力达霉素对人宫颈癌Hela细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化能力的影响

目的研究力达霉素(LDM)对Hela细胞的细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法MTT法分析LDM对Hela细胞增殖的影响;流式细胞术检测LDM对Hela细胞的细胞周期、细胞凋亡的影响;Westernblot检测细胞内相关蛋白的表达水平;Transwell法分析LDM对Hela细胞迁移、侵袭能力的影响;QT-PCR分析LDM对Hela细胞赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达的影响。结果LDM明显抑制Hela细胞增殖,其不同处理时间的IC50值分别为19.24ng·mL^-1(24h)、6.678ng·mL^-1(48h)和3.221ng·mL^-1(72h)。LDM可诱导Hela细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡。低浓度LDM(5ng·mL^-1)可诱导Hela细胞发生自噬,但高浓度LDM(20ng·mL^-1)则抑制Hela细胞的自噬水平。LDM抑制Hela细胞迁移和侵袭,改变EMT相关因子的蛋白表达水平,且这一过程与LSD1无关。结论LDM能抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭转移,其作用机制可能与阻遏细胞周期、诱导细胞凋亡、干扰细胞自噬和抑制EMT密切相关。

优降宁与奥沙利铂协同抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231增殖

目的研究优降宁抑制赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)对奥沙利铂抗人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖作用的影响及其用于抗人三阴性乳腺癌临床研究的潜在价值。方法优降宁和奥沙利铂单独以及联合处理MDAMB-231细胞后,CCK-8法分析细胞增殖;Western blot检测细胞内LSD1表达及其下游底物组蛋白H3K4二甲基化修饰水平、下游基因E-cardherin表达和Bax、Bcl-2及细胞浆内细胞色素C蛋白水平;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡。结果优降宁能够以时间和剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0. 05);1 mmol/L优降宁可显著抑制MDAMB-231细胞内LSD1蛋白的组蛋白去甲基化酶活性(P<0. 05);1 mmol/L优降宁和奥沙利铂联合处理具有抑制MDAMB-231细胞增殖的药物协同效应;1 mmol/L优降宁显著促进奥沙利铂诱导MDA-MB-231细胞凋亡发生(P<0. 05),伴随着Bax基因表达上调、Bcl-2基因表达下调和细胞色素C从线粒体向细胞浆的转移。过表达LSD1则可部分逆转优降宁与奥沙利铂对MDA-MB-231细胞增殖的协同抑制(P<0. 05)。结论优降宁通过抑制LSD1促进奥沙利铂诱导的MDA-MB-231细胞增殖抑制、细胞凋亡,并产生药物协同效应抑制MDA-MB-231细胞增殖。

案件办理与案件管理适当分离问题探析

案件办理与案件管理适当分离,对案件进行集中管理,有助于加强内部监督制约,提高检察工作效率,提升案件办理质量,促进司法公正。因此,应积极探索案件办理与案件管理的适当分离,设置专门案件管理部门,加强人才、信息化建设,建立科学的考评机制。

Annexin V-FITC/DAPI细胞凋亡检测法

[目的]建立新的荧光染料DAPI与FITC标记Annexin V联合的细胞凋亡流式细胞术检测方法,以用于具有橙红色荧光的药物处理细胞的流式细胞术凋亡检测。[方法]以倒置荧光显微镜成像和流式细胞仪分别检测不同浓度DAPI对活和死细胞的标记作用。以荧光酶标仪检测不同浓度DAPI处理细胞的荧光信号,并进行相关性分析。以流式细胞术比较Annexin V-FITC/DAPI双染法与Annexin V-FITC/PI双染法对无色和含红/橙色荧光药物导致的细胞凋亡。[结果]DAPI标记可用于区分死细胞和活细胞,DAPI标记死细胞的荧光信号和DAPI的浓度呈线性正相关。Annexin V-FITC/DAPI双染法与Annexin V-FITC/PI双染法相比,二者对不含红橙色荧光药物诱导的多种肿瘤细胞的凋亡检测结果无显著差异。与Annexin V-FITC/PI双染法相比,Annexin V-FITC/DAPI双染法可有效避免药物自身荧光与PI通道重合导致的流式检测干扰。[结论]成功建立了新的Annexin V-FITC/DAPI双染法用于细胞凋亡的流式细胞术检测,该方法能够避免具有红、橙色荧光基团的药物对的干扰检测凋亡。

光动力治疗与抗肿瘤免疫

光动力治疗是通过特定波长的光激发光敏剂产生活性氧反应物实现对微生物和肿瘤细胞的杀伤。由于光动力治疗的疗效确切,副作用小,并易于与其他治疗方式联用,因而已成为临床肿瘤治疗的新手段。近年来,抗肿瘤免疫的基础研究和临床应用获得了重大进展。研究表明,光动力治疗与抗肿瘤免疫治疗的联合应用具有显著的协同抗肿瘤效应。本文综述了光动力治疗研究进展及其在抗肿瘤免疫治疗的应用,讨论了其面临的障碍及发展前景。

新型精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞侵袭和迁移的抑制作用研究

目的研究新型精胺氧化酶抑制剂-SI-4650对人恶性黑素瘤A375细胞侵袭迁移的影响及其作用机制。方法体外培养A375细胞,将A375细胞分为3组:空白对照组(正常培养)和低、高2个浓度实验组(SI-4650:40,80μmol·L-1),均培养48 h。Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测上皮-钙黏素(E-cadherin)、神经-钙黏素(N-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平。结果空白对照组与低、高2个浓度实验组的迁移数分别为268±35,86±26和32±19;这3组的侵袭穿膜细胞数分别为234±28,32±15和9±5;这3组的E-cadherin蛋白相对表达量分别为1.00±0.06,1.55±0.33和3.34±0.50;这3组的N-cadherin蛋白相对表达量分别为1.00±0.04,0.42±0.06和0.15±0.03;这3组的MMP2蛋白相对表达量分别为0.74±0.03,0.63±0.04和0.34±0.01。上述指标:低、高2个浓度实验组与空白对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.001)。结论 SI-4650可高效抑制人恶性黑素瘤A375细胞迁移和侵袭,其机制可能与影响A375细胞上皮-间质转化进程相关。