TGF-β1对大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白43介导缝隙连接通讯功能的影响

目的:观察转化生长因子TGF-β1对成年大鼠睾丸Leydig细胞间连接蛋白Cx43表达以及由Cx43介导的缝隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的影响,旨在探讨TGF-β1对Leydig细胞的影响是否与其改变细胞间GJIC功能相关。方法:将原代培养纯化的Leydig细胞分为6组:实验组分别以1、2、5、10 ng/ml的TGF-β1处理细胞20 h,空白对照组以含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液处理细胞,部分实验中以GJIC抑制剂甘珀酸(Carbenox-olone)处理细胞作为阳性对照组。采用免疫荧光法和Western印迹观察Cx43在细胞中的定位和表达变化,用荧光漂白恢复实验(FRAP)检测细胞间GJIC功能的改变。结果:Cx43表达呈斑点状散在分布于Leydig细胞的胞质和胞膜中,TGF-β1处理20 h后,Cx43在胞质中的表达强度随着TGF-β1浓度的增加较空白对照组明显增强,而其在胞膜中的表达则无明显改变。Western印迹结果显示磷酸化状态的Cx43随着TGF-β1浓度增加表现出较空白对照明显增强的趋势(P<0.05),而非磷酸化状态则无显著差异。FRAP结果显示经5 ng/ml TGF-β1作用20 h后细胞内荧光强度较空白对照明显减弱,具有显著性差异(P<0.01),且其平均荧光恢复率仅为(43.58±1.87)%。结论:TGF-β1可显著下调Leydig细胞间的GJIC功能,这种抑制作用可能通过增加其连接蛋白Cx43在细胞质中的表达,提高其磷酸化水平来实现。

温阳生精汤含药血清对肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中雌激素分泌的影响

目的观察温阳生精汤含药血清对腺嘌呤致雄性肾阳虚不育大鼠睾丸间质细胞中雌二醇(es-tradiol,E2)合成以及影响其合成的芳香化酶(cytochrome P450aromatase,P450arom)活性、其编码基因CYP19表达的影响,从蛋白和mRNA水平探讨温阳生精汤含药血清治疗肾阳虚不育的机制。方法将实验大鼠随机分为4组,每组5只,即正常组及温阳生精汤高、中、低浓度组。各组大鼠分别以生理盐水和高、中、低浓度中药连续灌胃10天。末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清。从肾阳虚大鼠体内分别分离并纯化睾丸间质细胞,经鉴定后原代培养,随机分为5组,即空白对照组,模型组,中药高、中、低浓度(1.2、1.0、0.8g/mL)组,用放射免疫法测定细胞培养液中E2含量,氚水释放实验检测P450arom在细胞中的活性,同时用Western blot法和荧光定量PCR法分别测定CYP19蛋白和mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组中间质细胞上清中E2的含量明显减少,同时伴随P450arom活性抑制,以及CYP19蛋白和mRNA表达的显著减少(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,经温阳生精汤含药血清干预后可显著增加间质细胞中E2合成量,上调P450arom活性,同时在蛋白和mRNA水平上调细胞中CYP19表达,并具有部分剂量依赖性(P<0.01,P<0.05)。结论温阳生精汤含药血清可以有效提高肾阳虚大鼠睾丸间质细胞中E2的合成,并可能部分通过上调P450arom活性,提高CYP19基因表达实现,这可能是其治疗男性肾阳虚不育的机制之一。

姜黄素对肿瘤坏死因子诱导单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的:观察姜黄素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)引起的血管内皮细胞分泌单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的影响.方法:采用原代培养方法获得人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),随机分为对照组、TNF-α刺激组和TNF-α+姜黄素组.先用TNF-α刺激血管内皮细胞0.5h,再加入不同浓度的姜黄素(6.25,12.5,25,50和100mg/L)共同孵育1h与单纯TNF-α刺激作对照,采用MTT法、ELISA法和RT-PCR法检测姜黄素对细胞及其上清液中MCP-1蛋白表达的影响.结果:HUVEC经TNF-α刺激0.5h后,其MCP-1表达为159.37±4.47,与对照组94.13±6.07相比明显增强(P<0.01);再与不同浓度姜黄素共同孵育1h后,MCP-1在细胞中的表达分别为:137.63±4.50,121.72±1.96,116.08±3.93和101.62±4.12,与单纯给予TNF-α刺激相比明显减弱(P<0.01),且随着浓度升高有递增的趋势.结论:姜黄素通过抑制炎症因子MCP-1的表达调节血管内皮细胞的炎症反应,从而发挥保护血管内皮细胞,防止动脉粥样硬化的作用.

