慢病毒介导基因转染人韧带成纤维细胞表达的研究

目的:探讨慢病毒介导的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染人韧带成纤维细胞的转染效率,以及转染GFP后是否对韧带成纤维细胞的生物活性产生影响,为下一步实验提供理论依据。方法:采用组织块贴壁法培养原代人韧带成纤维细胞,取P2代细胞进行慢病毒感染,96h后荧光显微镜观察转染效率,流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡和细胞增殖,及MTT法检测细胞转染前后的生物学活性变化。结果:成功建立人韧带成纤维细胞培养模型,荧光显微镜GFP阳性细胞率为95%;FACS检测结果显示未转染组与稳定转染组细胞凋亡率分别为(1.91±0.13)%和(1.96±0.12)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);MTT结果显示转染前后细胞生物学活性无显著影响(P>0.05)。结论:慢病毒介导的GFP基因能高效稳定转染人韧带成纤维细胞,同时并不影响其生物学活性,能满足后续实验的需要。

高纯度大鼠胚胎背根神经节神经元的培养与鉴定

目的:建立一种取材容易、存活时间长、纯度高的原代大鼠胚胎背根神经节神经元(DRGn)的培养模型。方法:在解剖显微镜下取得胎鼠背根神经节(DRG),通过胰蛋白酶消化,使用Neurobasal(NB)培养基联合抗有丝分裂药物纯化等方法获得DRGn。采用神经丝蛋白免疫细胞化学染色法和hoechst染核鉴定并测定DRGn的纯度。结果:原代培养的DRGn在含有神经生长因子(NGF)的NB培养基中生长良好,存活时间可达45d,纯度可达到95%以上。结论:该培养模型简单易行,培养稳定,可获得大量高纯度和存活时间长的DRGn。

成骨相关基因在强直性脊柱炎与正常人成纤维细胞的表达差异

目的:探究强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)患者与正常人脊上韧带成纤维细胞的原代爬出时间、生长曲线及两组细胞之间的成骨相关性指标的差异。方法:取AS和正常人棘上韧带,离体原代培养成纤维细胞。记录组织爬出成纤维细胞时间和四甲基偶氮唑盐(MTT)检测法检测两组细胞生长曲线。原代细胞爬出后传代培养,取对数期细胞RNA并逆转录CDNA,实时荧光定量PCR法检测两组细胞之间成骨相关基因表达的差异。结果:两组细胞的爬出时间有明显差异(P<0.05),生长曲线大致成"S"型,两组细胞生长曲线未见明显差异。Ⅰ型胶原酶(COL1A1)在两组之间表达无差异(P>0.05),骨钙素(OC)基因起始表达量过低,可记为不表达。结论:AS组与正常人组成纤维细胞成骨性相关基因原始表达量和生长曲线均无明显差异。