甲状腺肿瘤细胞DNA含量及CyclinD1与p27和Rb基因表达的定量检测

目的:探讨DNA含量(DI值)、细胞增殖活性(PI值)、CyclinD1、p27及Rb基因表达在不同甲状腺肿瘤中的变化,为甲状腺癌的癌变机制及甲状腺肿瘤的鉴别诊断提供实验依据。方法:采用流式细胞术(FCM)和免疫荧光技术对甲状腺癌(40例)、结节性甲状腺肿(21例)、甲状腺腺瘤(16例)、正常甲状腺组织(10例)的DNA含量、细胞增殖活性及CyclinD1、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果:甲状腺癌组的DI值明显增高,异倍体细胞明显增多,异倍体率为80.0%,PI值明显增高。CyclinD1蛋白在甲状腺癌组表达显著增高,p27蛋白表达量在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺腺癌组中依次减少,均明显低于正常甲状腺组织。结论:甲状腺癌发展过程中,DNA含量及异倍体率增加,细胞增殖活性增高。CyclinD1蛋白高表达,p27蛋白低表达,CyclinD1、p27与甲状腺肿瘤的发生密切相关。

MMP-9及TIMP-1mRNA在甲状腺肿瘤中的表达及临床意义

目的:研究MMP-9及TIMP-1mRNA在不同类型甲状腺肿瘤组织及不同临床病理特征甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,探讨其在甲状腺癌浸润、转移中的作用。方法:采用石蜡切片、原位杂交法检测了20例甲状腺乳头状癌,20例甲状腺腺瘤,20例结节性甲状腺肿和20例癌旁正常甲状腺组织中MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:与癌旁正常甲状腺比较各类型肿瘤组织中MMP-9mRNA杂交信号均呈增强的趋势(P<0.01),与甲状腺癌比较,结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织中MMP-9mRNA杂交信号均呈减弱的趋势(P<0.05);同时,MMP-9mRNA在甲状腺癌中的表达与肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移、预后指数呈正性调节关系(MMP-9mRNA表达高者恶性度高、预后差,P<0.05或P<0.01)。TIMP-1mRNA在癌旁正常甲状腺组织、良性甲状腺结节及甲状腺癌中均有不同程度的表达,与癌旁正常甲状腺组织比较各类型肿瘤组织中TIMP-1mRNA表达均呈增加的趋势,但只有甲状腺癌组明显高于正常甲状腺组,差异有显著(P<0.05);与甲状腺癌比较,结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织中TIMP-1mRNA表达没有明显改变(P>0.05);同时TIMP-1mRNA在甲状腺癌中的表达与临床病理特征呈负性调节关系(TIMP-1mRNA表达低者恶性度高、预后差,P<0.05或P<0.01)。结论:MMP-9及TIMP-1mRNA的表达与甲状腺癌的浸润、转移密切相关,MMP-9及TIMP-1mRNA表达有望成为判断甲状腺乳头状癌浸润、转移和预后较可靠的指标。

应用mRNA差异显示技术克隆甲状腺癌相关基因

目的:筛选并克隆甲状腺乳头状癌、甲状腺未分化癌与其正常甲状腺组织之间差异表达的基因。方法:应用mRNA差异显示技术克隆与鉴定出差异的cDNA片断,并对其进行NCBIGenBank数据库同源性检索。结果:成功亚克隆出8个基因片段,进行GenBank数据库同源性检索,这些基因可能与甲状腺癌的发生相关,尤其在甲状腺未分化癌及乳头状癌中均见与LMAN1基因同源的差异带,提示LMAN1基因很可能为甲状腺癌相关基因。结论:获得的差异表达片段为进一步克隆甲状腺癌相关基因及功能研究奠定了良好的基础。