人脐静脉内皮细胞损伤过程中核转录因子κB及单核细胞趋化蛋白1mRNA的变化

背景:既往实验表明,炎性因子与内皮细胞的功能有密切的关系,观察保护和损伤因素对体外培养人血管内皮细胞炎性因子作用的报道较少。目的:实验拟观察姜黄素和肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞分泌核因子κB以及单核细胞趋化蛋白1mRNA的影响。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2006-12/2007-08在解放军第四军医大学组织工程实验室完成。材料:健康人脐带由解放军第四军医大学唐都医院提供。内皮细胞培养采用M199完全培养基。方法:实验分为3组,正常对照组为无血清M199培养基;肿瘤坏死因子α组:在正常细胞培养液中加入浓度为10μg/L的肿瘤坏死因子α诱导损伤1.5h;姜黄素组:先在培养液中加入10μg/L的肿瘤坏死因子α30min诱导损伤,再分别加入终浓度为6.25,12.5,25,50,100mg/L的姜黄素孵育1h。主要观察指标:①四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度姜黄素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。②免疫细胞化学染色法观察胞核内核转录因子κB的表达。③反转录-聚合酶链反应检测单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达。结果:姜黄素可以提高肿瘤坏死因子α诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性(P<0.01),并呈一定剂量依赖性。肿瘤坏死因子α可刺激核因子κBp65表达的强度,姜黄素可以减少核因子κBp65的表达。与正常对照组相比,肿瘤坏死因子α作用30min后,单核细胞趋化蛋白1mRNA相对表达量明显增高(P<0.01);加入不同浓度的姜黄素作用1h后,单核细胞趋化蛋白1mRNA相对表达量明显减低(P<0.05,P<0.01)。结论:姜黄素对损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用途径可能通过抑制核转录因子κB活性,并下调单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达,从而阻滞了单核细胞的聚集。

二仙汤加味治疗绝经后微血管性心绞痛疗效观察

目的:观察二仙汤加味治疗绝经后微血管性心绞痛的疗效。方法:将80例绝经后微血管性心绞痛患者随机分为常规治疗组(对照组)50例,伍用二仙汤治疗组(治疗组)30例。治疗4周后,比较两组心绞痛发作频率和心电图运动试验,包括ST段压低幅度的变化。结果:治疗组心绞痛发作频率和心电图运动试验结果显著改善,与对照组比较存在显著差异。结论:常规药物合二仙汤加味对绝经后微血管性心绞痛治疗安全有效。

淫羊藿苷对转化生长因子-β1诱导的大鼠睾丸间质细胞损伤的保护作用

目的:研究淫羊藿苷(Icariin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠睾丸间质细胞损伤的保护作用。方法:利用4-甲偶氮唑蓝法筛选Icariin对TGF-β1诱导的间质细胞损伤保护作用的最适浓度,用放射免疫法和3H释放实验检测Icariin作用前后损伤的间质细胞中雌激素(E2)含量和芳香化酶P450arom活性,采用荧光漂白后恢复实验检测Icariin对损伤的间质细胞间缝隙连接通讯(GJIC)功能的影响。结果:不同浓度Icariin均可提高TGF-β1作用后睾丸间质细胞的活细胞率,其中,20μg/ml时即可发挥作用,而160μg/ml时达到最佳;用160μg/ml浓度Icariin干预TGF-β1损伤的睾丸间质细胞后,间质细胞中E2的生成和芳香化酶活性显著增加(P<0.01),且间质细胞间的荧光恢复率也明显提高(P<0.01)。结论:Icariin可通过增加E2合成有效阻止TGF-β1对间质细胞的损伤,这种影响可能通过部分上调雌激素合成的关键酶P450arom活性实现;且Icariin还具有改善间质细胞间GJIC功能的作用。

