Trib3基因在大鼠睾丸组织不同发育时期的表达研究

目的研究Trib3基因在大鼠睾丸组织不同发育时期的表达。方法用RT-PCR、Western Blot、免疫组化等方法分别观察Trib3基因在大鼠精子生成过程中的表达情况。结果mRNA表达量在野生型大鼠出生后2~12 d较高,4 d达到高峰;14~16日龄与2~12日龄间差异无统计学意义(P>0.05);20~35日龄与14~16日龄比较,表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);40~65日龄与20~35日龄比较,表达量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Trib3蛋白在2~12日龄呈现较高表达;14~16日龄与2~12日龄比较,表达量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);20~35日龄与14~16日龄间Trib3表达量差异无统计学意义(P>0.05);40~65日龄与20~35日龄比较,表达量显著升高(P<0.05)。免疫组化结果可见Trib3主要表达于睾丸精原干细胞胞质部分及部分睾丸间质。结论Trib3基因可能参与了大鼠精原干细胞的增殖过程。

6天龄与10天龄大鼠的睾丸组织的基因差异表达

通过基因芯片技术,利用Roche-NimbleGen公司制作的大鼠12×135K全基因组表达谱芯片,对日龄为6d和10d的大鼠睾丸组织进行全基因组表达差异分析。结果显示:具有2倍以上的差异表达基因有4298个,其中表达上调的基因共1878个,表达下调的基因共2420个。这些差异表达的基因中有3154个基因具有基因本体注释,参与了154个生物学通路。进一步分析表明具有8倍以上差异表达的基因有13个,这些基因参与了生物学过程、细胞组分和分子功能等基因本体分类,进一步选择3个差异表达的基因,LOC686076、Cxcl6和Trib3,做了实时定量RT-PCR检测。其结果趋势与芯片数据一致。因此,我们初步认为精原干细胞的发生与增殖在大鼠早期的发育过程中已经有大量的基因参与,是一个多基因协调表达的过程。

生理学双语教学的实践与心得

为适应现代医学教育的发展,内蒙古医学院生理学专业开展了双语教学,根据学生的英语水平,因材施教,循序渐进,采用多媒体教学手段,生动直观。实践表明,不断总结经验,将会取得良好的教学效果。

免疫抑制因子对佐剂关节炎的影响

目的：研究免疫抑制因子对佐剂关节炎发病的影响。方法：检测对照组与实验组对正常小鼠淋巴细胞转化的影响。结果：脑室注射ＩＬ－１的关节炎大鼠在第０、７、１４、２８、３５ｄ的血清具有明显的抑制淋巴细胞转化的作用。关节炎症状加重，病程延长。结论：免疫抑制蛋白可能参与佐剂关节炎的发病，有可能是造成关节炎的原因之一。

绒山羊Scp3基因的克隆及睾丸中第一轮减数分裂的发生

联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,Scp3)是雄性生殖细胞减数分裂中联会复合体形成必需的组成部分,在哺乳动物生殖细胞减数分裂中具有重要功能。通过RT-PCR扩增和分子克隆的方法首次克隆到了绒山羊Scp3基因的编码区片段。测序结果表明,绒山羊与牛的Scp3基因编码序列同源率达到98%。根据测得的DNA序列,设计引物,用RT-PCR方法分析测定了青春前期绒山羊不同个体中睾丸组织的Scp3的转录表达。结果显示,雄性绒山羊青春前期睾丸发育存在个体差异,已分析的样品第一轮减数分裂发生的时间普遍为73天之后。这一结果为绒山羊的睾丸发育和精子发生过程的相关研究打下了基础。

