LHCGR胞外结构域蛋白的生信分析、原核表达及纯化

目的为获得小鼠LHCGR胞外结构域蛋白(LHCGR-1),分析其结构及理化性质,为今后研究该蛋白功能及筛选与之相互作用的小分子化合物奠定基础。方法根据NCBI中小鼠LHCGR氨基酸序列合成目的基因Lhcgr-1,经生物信息学分析后,将该基因插入至表达载体pET-28a(+),并转化至BL21(DE3)感受态细胞中;经IPTG诱导,表达重组蛋白pET-28a-LHCGR-1,利用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,之后对该蛋白进行纯化,并通过分子对接技术预测该蛋白与LH、CG的相互作用。结果预测LHCGR-1蛋白分子量为40749.08,由367个氨基酸组成,等电点理论值为5.47;氨基酸序列中有29个丝氨酸位点、10个苏氨酸位点和5个酪氨酸位点;成功构建了表达载体pET-28a-LHCGR-1并获得纯化的目的蛋白;分子对接结果表明目的蛋白可以与LH、CG通过多种相互作用,形成稳定的复合物,有利于其发挥原有的生物学功能。结论成功构建了小鼠胞外结构域蛋白LHCGR-1在大肠杆菌内的原核表达体系并获得了纯化蛋白,分子对接预测该蛋白具有生物学功能,提示该蛋白可以用于后续研究。

不同道地产区黄芩的主要成分和抗氧化活性的比较研究

探究山东莱芜与河北承德两个道地产区黄芩的黄酮特征指纹图谱及其抗氧化能力的谱-效关系。在构建黄芩超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)指纹图谱的基础上,采用体外抗氧化法测定25批不同道地产区黄芩对DPPH、ABTS、O_(2)^(-)自由基的清除能力,计算其半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50));运用正交偏最小二乘判别(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)法和双变量相关性分析构建化学成分和抗氧化活性的谱-效关系。25批样品的指纹图谱相似度均大于0.983,确定了16个共有峰,采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱联用法(ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF-MS)确认了12个化合物。两个道地产区的黄芩均具有较强的清除DPPH、ABTS和O_(2)^(-)自由基能力,其中山东莱芜黄芩的抗氧化能力优于河北承德黄芩。OPLS-DA所建的两个模型,均可成功区分两个道地产区的黄芩,且黄芩苷、黄芩素和千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷是二者的差异性标志成分。谱效分析发现,黄芩药材中黄酮类成分相互间可能对DPPH、ABTS、O_(2)^(-)自由基的清除能力具有协同增效作用。本研究建立了基于化学成分和抗氧化活性的黄芩谱效评价模式,可用于不同道地产区黄芩品质的评价,可为中药材的道地性研究提供帮助。

硒化甘草多糖、甘草多糖及其联合抗生素对无乳链球菌体外抗菌活性及机制分析

【目的】分析硒化乌拉尔甘草多糖(selenium glycyrrhiza polysaccharide,SeGUP)、乌拉尔甘草多糖(glycymhiza polyacchiade,GUP)对无乳链球菌体外抗菌活性及机制,研究其联合的抗菌效果。【方法】通过药敏纸片筛选出对无乳链球菌敏感抗生素,采用最小二倍稀释法和棋盘法测得最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)、最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)和联合抑菌指数(FICI index,FICI);将无乳链球菌与120、60、30 mg/mL的SeGUP、GUP及抗生素分别等量混合后绘制细菌生长速率图;通过ELISA法检测细菌培养液中碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶活性、蛋白质含量及胞内DNA浓度,研究SeGUP、GUP及联合抗生素对细菌细胞膜、细胞壁及DNA的影响;采用结晶紫染色法检测SeGUP、GUP及联合抗生素对无乳链球菌生物被膜形成的影响。【结果】无乳链球菌对SeGUP 480 mg/mL、GUP 480 mg/mL均呈现中度敏感,抑菌圈直径为14.0、11.0 mm;无乳链球菌对盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考极敏;SeGUP和GUP分别对肺炎链球菌的MIC、MBC为120、240 mg/mL和240、480 mg/mL;SeGUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、0.75、1、0.5,SeGUP与盐酸卡那霉素之间关系为无关,与盐酸多西环素、头孢曲松钠之间为相加关系,与氟苯尼考间为协同关系,GUP与盐酸卡那霉素、盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考的FICI为1.5、1、1.5、0.75,GUP与盐酸卡那霉素、头孢曲松钠之间关系为无关,与盐酸多西环素、氟苯尼考间为相加关系;SeGUP、GUP明显抑制细菌的生长,其中SeGUP 120 mg/mL效果最强,SeGUP、GUP与盐酸多西环素、头孢曲松钠、氟苯尼考联合使用后增强了抑制效;SeGUP、GUP及联合抗生素使用后均能显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)、蛋白质含量(P<0.05),显著降低胞内DNA含量(P<0.05),显著抑制无乳链球菌生物被膜的形成(P<0.05)。【结论】SeGUP能够通过损伤细菌细胞壁、细胞膜完整性,影响DNA含量对无乳链球菌产生明显的抑制作用,且其抗菌活性优于GUP。SeGUP与抗生素联合使用后能够增强抗生素的抗菌活性,并且其作用效果强于单独使用SeGUP、GUP和抗生素。