二仙汤加味对去卵巢大鼠血压及性激素含量的影响

目的观察二仙汤加味对去卵巢大鼠血压及性激素含量的影响。方法 40只成年雌性大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、二仙汤加味组、替勃龙组。观察大鼠实验前后体质量、饮食等一般情况变化,应用无创血压测量仪测量大鼠尾动脉血压,放射免疫法测定实验大鼠血清雌二醇(E2)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)含量。结果与模型组相比,二仙汤加味能显著降低去卵巢大鼠体质量,降低其收缩压与舒张压,提高血清中E2含量,降低LH与FSH水平。结论二仙汤加味可降低去卵巢大鼠收缩压与舒张压,且升高其体内E2含量。

金匮肾气丸对腺嘌呤致雄性不育模型大鼠精子质量与性激素含量的影响

目的:观察金匮肾气丸对腺嘌呤致雄性不育大鼠精子质量及性激素含量的影响。方法:30只SD大鼠随机分为空白对照组、腺嘌呤组、金匮肾气丸组。应用自动精子质量分析仪检测实验大鼠的精子质量(精子密度、活率及活动度);同时应用放射免疫法测定血清睾酮(T)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)的含量;透射电镜观察实验大鼠睾丸组织精子鞭毛密度,支持细胞、精原细胞、初级精母细胞等结构。结果:与腺嘌呤组比较,金匮肾气丸组大鼠肾阳虚症状显著改善,精子密度、活率及活动度明显提高(P<0.05);金匮肾气丸组大鼠血清T含量明显提高(P<0.05),LH、FSH含量降低(P<0.05);电镜下金匮肾气丸组大鼠精子数量明显增多,大鼠睾丸组织受损的支持细胞明显改善。结论:金匮肾气丸可提高腺嘌呤致不育模型大鼠的精子质量,其机制之一可能是通过提高血清中T的含量及保护受损的支持细胞这一间接作用实现的。

二仙汤加味对去卵巢大鼠心肌NF-κBp50、IκBα的影响

目的探寻二仙汤加味对去卵巢大鼠心肌保护作用的机制。方法采用5月龄雌性大鼠建立去卵巢模型,随机分为空白对照组、模型组、加味二仙汤高、中、低剂量组、替勃龙组,每组8只。二仙汤组分别用二仙汤30、15、7.5g/kg生药剂量给药,替勃龙组用0.25mg/kg给药,其余两组给予3mL生理盐水灌胃,各组持续灌胃60d。采用免疫组化法分析心肌NF-κBp50、IκBα的表达。结果模型组与各治疗组、空白组比较,NF-κBp50、IκBα的表达均显著增高。二仙汤各剂量组与模型组比较,NF-κBp50、IκBα表达明显降低。二仙汤组对心肌NF-κBp50、IκBα改善优于替勃龙组。结论去卵巢大鼠心肌中存在NF-κBp50、IκBα的激活,加味二仙汤对其有一定抑制作用,可能是二仙汤心肌保护作用机制之一。

姜黄素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色法和ELISA法测定细胞MMP-9的表达。结果不同浓度的姜黄素(6.25,12.5,25,50,100μg/mL)作用人脐静脉内皮细胞24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。

姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型MMP-9表达的抑制作用

目的探讨姜黄素对人脐静脉内皮细胞损伤模型基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的抑制作用。方法进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定。加入相同浓度TNF-α诱导半个小时后加入不同浓度的姜黄素处理细胞24h。采用免疫细胞化学染色和ELISA的方法测定细胞MMP-9的表达。结果经TNF-α诱导过的人脐静脉内皮细胞加入不同浓度的姜黄素(6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml)作用24h后均能明显抑制细胞MMP-9的表达,并且随着浓度的升高这种抑制作用明显增强。结论姜黄素能明显降低TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达。

益气活血化瘀通络法联合硝苯地平治疗老年痰瘀阻滞型高血压的效果及对患者8-OHdG、SOD、MDA水平的影响

目的探讨益气活血化瘀通络法联合硝苯地平治疗老年痰瘀阻滞型高血压的效果及对患者8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法选取2019年1月至2021年1月我院收治的100例老年痰瘀阻滞型高血压患者作为研究对象,按照随机数字表法将其分为对照组(50例,硝苯地平治疗)与观察组(50例,益气活血化瘀通络法+硝苯地平治疗)。比较两组的治疗效果。结果治疗后,两组的收缩压及舒张压均降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的一氧化氮(NO)水平均升高,内皮素-1(ET-1)水平均降低,且观察组优于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的8-OHdG、MDA水平均降低,SOD水平均升高,且观察组优于对照组(P<0.05)。观察组的不良反应总发生率为2.00%,低于对照组的14.00%(P<0.05)。结论益气活血化瘀通络法联合硝苯地平治疗老年痰瘀阻滞型高血压的临床效果显著,可降低患者的收缩压及舒张压,改善血管内皮功能与氧化应激水平,且药物不良反应小,值得推广与应用。