双酚A对成年雄性小鼠的生殖毒性及其作用机制

目的:探讨双酚A(BPA)对成年小鼠睾丸组织的损伤作用,阐明BPA对动物机体的生殖毒性及其作用机制。方法:8周龄昆明小鼠40只随机分为对照组(玉米油)和低(100 mg·kg^(-1) BPA)、中(200mg·kg^(-1)BPA)、高(400mg·kg^(-1)BPA)剂量BPA组。灌胃染毒4周后,取小鼠睾丸组织,采用流式细胞术检测小鼠睾丸组织中细胞凋亡率;免疫组织化学法检测Fas和FADD蛋白表达情况。结果:与对照组比较,低剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率无明显变化(P>0.05);中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、Fas和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。与低剂量BPA组比较,中和高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05);与中剂量BPA组比较,高剂量BPA组小鼠睾丸组织中细胞凋亡率、FAS和FADD阳性细胞表达率明显升高(P<0.05)。中剂量BPA组细胞凋亡率与FAS、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.430,P<0.05;r=0.238,P<0.01),高剂量组细胞凋亡率与Fas、FADD阳性细胞表达率呈正相关关系(r=0.637,P<0.01;r=0.359,P<0.01)。结论:一定剂量BPA会导致小鼠睾丸组织中细胞凋亡率升高,凋亡调控基因Fas和FADD表达上调;BPA对小鼠睾丸组织有损伤作用,其生殖毒性与激活Fas死亡受体信号通路从而导致细胞过度凋亡有关。

多巴胺激动剂阿朴吗啡对东莨菪碱诱导小鼠学习记忆障碍的影响

目的:研究多巴胺(DA)对小鼠学习记忆障碍的影响及其机制。方法:实验1采用腹腔注射东莨菪碱0.3 mg/kg(SCOP 0.3,n=10)和3.0 mg/kg(SCOP 3.0),连续注射60 d,在第53天和60天用避暗法测定记忆行为,第60天处死动物后取脑用免疫组化的方法测定TH-ir和Fos-ir的表达。实验2根据实验1结果造小鼠记忆障碍的模型后将小鼠分成4组,1组腹腔注射生理盐水(NS),其他3组腹腔注射阿朴吗啡0.1 mg/kg(APO 0.1)、0.5 mg/kg(APO 0.5)和2.0 mg/kg(APO 2.0),每组10只动物,连续30 d。在注射阿朴吗啡第23天和30天测定避暗行为。第30天处死动物后取脑用免疫组化的方法测定Fos-ir和TH-ir的表达。结果:避暗法测定记忆发现东莨菪碱抑制小鼠的记忆。第60天,东莨菪碱3.0 mg/kg组(SCOP 3.0)的潜伏期比NS组显著缩短,仅是NS组的1/4(P>0.05),错误次数比NS组增加了大约4倍(P>0.05),SCOP 0.3组的潜伏期和错误次数与NS组没有明显差异。免疫组化结果表明在伏隔核和海马区的CA1和CA3的Fos-ir细胞数明显降低(P<0.01),且被盖腹侧区的酪氨酸羟化酶(TH-ir)和共表达TH/Fos-ir细胞显著减少(P<0.01)。注射阿朴吗啡后明显缓解了小鼠的记忆障碍,且腹侧被盖区TH-ir细胞增加(P<0.05)。结论:阿朴吗啡明显减轻东莨菪碱诱导的小鼠记忆障碍,是通过增强腹侧被盖区多巴胺神经元的活性来实现的。

MYL2基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达

目的:研究肌球蛋白调节性轻链(MYL2)基因在大鼠睾丸组织发育过程中的表达。方法:采用RT-PCR、免疫组化分别检测大鼠睾丸组织中MYL2基因的mRNA转录水平和蛋白的表达。结果:MYL2 mRNA表达在出生后第2天达到最高值,随后迅速下降至第8天,第10、12天缓慢升高,第14天下降,第15天稍有上升,第20、25天出现一个小高峰之后到第65天持续缓慢下降,呈现明显的日龄依赖性。免疫组化结果显示MYL2蛋白主要表达于睾丸组织精子细胞。结论:MYL2基因可能参与大鼠精原干细胞的增殖,同时可能参与精子细胞形成成熟精子过程。

雄激素受体在大鼠睾丸中转录模式的分析

目的:研究Ar(雄激素受体)基因在大鼠睾丸组织中的转录模式。方法:取刚出生的雄性Wistar大鼠,于出生2~65日的不同时间点,脊椎脱臼处死3只不同窝别的幼鼠,提取睾丸组织总mRNA;将mRNA反转录成cDNA,随后采用Real-time PCR方法检测大鼠睾丸组织中ArmRNA的转录情况。结果:ArmRNA表达在出生后第2天开始缓慢上升到第16天达到最高值,第16天到第30天迅速下降,第31天出现一个小高峰后到第65天持续缓慢下降。结论:Ar基因在大鼠早期发育睾丸组织中表达量逐渐升高,可能与精原干细胞的增殖及初级精母细胞的发生相关。

