1007例新生儿听力筛查及耳聋基因测序结果分析

目的研究南宁市新生儿耳聋基因突变情况,评估新生儿听力筛查准确性,探讨突变位点与听力损失的关系。方法采用耳声发射和自动听性脑干诱发电位反应对出生于2016年1月-2018年12月的17000例新生儿进行听力初筛、复筛及确诊检查,针对GJB2、GJB3、SLC26A4基因对1007例听力初筛未通过的新生儿进行靶向捕获高通量测序,结合生物信息学分析,明确突变位点致病性。结果1007例初筛未过的新生儿中,确诊听力损失78例,355例(35.25%,355/1007)检出突变耳聋基因,其中237例检出12种“致病的”或“可能致病的”突变位点,78例检出新错义突变位点(GJB2:c.217C>A、c.316T>G、c.676G>T;SLC26A4:c.739T>C),13例听力确诊正常者检出11种非编码区突变。GJB2、GJB3、SLC26A4基因的突变携带率分别为1.75%、0.66%、0.36%。GJB2:c.79G>A和GJB3:c.357C>T、c.341A>G、c.608T>C的等位基因频率符合哈迪-温伯格遗传平衡定律,GJB2:c.79G>A(Z=3.082;P<0.01)、c.109G>A(Z=10.670;P<O.O1)和GJB3:c.357C>T(Z=2.902;P<0.01)、c.341A>G(Z=2.798;P<0.001)与听力损失的关联具有统计学意义。结论本研究证实GJB2 c.109G>A是南宁市新生儿携带率最高的耳聋基因突变位点。结合听力和基因检测是临床早期干预非综合征型听力损失更有效的策略。

医学检验实习虚拟仿真平台构建及量化考核实践

医学生的实习教学环节是医学教育过程中最重要的环节,更是医学生毕业时向社会职业角色顺利过渡的关键,临床医学检验技术专业是一门实践性及技术性很强的学科,它的实习阶段不仅是专业学习的重要组成部分,而且是掌握基本操作技能的关键环节。目前高通量的临床检验工作依赖智能化、自动化仪器完成,而实习考核采用传统的理论考试技能考核方式。本文拟对医学检验专业临床实习虚拟仿真平台构建及量化考核实践进行研究与探索,目的是加深学生对理论知识的把握,提升学生的操作技能,解决以往单一的出科考试评价模式,以提高实习教学质量和评价实习效果。

液相色谱串联质谱法检测血浆12种神经酰胺方法建立与性能评价

目的建立一种稳定、灵敏的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测人血浆12种神经酰胺方法。方法收集2021年10月至2022年10月在遵义医科大学及其各附属医院健康体检的438名表观健康人群,建立12种神经酰胺生物参考区间。采用氘代同位素作为内标,使用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱进行分离,流动相为水(含0.1%甲酸)和异丙醇:乙腈(1∶1,v/v,含0.1%甲酸),流速0.4 ml/min,梯度洗脱。使用Qlife Lab 9000 Plus三重四极杆质谱建立LC-MS/MS检测12种神经酰胺的方法。并从线性、定量下限、精密度、回收率和稳定性几个方面对该方法进行性能评价。结果该方法通过了线性、定量下限、回收率、精密度、稳定性的性能评价。12种神经酰胺批内和批间精密度为1.3%~14.3%,正确度通过加标回收实验验证,回收率在91.9%~111.0%,最低定量下限范围为0.001~0.100μmol/L,标准曲线显示出良好的线性关系(r>0.990),稳定性实验显示12种神经酰胺在生物基质中及不同条件处理后规定时间内稳定。12种神经酰胺建立了各自相应的生物参考区间,分别为0.103~0.326μmol/L[Cer(d18∶1/16∶0)]、0.018~0.098μmol/L[Cer(d18∶1/18∶0)]、0.933~3.919μmol/L[Cer(d18∶1/24∶0)]、0.243~1.072μmol/L[Cer(d18∶1/24∶1)]、0.001~0.007μmol/L[Cer(d18∶1/14∶0)]、0.022~0.095μmol/L[Cer(d18∶1/20∶0)]、0.185~0.835μmol/L[Cer(d18∶1/22∶0)]、0.003~0.022μmol/L[Cer(d18∶0/16∶0)]、0.001~0.016μmol/L[Cer(d18∶0/18∶0)]、0.017~0.156μmol/L[Cer(d18∶0/24∶0)]、0.008~0.074μmol/L[Cer(d18∶0/24∶1)]、0.106~0.721μmol/L[LacCer(d18∶1/24∶1)]。结论本研究建立了可靠的检测人血浆12种神经酰胺的LC-MS/MS检测方法,适合于临床应用。

针对新型冠状病毒肺炎的基于CRISPR-Cas系统分子诊断及治疗策略研究

当前新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情仍在全球大流行,确诊病例和死亡人数仍不断攀升,如何有效控制病毒的传播,降低传染率和死亡率是目前全人类亟待解决的问题。一方面需要快速、可靠、经济的检测方法及时发现新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染者,另一方面需要寻找新颖、有效的COVID-19治疗及预防策略。各种基于成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat and associated protein,CRISPR-Cas)系统的新一代基因编辑技术以其快速、便携、经济、高效的特点为COVID-19快速分子诊断提供了解决方案。CRISPR-Cas系统具有可准确识别并降解SARS-CoV-2核酸的特点,为研发针对COVID-19的新型治疗及预防手段提供了一种潜在的技术方案。此文对目前COVID-19诊断及治疗现状进行了分析,对基于CRISPR-Cas系统的COVID-19分子诊断、治疗及预防策略研究及其新进展进行了简述。

基于CRISPR-Cas系统的新一代病原体核酸检测技术

从原核生物的适应性免疫机制衍生出的成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat and associated protein,CRISPR-Cas)系统,以其特异性高、可开发性强、简单高效等特点迅速从众多具有竞争力的基因编辑技术中脱颖而出,既为体内基因编辑技术带来革命性突破,也在体外诊断领域开拓了新的方向。近年来涌现出许多快速、便携、经济、高效的基于CRISPR-Cas系统的体外诊断技术,这些技术在病原体检测方面展示出良好的性能,在肿瘤基因诊断、遗传病筛查、移植排斥反应检测等方面也具有很大潜力。此文仅就CRISPR-Cas系统的作用原理、基于CRISPR-Cas系统的检测方法以及在病原体核酸检测领域的应用进展进行简述。