:XM-019345120)设计引物,构建原核表达载体,诱导Galectin-4重组蛋白(r OnGal-4)在BL21原核表达系统中表达,并优化其诱导条件。【结果与结论】成功扩增出OnGal-4基因,并构建原核表达载体pGEX-4T-On Gal-4。rOnGal-4最佳诱导条件是温度28℃,IPTG浓度0.4 mmol/L,诱导时间4 h。在此条件下,rOnGal-4在可溶性蛋白中大量表达。Western-blot结果显示,rOnGal-4可与抗GST标签的单克隆抗体发生特异性反应。
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关键词
尼罗罗非鱼
Galectin-4
基因克隆
原核表达
条件优化
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职称材料
尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化
被引量:
2
3
作者
牛继敏
牛金中
+3 位作者
黄瑜
刘鑫潮
简纪常
鲁义善
《安徽农学通报》
2020年第5期6-9,共4页
Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用p...
Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。
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关键词
尼罗罗非鱼
Galectin-8
原核表达
WESTERN
BLOTTING
条件优化
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职称材料
题名
尼罗罗非鱼Cullin-1基因克隆及表达
被引量:
1
1
作者
刘鑫潮
黄瑜
简纪常
机构
广东海洋大学水产学院
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
2020年第5期27-33,共7页
基金
国家自然科学基金(31572651)
高校重大科研成果培育计划类项目(GDOU2013050309)
广东省普通高校青年创新人才项目(230419083)。
文摘
【目的】探究尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)Cullin-1(CUL1)基因在尼罗罗非鱼抵抗病原细菌过程中的作用。【方法】从尼罗罗非鱼脾脏组织中克隆Cullin-1基因(记为On-CUL1),对其进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术分析On-CUL1在健康鱼胸腺、鳃、肝、脾、肠道、头肾、脑、肌肉、皮肤、血液组织,以及经无乳链球菌刺激后病鱼脾、肠道、头肾中的表达。【结果与结论】On-CUL1(GenBank登录号XM003459470.5)编码区为2 331 bp,编码776个氨基酸,理论分子质量为89 ku,理论等电点为8.16。氨基酸序列分析显示,On-CUL1有1个高度保守的泛素样蛋白结构域CUL1 Nedd8(ubiquitin-like domain),N′端有一个的信号肽序列。系统进化树分析表明,On-CUL1序列与伯氏拟丽鱼(Haplochromisburtoni)CUL1相似性最高,为98.7%。q RT-PCR显示CUL1在健康尼罗罗非鱼各组织中均有表达,其中在头肾中表达量最高,其次是胸腺、脑、皮肤,在肠道中表达量最低。经无乳链球菌刺激后,On-CUL1表达量在脾脏和肠道中均显著上调,头肾、脾脏和肠道均在48h表达量最大。CUL1参与尼罗罗非鱼抵抗无乳链球菌过程中的免疫应答。
关键词
尼罗罗非鱼
CUL1
基因表达
免疫应答
无乳链球菌
Keywords
Oreochromis niloticus
CUL1
gene expression
immune response
Streptococcus agalactiae
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q959.483 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
尼罗罗非鱼Galectin-4基因的原核表达及诱导条件优化
被引量:
4
2
作者
张志强
刘鑫潮
牛金中
黄瑜
王蓓
简纪常
机构
广东海洋大学水产学院//广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室//广东省水产经济动物病害控制重点实验室
出处
《广东海洋大学学报》
CAS
2020年第5期118-123,共6页
基金
国家自然科学基金青年基金项目(31702386)
广东省科技厅国际科技合作领域项目(2017A050501037)
广东省普通高校青年创新人才类项目(2018KQNCX105)。
文摘
【目的】研究尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)Galectin-4基因(记作OnGal-4)的原核表达,为大量获取尼罗罗非鱼Galectin-4蛋白(OnGal-4)和后续功能研究奠定基础。【方法】根据NCBI上公布的尼罗罗非鱼Galectin-4基因序列(Genbank:XM-019345120)设计引物,构建原核表达载体,诱导Galectin-4重组蛋白(r OnGal-4)在BL21原核表达系统中表达,并优化其诱导条件。【结果与结论】成功扩增出OnGal-4基因,并构建原核表达载体pGEX-4T-On Gal-4。rOnGal-4最佳诱导条件是温度28℃,IPTG浓度0.4 mmol/L,诱导时间4 h。在此条件下,rOnGal-4在可溶性蛋白中大量表达。Western-blot结果显示,rOnGal-4可与抗GST标签的单克隆抗体发生特异性反应。
关键词
尼罗罗非鱼
Galectin-4
基因克隆
原核表达
条件优化
Keywords
Oreochromis niloticus
Galectin-4
gene clone
prokaryotic expression
condition optimization
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q959.223.63 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化
被引量:
2
3
作者
牛继敏
牛金中
黄瑜
刘鑫潮
简纪常
鲁义善
机构
广东海洋大学水产学院
广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室
广东省水产经济动物病害控制重点实验室
出处
《安徽农学通报》
2020年第5期6-9,共4页
文摘
Galectin-8属于S型凝集素,是一种内源性凝集素,具有高亲力,含β-半乳糖苷,可识别重要的病原分子[1]。该蛋白质有2个功能结构域,均提供该家族中其他蛋白质类似的保守序列[2]。该研究基于尼罗罗非鱼Galectin-8 NCBI上发表的基因序列,利用primer5.0设计1对引物,构建尼罗罗非鱼Galectin-8基因的原核表达载体,将重组后的质粒pGEX-4T-1-Galectin-8导入大肠杆菌中,通过PCR、连接、转化等,进行原核表达。对影响因素进行条件优化,使用优化后的浓度、时间、温度条件表达Galectin-8重组蛋白能得到最优表达量。Western blot检测纯化后的重组蛋白,结果显示,重组蛋白可以很好地结合GST-Tag标签的单克隆抗体,实验进一步证明罗非鱼Galectin-8的重组蛋白被成功表达,为罗非鱼Galectin-8后续相关功能的研究奠定了基础。
关键词
尼罗罗非鱼
Galectin-8
原核表达
WESTERN
BLOTTING
条件优化
Keywords
Oreochromis niloticus
Galectin-8
Prokaryotic expression
Western blotting
Condition optimization
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
尼罗罗非鱼Cullin-1基因克隆及表达
刘鑫潮
黄瑜
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2020
1
下载PDF
职称材料
2
尼罗罗非鱼Galectin-4基因的原核表达及诱导条件优化
张志强
刘鑫潮
牛金中
黄瑜
王蓓
简纪常
《广东海洋大学学报》
CAS
2020
4
下载PDF
职称材料
3
尼罗罗非鱼的Galectin-8基因的原核表达及条件优化
牛继敏
牛金中
黄瑜
刘鑫潮
简纪常
鲁义善
《安徽农学通报》
2020
2
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职称材料
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