益气强心饮对Wistar慢性心衰模型大鼠AngⅡ含量及AT1 mRNA表达影响

目的:分析益气强心饮对Wistar慢性心衰模型大鼠血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)mRNA表达影响。方法:选取由第四军医学大学实验动物中心提供SPF级Wistar雄性大鼠30只,随机数字表法分成三组,正常组(10只)、模型组(10只)及观察组(10只),模型组和观察组大鼠制备慢性心力衰竭(CHF)模型,造模后观察组大鼠使用益气强心饮灌胃,对照组和正常组使用等剂量生理盐水灌胃。使用GEL-400彩色多普勒超声心动仪对各组大鼠造模后和治疗后射血分数(EF)、每搏心输出量(SV)、及左心室舒张末期内径(LVEDD)进行检测,血清AngⅡ水平使用放射免疫法检测,RT-PCR法检测大鼠心肌组织内AT1mRNA表达量,并观察其心肌组织病理形态情况。结果:造模后,模型组和观察组大鼠EF、SV较正常组下降,LVEDD较正常组上升,差异有统计学意义(P<0.05),治疗后,观察组大鼠EF、SV较模型组上升,LVEDD较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠心肌组织AT1mRNA表达量、血清AngⅡ水平较正常组上升,观察组大鼠心肌组织AT1mRNA表达量、血清AngⅡ水平较模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气强心饮可抑制CHF大鼠心肌组织内AT1mRNA表达,降低血清AngⅡ水平,使其心功能与心肌重构得到改善。

金匮肾气丸对腺嘌呤致不育大鼠精子质量与肾脏功能的影响

目的:观察金匮肾气丸对腺嘌呤致雄性不育大鼠精子质量及肾功能的影响。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、金匮肾气丸组。应用自动精子质量分析仪检测实验大鼠的精子质量(精子密度、活率及活动度);应用放射免疫法测定血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)含量;自动生化分析仪分析血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;HE染色、光镜观察肾脏组织变化,透射电镜观察实验大鼠睾丸中精子鞭毛密度。结果:金匮肾气丸能明显增加大鼠精子密度、活率及活动度,提高大鼠血清T含量,降低E2,LH,FSH含量;降低血清BUN和Scr含量。结论:金匮肾气丸可提高模型大鼠的精子质量,改善肾功能。其提高精子质量可能是通过刺激间质细胞产生T及降低异常升高的E2这一间接作用实现的。

三萜环黄氏醇调节高糖诱导的内质网应激和氧化应激减轻大鼠心肌细胞损伤

目的探究三萜环黄氏醇(cycloastragenol,CTG)对高糖诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的作用及机制。方法将细胞随机分为对照(control,Ctrl)组、CTG组、高糖诱导(high glucose,HG)组和HG+CTG组,用HG处理HG和HG+CTG组细胞24h,同时CTG组和HG+CTG组加入CTG处理细胞,其余组加入等量溶媒。24h后CCK8法检测细胞活性,免疫印迹检测C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous pro-tein,CHOP)、半胱天冬酶-12(caspase-12)、生长抑制和DNA损伤诱导蛋白34(gosh arrest and DNAdamage-inducible 34,GADD34)、BiP、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达,试剂盒检测培养液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的浓度。结果与Ctrl组比较,HG组H9C2细胞活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平明显升高;与HG组比较,HG+CTG组细胞活性显著升高,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平明显降低。同时,HG组CHOP和Caspas-12的表达水平与CtH组比较明显升高,GADD34和BiP的表达明显被抑制;HG+CTG组细胞CHOP和Caspas-12的表达水平与HG组比较明显降低,GADD34和BiP的表达明显升高。此外,HG能显著升高培养液MDA浓度,降低SOD浓度,CTG能显著减弱HG对MDA和SOD的调控作用。结论CTG能通过抑制内质网应激和氧化应激减轻高糖诱导的大鼠H9C2细胞损伤。