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导后对糖尿病大鼠模型的治疗作用

对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养、体外扩增,采用含不同葡萄糖浓度的培养基加尼克酰胺、exendin-4向胰岛样细胞进行诱导。将诱导细胞通过尾静脉及肾包囊移植入糖尿病大鼠模型体内,通过对血糖的检测,观察诱导后细胞对糖尿病大鼠模型的治疗效果。发现大鼠BMSCs在尼克酰胺和exendin-4作用后,可通过尾静脉和肾包囊途径进入体内,分布在不同脏器,同时产生降低链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠血糖水平的作用。

大鼠骨髓间充质干细胞诱导为胰岛样细胞体外实验

目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在不同葡萄糖浓度培养基中诱导效果的差异.方法:采用电镜观察细胞形态学变化、双硫腙(DTZ)染色鉴定胰岛素分泌细胞的存在;放射免疫分析法观察诱导后BMSCs细胞对葡萄糖刺激试验的反应;免疫细胞化学分析鉴定细胞内胰岛素分泌以及Real-timePCR鉴定胰岛β细胞相关基因mRNA表达水平.结果:电镜观察可见诱导后的细胞具备典型分泌细胞特点,DTZ染色显示各诱导组细胞团为棕红色,细胞浆中富含锌离子,而对照组则无染色,表明胰岛素分泌样细胞的存在.经不同浓度葡萄糖诱导后其吸光度值A值:低糖5.5mmol/L诱导组(4.75±1.87),中糖11.1mmol/L诱导组(10.96±2.06),高糖25mmol/L诱导组(12.53±2.04),且各诱导组吸光度值A值随着培养基葡萄糖浓度的不断增加,A值也在不断增高.Real-timePCR定量分析结果显示,诱导后胰岛β细胞相关基因GK,PDX-1,ngn3,GLP-1mRNA的表达水平变化显著,差异具有统计学意义(P<0.01).胰岛素分泌量高糖25mmol/L诱导组(6.64±0.46)IU/L高于其他各组,差异具显著性(P<0.01).结论:培养基葡萄糖浓度对大鼠BMSCs诱导为胰岛样细胞具有一定影响,以高糖培养基的诱导效果较好.

动态血糖监测联合胰岛素泵治疗初诊2型糖尿病的疗效

目的探讨动态血糖监测系统(CGMS)联合胰岛素泵治疗对初诊2型糖尿病患者血糖控制的效果。方法初诊2型糖尿病患者60例,随机分为CGMS组(28例)和指法血糖组(FBG组,32例),均应用胰岛素泵治疗,比较两组治疗前、后空腹及餐后血糖,血糖达标时间,治疗3 d时的平均血糖(MBG)、平均血糖波动幅度(MAGE)、低血糖发生次数。结果 CGMS组患者血糖达标时间短于FBG组(P<0.05);CGMS组低血糖的发生次数明显减少(P<0.05);CGMS组MAGE低于FBG组(P<0.05)。结论 CGMS与CSII联合使用治疗初诊2型糖尿病更快速、平稳、安全。

细胞周期蛋白G2在甲状腺癌组织中表达及其对癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨细胞周期蛋白G2(cyclin G2,CCNG2)在甲状腺癌组织中表达的意义及其过量表达对甲状腺癌SW579细胞增殖、凋亡的影响。方法:收集唐山市工人医院头颈科2003-2008年手术切除的63例甲状腺癌标本及其癌旁组织,免疫组织化学方法、Western blotting检测其中CCNG2蛋白的表达情况,分析CCNG2蛋白表达与临床病理指标、患者生存期之间的关系。通过慢病毒转染方法建立过表达CCNG2的甲状腺癌SW579细胞,采用RT-PCR及Western blotting检测转染后SW579细胞内CCNG2基因的表达水平,MTT比色法及流式细胞术观察CCNG2过表达对SW579细胞增殖、凋亡的影响。结果:CCNG2蛋白在甲状腺癌组织中的表达阳性率(33.3%vs 96.8%,P<0.05)及相对表达量(0.343±0.033 vs 0.713±0.062,P<0.05)均显著低于癌旁组织;CCNG2蛋白表达在甲状腺癌患者不同性别、年龄、肿瘤大小组间无显著差异(均P>0.05),而在不同的甲状腺癌细胞分化程度、淋巴结转移以及肿瘤临床分期组间有显著差异(均P<0.05);CCNG2表达阳性的甲状腺癌患者的5年总生存率明显高于其表达阴性者(P<0.05)。成功构建CCNG2过表达的SW579细胞,CCNG2过表达能明显抑制SW579细胞增殖能力,促进肿瘤细胞凋亡[(15.1±2.3)%vs(5.6±1.1)%,P<0.05]。结论:CCNG2在甲状腺癌组织中低表达,CCNG2过表达能够抑制甲状腺癌SW579细胞的增殖并促进其凋亡。