机能教学改革中培养学生的科研思维

为了适应机能实验教学改革,培养医学生分析问题、解决问题的能力,培养严谨的科学思维方法,初步摸索出通过科研训练提高学生兴趣和创新能力的办法。

生理学课堂参与式教学的实践

采用先进的教学理念,在生理学课堂教学中运用参与式教学法,进行积极的教学改革尝试,旨在充分激发学生学习生理学的热情和兴趣,增强学生学习的主观能动性,提高生理学教学效果。

机能学实验教学体会

目的机能学是医学教育的重要组成部分,有利于学生掌握科学的实验方法,培养学生的动手能力、创新意识和科研思维。那么,如何能够提高学生的实验兴趣,使学生发挥更大的主动性和积极性参与到机能实验教学中,我们的教学体会是,要从着重培养学生的创新能力、科研思维和实验技能、医学素养切入,使之尽快成为社会需求的高素质医学人才。

基因功能的研究方法

随着后基因组时代的到来,如何确定新基因的功能和已知基因的新功能已经成为了一个主要研究方向。现今的研究方法包括生物信息学预测、基因转导、反义技术等方法,而一些新技术的涌现,也为研究提供了新思路和新见解。

地塞米松促进大鼠血管钙化的实验研究

目的在大鼠血管钙化模型上,探讨地塞米松对血管钙化的影响。方法在维生素D3加尼古丁诱导制备的大鼠血管钙化模型上,给予地塞米松肌肉注射,制备血管钙化加骨质疏松复合模型,观察地塞米松对血管钙化的影响。Wistar大鼠共分为4组,即对照组、骨质疏松组、钙化组和钙化加骨质疏松组。8周后,进行主动脉钙含量测定、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及骨钙素(osteocalcin,OC)含量测定,判断血管钙化程度;用骨密度仪测定大鼠骨密度以反映骨质疏松程度。结果在钙化加骨质疏松组,其血管钙含量(183.39±7.22)nmol/(mg.pr)高于单独钙化组(111.72±8.58)nmol/(mg·pr)(P<0.01);钙化组腰椎骨密度(0.18±0.01)g/cm2低于正常对照组(0.20±0.006)g/cm2(P<0.01)。结论地塞米松所致的骨质疏松症可能会加重血管钙化;血管钙化也可能促进骨质疏松症的发生,其机制有待进一步探讨。

Ces5a基因在大鼠睾丸中的表达

目的:分析羧酸酯酶5a (Ces5a)基因在大鼠睾丸发育过程中的表达情况。方法:选取3组不同窝别出生后2、4、6、8、10、12、14、15、16、20、25、29、30、31、35、40、45、50、55、60、65 d 21个时间点的大鼠,采用RT-PCR、Western印迹、免疫组化、HE染色分别检测大鼠睾丸组织中Ces5a基因在mRNA转录水平和蛋白表达量及定位。结果:①Ces5a mRNA在大鼠出生后的第2~65天均有表达,大鼠出生后2~12 d Ces5a mRNA的表达量较低;与2~12 d相比,14~16 d的表达量下降至最低水平(P<0.05);与14~16 d相比,20~35 d该表达量有显著升高(P<0.05);与20~35 d相比,40~65 d的表达量有显著升高,达到高峰(P<0.05)。②Ces5a蛋白在大鼠出生后第2~65天均有表达,在大鼠出生后2~12 d Ces5a蛋白的表达量较低;与2~12 d相比,14~16 d Ces5a蛋白的表达量无显著变化(P>0.05);与14~16 d相比,20~35 d的表达量有显著升高(P<0.05);与20~35 d相比,40~65 d的表达量无显著变化(P>0.05)。③Ces5a蛋白表达于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。结论:①Ces5a基因可能参与了大鼠精原细胞增殖过程及减数分裂过程;②Ces5a基因可能在圆形精子发生和精子变形过程中发挥特殊的作用。

