祛湿健骨方对MC3T3-E1细胞成骨分化能力的促进作用研究

目的探讨祛湿健骨方对MC3T3-E1细胞的作用机理。方法将祛湿健骨方配成不同浓度溶液(0.005、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL),用不同浓度祛湿健骨方对细胞进行干预,干预48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,筛选最佳药物浓度。将MC3T3-E1细胞制成细胞悬液,随机分为对照组、地塞米松组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,接种至六孔板。待细胞贴壁达到80%后进行造模(对照组不添加药物;地塞米松组使用地塞米松干预;低剂量组、中剂量组、高剂量组分别用相应浓度的祛湿健骨方+地塞米松进行干预)48 h后更换为成骨诱导培养基进行培养。诱导15 d后,测定各组细胞的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)含量和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨细胞特异性转录因子(Osterix,OSX)蛋白的表达量。结果经CCK-8实验结果对比,药物筛选前3位存活率浓度为0.1 mg/mL(低浓度)、0.2 mg/mL(中浓度)、0.4 mg/mL(高浓度)。与对照组相比,地塞米松组、低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞ALP活性均降低差异有统计学意义(P<0.05);与地塞米松组相比,低剂量组、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组细胞ALP活性升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,中剂量组、低剂量组、地塞米松组细胞的RUNX2、OSX蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组细胞OSX和RUNX2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与地塞米松组比较,高剂量组OSX和RUNX2蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论祛湿健骨方能够促进MC3T3-E1细胞的成骨分化能力,其可能是通过调节RUNX2、OSX等骨形成相关蛋白,以此纠正骨形成与骨吸收的平衡,达到治疗骨质疏松症的作用。

湿寒证对绝经后骨质疏松症模型大鼠下丘脑弓状核β-EP的影响

目的建立骨质疏松湿寒病证动物模型,探讨湿寒证对绝经后骨质疏松症模型大鼠下丘脑弓状核β-EP的影响。方法将30只雌性SD大鼠随机分为5组,每组6只。正常对照组常规饲养,假手术组做假手术,湿寒证组加湿寒证病因因素(湿寒环境+寒凉性饲料+冷水游泳),去卵巢(OVX)模型组做OVX手术,OVX+湿寒证组做OVX手术加湿寒证病因因素。观察各组大鼠外在表征,每两天测大鼠体重、饮食量变化。9周后取材,Micro-CT检测骨密度和微结构,HE染色观察下丘脑神经细胞病理改变,免疫组化测定β-内啡肽(β-endorphin,β-EP)阳性表达水平。结果与正常对照组比湿寒证模型组大鼠出现体形臃肿,小便色清,大便塘稀等湿寒证表现;与OVX模型组相比,OVX+湿寒证模型组骨密度下降(P>0.05),但骨小梁分离度上升、骨小梁分离度标准差、结构模型指数上升,差异有统计学意义(P<0.05),表明骨微结构有改变;与正常对照组比,湿寒证模型组β-EP免疫反应阳性表达降低(P<0.05);与OVX模型组比,OVX+湿寒证模型组β-EP免疫反应阳性表达降低(P<0.05)。结论湿寒证可引起绝经后大鼠骨密度减少、骨形态计量学指标改变,可能是通过神经元细胞形态结构改变及β-EP表达水平下降间接诱发骨质疏松症的发生发展。