胰岛素泵强化治疗早期糖尿病肾病的疗效

目的探讨胰岛素泵泵入门冬胰岛素、门冬胰岛素+地特胰岛素对早期糖尿病肾病(DN)患者的疗效。方法将64例早期DN患者随机分为胰岛素泵泵入门冬胰岛素组(CSII组)、门冬胰岛素+地特胰岛素组(MSII组),治疗4 w后观察两组的血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、尿微量蛋白(ACR)、尿白蛋白排泄率(UAER)、24 h尿蛋白的变化。结果两组治疗后血糖、HbA1c、ACR、UAER、24 h尿蛋白较治疗前均有下降并差异显著(P<0.05),血糖、HbA1c、低血糖次数治疗组较对照组下降更明显并有统计学差异,ACR、UAER、24 h尿蛋白无统计学差异(P>0.05)。结论胰岛素泵泵入门冬胰岛素能显著降低早期DN的ACR、UAER、24 h尿蛋白,降糖更安全、更迅速。

“双C”方案治疗难治性或脆性糖尿病18例

血糖监测是糖尿病（DM）管理的重要组成部分,动态血糖监测是指通过葡萄糖感应器监测皮下组织间液的葡萄糖浓度而反映血糖水平的技术,可提供连续、全面、可靠的全天血糖信息,了解血糖波动趋势,发现不易被传统方法所探测的高血糖和低血糖,为传统血糖监测方法的有效补充〔1〕。

p27-CyclinD1/CDK4-Rb蛋白在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达及临床意义

目的:探讨细胞周期调控基因蛋白p27、CyclinD1、CDK4、Rb在不同类型甲状腺肿瘤组织中的变化,为甲状腺肿瘤的发生学以及临床诊断提供参考。方法:应用流式细胞术和免疫荧光技术对甲状腺乳头状癌(40例)、甲状腺腺瘤(16例)、结节性甲状腺肿(21例)、正常甲状腺组织(10例)的CyclinD1、CDK4、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果:CyclinD1和CDK4基因蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量显著高于其它三组(P<0.01),而后三组间差异无显著性(P>0.05);p27基因蛋白在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺乳头状癌表达量依次减少,均低于正常甲状腺组织(P<0.05);Rb基因蛋白的表达量在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌中依次减少,但各组间无显著性差异(P>0.05)。结论:CyclinD1/CDK4高表达、p27低表达在甲状腺乳头状癌的发生中起着重要的作用,而Rb基因在甲状腺乳头状癌的发生中可能不起主要作用。

甲状腺肿瘤患者血清中MBL和MASP-2的表达及意义

目的检测甲状腺肿瘤患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)和相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的水平并探讨其意义。方法应用ELISA法检测26例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺腺瘤患者MBL和MASP-2的血清水平。结果甲状腺乳头状癌患者MBL血清含量[(565.23±76.7)μg/L]高于甲状腺腺瘤患者[(324.267±24.74)μg/L]及健康者[(152.69±16.95)μg/L],甲状腺乳头状癌患者与甲状腺腺瘤患者及健康者间差异有统计学意义(P<0.05),甲状腺腺瘤患者与健康者间差异无统计学意义(P>0.05);甲状腺乳头状癌患者MASP-2血清含量[(726.153±78.88)μg/L]高于甲状腺腺瘤患者[(379.266±30.26)μg/L]及健康者[(203.846±29.09)μg/L],甲状腺乳头状癌患者与甲状腺腺瘤患者及健康者间差异有统计学意义(P<0.05),甲状腺腺瘤患者与健康者间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MBL和MASP-2在甲状腺乳头状癌患者中血清水平高,说明作为免疫防御分子,可能参与了甲状腺肿瘤的免疫防御过程。