两种精原干细胞高效能纯化方法的比较研究

目的:比较贴壁分离法和免疫磁珠法纯化小鼠精原干细胞(mSSCs)的优缺点。方法:分别选取10只12-15日龄的雄性C57BL/6小鼠,颈椎脱臼法处死,摘取睾丸用酶消化法获得曲细精管单细胞悬液,分别用贴壁分离法和免疫磁珠法从单细胞悬液中分离纯化mSSCs,并针对两种方法在细胞数量、分离效率以及对细胞增殖生长的影响等方面进行比较。结果:两种纯化方法均可从小鼠曲细精管单细胞悬液中分离纯化得到干细胞,并可在体外培养后呈现出典型的精原干细胞特有的葡萄串状克隆,体外连续培养增殖超3个月。10只小鼠的睾丸经差异贴壁法纯化后可以得到3×10^(5)±0.4×10^(5)个mSSCs(n=5),细胞回收率(纯化后细胞数/曲细精管单细胞悬液细胞数)为1.5%±0.1%(n=5);经免疫磁珠法可以得到6×10^(5)±0.4×10^(5)个mSSCs(n=5),细胞回收率为3.0%±0.1%(n=5),免疫磁珠法得到的干细胞数量更高。差异贴壁法得到的干细胞更纯,因为体外培养5 d左右即得到干细胞集落,而免疫磁珠法得到的干细胞则约10 d才可以看到明显的细胞集落,但是两种纯化方法对细胞体外长期增殖生长没有明显的影响。结论:两种方法均可以纯化得到高质量的mSSCs,,但两种方法各有优缺点。差异贴壁法较免疫磁珠法经济、实用,无需购买专门的设备和抗体磁珠,但获得的细胞数量相对较低,用时也较长。

类风湿性关节炎与白细胞介素-1

类风湿性关节炎 (RA)是一种T细胞依赖性的种属特异性的免疫学介导的疾病 ,它的病因至今还不明确 ,本文从细胞因子的角度就有关白细胞介素 1 (IL 1 )与类风湿性关节炎的关系做一简要综述 ,大量关节炎动物模型中的结果提示IL 1可能是一种介导组织破坏的物质。

Agtr2基因在大鼠睾丸发育中转录表达的分析

目的研究分析血管紧张素Ⅱ2型受体(Agtr2)基因在大鼠睾丸发育中的转录模式。方法取刚出生的雄性Wistar大鼠,于出生2~65日的不同时间点,脊椎脱臼处死3只不同窝别的幼鼠,提取睾丸组织总mRNA;将mRNA反转录成cDNA,随后采用RT-PCR方法检测大鼠睾丸组织中Agtr2 mRNA的转录情况。结果Agtr2 mRNA表达在出生后表达量持续下降,与出生后第6日相比,出生后第8日Agtr2 mRNA表达量急剧降低,在第30日后检测不到其表达。结论Agtr2基因在大鼠睾丸组织早期发育的表达量最高,随后急剧降低,可能与精原干细胞的增殖与分化及初级精母细胞的发生相关。

基于雨课堂的混合教学模式在机能学实验教学中的应用

目的尝试将雨课堂这一新型智慧教学工具引入我校机能学实验教学中,摸索雨课堂在机能学实验教学中的实施方案,评价应用前景。方法在我校2017级蒙医学专业机能学实验中,使用雨课堂与传统教学相结合的混合教学模式。结果92.3%的学生认为雨课堂对机能学实验中理论知识的学习以及实验技术的学习有很好的帮助作用,94.8%的学生希望推广使用雨课堂。结论在机能学实验教学中,雨课堂与传统教学显示良好的互补性,混合教学取得了满意的教学效果,具有良好的推广前景。

应用CRISPR/Cas9技术敲除Trib3基因大鼠的基因型鉴定

目的:构建Trib3基因敲除大鼠模型及基因型鉴定。方法:靶向敲除大鼠Trib3基因后,通过基因测序和PCR技术对大鼠Trib3基因的第3号外显子删除情况进行检测与基因型鉴定。结果:得到阳性F0代首建大鼠Trib3^(-/+),通过自交得到F1与F2代大鼠,筛选出F2代Trib3^(-/-)大鼠。结论:成功制备Trib3基因敲除大鼠模型,依次鉴定出Trib3^(-/-)、Trib3^(-/+)和Trib3^(+/+)大鼠,并可以稳定遗传,为后续的实验开展提供理论依据。