3C胰岛素泵治疗脆性糖尿病的临床疗效

目的探讨3C胰岛素泵与双C方案(胰岛素泵联合回顾性动态血糖监测)治疗脆性糖尿病的疗效与安全性。方法随机选择32例脆性糖尿病患者并分为3C组(16例)和双C组(16例),均治疗6d,比较两组治疗前后血糖水平、血糖波动情况和低血糖发生情况。结果治疗第6天3C组空腹血糖(FPG,(6.3±0.6)mmol/L vs(7.1±0.5)mmol/L]、平均血糖(MBG,(7.87±0.72)mmol/L vs(10.86±1.08)mmol/L]明显低于双C组(P<0.05),3C组平均血糖波动幅度(MAGE,(3.79±0.50)mmol/L vs(4.98±0.41)mmol/L)、低血糖风险系数(LGBI,(0.39±0.13)vs(1.08±0.32)]明显低于双C组(P<0.05),3C组血糖<3.9 mmol/L的药时曲线下面积(AUC,(3.9,0.11±0.04)mmol·L^(-1)·h^(-1)vs(0.49±0.15)mmol·L^(-1)·h^(-1)]明显低于双C组(P<0.05)。结论 3C胰岛素泵治疗脆性糖尿病的疗效及安全性明显优于双C方案。

自体骨髓干细胞移植配合针灸治疗糖尿病周围神经病变患者24例双下肢神经电生理的变化

目的:观察2型糖尿病并发周围神经病变患者自体骨髓干细胞移植配合针灸治疗后,双下肢胫神经与腓总神经的电生理变化。方法:①选取河北医科大学唐山临床医学院2005-01/2006-12收治住院的确诊为糖尿病足或糖尿病下肢动脉闭塞症同时并发糖尿病周围神经病变的24例患者,男16例,女8例,平均年龄(56.8±6.1)岁,平均病程(12.6±3.6)年,均无严重的心、肾、肝、肺病变,对本实验知情同意。随机数字表法分为干细胞组、针灸组、干细胞+针灸组,8例/组。②局麻下由双侧髂后上棘采集每位患者的骨髓血200～300mL,应用密度梯度离心分离骨髓血中单个核细胞,镜下计数单个核细胞总数约为1.1×1012L-1,用生理盐水稀释成30mL干细胞悬液。③干细胞组给予单纯自体骨髓干细胞移植治疗,在硬膜外麻醉下将干细胞混悬液沿闭塞血管两侧多点肌肉注射到患者下肢,进针深度约1.4cm,相邻两点间的距离及与闭塞血管间距离均为1.5cm,每点注射0.8～1.0mL,注射时避开血管与神经。针灸组给予单纯针灸治疗,用普通手法针刺足三里、环跳、阳陵泉、三阴交。针刺15min/次,1次/d,持续治疗30d。干细胞+针灸组行自体骨髓干细胞移植配合针灸治疗,过程同上。④使用肌电图仪检测治疗前及治疗后3个月各组患者双下肢胫神经与腓总神经的感觉神经传导速度、运动神经传导速度。结果:24例2型糖尿病并发周围神经病变患者均进入结果分析。①各组患者治疗后一般状况:干细胞+针灸组治疗24h,足趾疼痛感和麻木感明显减轻;1个月后疼痛消失,足趾可轻微活动;3个月后足趾活动力量可达3级,除2例患者有跛行外,其余6例患者均可正常行走。干细胞组、针灸组患者预后情况较干细胞+针灸组差。②各组治疗前后双下肢神经传导速度的变化:与治疗前比较,各组患者胫神经、腓总神经的运动神经传导速度均显著增加(P<0.05或P<0.01);干细胞组、干细胞+针灸组胫神经的感觉神经传导速度均显著增加[(16.9±4.5),(25.2±5.5);(17.1±4.9),(29.4±8.5)m/s;P均<0.01],腓总神经的感觉神经传导速度亦均显著增加[(16.5±5.9),(30.3±5.2);(17.8±5.2),(31.7±7.2)m/s;P均<0.01];针灸组感觉神经传导速度变化不明显(P>0.05)。组间比较,各组改善运动神经传导速度的效果差异无显著性意义(P>0.05);与干细胞组改善胫神经、腓总神经的感觉神经传导速度比较,针灸组治疗效果较差[(25.2±5.5),(20.1±4.9);(30.3±5.2),(20.3±5.4)m/s;P均<0.05],而干细胞+针灸组改善效果显著[(25.2±5.5),(29.4±8.5);(30.3±5.2),(31.7±7.2)m/s;P均<0.01]。结论:自体骨髓干细胞移植配合针灸治疗可显著改善糖尿病并发周围神经病变的电生理指标。

2型糖尿病患者甘露糖结合凝集素及IL-6、IL-8、IL-17、IL-23的变化

目的通过比较2型糖尿病患者与健康患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、细胞因子IL-6、IL-8、IL-17、IL-23的变化,探讨糖尿病可能的免疫学发病机制。方法将122例老年2型糖尿病患者定义为A组,体检的123例健康老年人定义为B组,对比两组血浆中MBL、IL-6、IL-8、IL-17、IL-23的含量变化。结果两组MBL含量无统计学差异(P>0.05);A组IL-6、IL-23含量显著高于B组(P<0.05);A组IL-8含量略高于B组,但无统计学差异(P>0.05);A组IL-17的含量明显高于B组(P<0.01);A组IL-23的含量明显高于B组(P<0.05)。结论 IL-6、IL-17、IL-23在2型糖尿病患者中明显升高,而IL-8的升高不明显,这些细胞因子的变化可能与2型糖尿病的发生有关,MBL含量低下可能会加重糖尿病的严重程度。

胰岛素泵治疗1型糖尿病的临床观察

目的比较胰岛素泵持续皮下胰岛素输注(CSⅡ)法和传统的多次皮下注射胰岛素法(MSⅡ)对1型糖尿病患者的疗效。方法1型糖尿病患者25例,随机分为CSⅡ组(10例)和MSⅡ组(15例)。CSⅡ组给予胰岛素泵持续皮下泵入短效优泌林;MSⅡ组于三餐前皮下注射短效优泌林和睡前皮下注射中效优泌林;比较2组疗效。结果2组达到相同的血糖水平时,CSⅡ组所需的时间、胰岛素用量以及低血糖发生率较MSⅡ组明显减少(P<0.05)。结论胰岛素泵强化治疗能更有效地模拟生理胰岛素的分泌,更快、更有效地控制高血糖,减少血糖波动和低血糖的发生。

原发性醛固酮增多症各项诊断筛查方法的临床价值

目的评价经手术病理证实的原发性醛固酮增多症(PA)患者术前各项诊断筛查方法与术后病理诊断的符合率。方法回顾性分析36例PA患者不同指标筛查PA的阳性率,各项确诊试验对PA确诊率及CT与术后病理的诊断符合率。结果在上述患者中,以血浆醛固酮与肾素比值(ARR)>30 ng/dl为筛选条件筛查PA的阳性率为42%,以ARR>50 ng/dl筛查PA的阳性率为64%(P<0.01);盐水滴注抑制试验和卡托普利抑制试验对PA的确诊率分别为90.91%和92%(P>0.05);与术后病理对照,CT对醛固酮腺瘤(APA)和单侧肾上腺皮质增生(UAH)的诊断符合率分别为95.24%和73.33%(P>0.05)。结论 ARR>50 ng/dl筛查PA的阳性率高于ARR>30 ng/dl;盐水滴注抑制试验与卡托普利抑制试验确诊率相当;对于分型,CT对APA的诊断符合率与UAH相当。