益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究

【目的】探究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用。【方法】将60只6~8周龄雌性C57小鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组及地塞米松阳性对照组,每组10只。空白对照组经阴道灌注50μL PBS缓冲液,其余组经阴道灌注50μL LPS(1 mg/mL)建立小鼠子宫内膜炎疾病模型。造模后,益母草碱低、中、高剂量组分别腹腔注射7.5、15.0、30.0 mg/kg益母草碱,阳性对照组腹腔注射5.0 mg/kg地塞米松,每6 h 1次,连续3次。造模24 h后处死小鼠,测定各组小鼠子宫指数;通过HE染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子含量及髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性均极显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同剂量益母草碱能不同程度降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠的子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性(P<0.01),并呈剂量依赖性;与模型组相比,阳性对照组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性极显著降低(P<0.01)。【结论】益母草碱可降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠子宫指数、TNF-α、IL-1β、IL-6炎性因子含量及MPO活性,减轻炎症症状,显示出良好的抗炎效果。

硒化甘草多糖对免疫抑制小鼠免疫功能的影响

试验旨在探究硒化甘草多糖(SeGUP)对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。选取96只昆明小鼠,雌、雄各半,随机分为6组,每组16只小鼠,利用环磷酰胺(CY)给除空白组外小鼠构建免疫低下的模型,腹腔注射CY 80 mg/g,连续3 d。第4 d开始空白组、模型组小鼠每天腹腔注射0.3 mL生理盐水,阳性组腹腔注射200 mg/g黄芪多糖(APS)混悬液,SeGUP高、中、低剂量组小鼠腹腔注射100、200、300 mg/g SeGUP混悬液,连续7 d。结果显示,SeGUP高、中剂量组小鼠体重极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高、中剂量组小鼠碳粒廓清指数(K)、吞噬指数(α)极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高剂量组小鼠血清白细胞介素-2 (IL-2)含量极显著高于SeGUP中剂量组、阳性组(P<0.01),SeGUP中剂量组、阳性组小鼠血清IL-2含量极显著高于SeGUP低剂量组、空白组(P<0.01),SeGUP高、中剂量组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白M (IgM)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白G (IgG)含量极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。SeGUP高、中剂量组小鼠胸腺指数极显著高于SeGUP低剂量组(P<0.01)。研究表明,SeGUP可通过下调小鼠脾脏指数,上调体重、K、α、IL-2、TNF-α、IgM、IFN-γ、IgG、胸腺指数等指标,增强免疫抑制小鼠的免疫功能,其中200、300 mg/g的SeGUP效果较好。

硒化甘草多糖联合抗生素对奇异变形杆菌体内外抑菌效果以及抑菌机制研究

试验旨在探究硒化甘草多糖(SeGUP)和甘草多糖(GUP)联合抗生素对奇异变形杆菌(PM)的体内外抑菌效果以及抑菌机制。体内外抑菌效果通过药敏试验、最小抑菌浓度(MIC)、生长曲线、体外协同作用以及SeGUP、GUP对PM感染小鼠的死亡率进行分析。抑菌机制通过PM细胞壁、细胞膜、生物膜、抗氧化酶活性的变化进行分析。结果显示,同浓度SeGUP比GUP抑菌圈大,MIC值小,对PM生长抑制更强;SeGUP与环丙沙星(CI)联合表现为协同,GUP与CI表现为相加;SeGUP能够极显著降低PM感染小鼠死亡率(P<0.01)。与对照组相比,SeGUP、GUP、CI可极显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)的活性和蛋白含量(P<0.01),极显著降低菌体DNA含量,抑制生物膜形成,降低过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.01)。结果表明,SeGUP体内外抑菌效果以及抑菌机制能力均优于GUP。

中草药提取物对脂多糖诱导小鼠乳腺炎的调节作用

试验旨在探究中草药提取物(ZY)对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎的调节作用。选取72只产后3~5 d SPF级昆明雌鼠,随机选择12只为空白对照组(BC组),其余60只随机分为5组,即模型组(M组)、阳性对照组(Dex组)以及中草药提取物高(ZY-H组)、中(ZY-M组)、低(ZY-L组)剂量组,每组12只。除BC组外,其余各组小鼠对环境适应后进行乳腺炎造模。造模结束2 h后,ZY-H组、ZY-M组、ZY-L组小鼠分别给药16、8、4 mg/g中草药提取物,Dex组小鼠腹腔注射5 mg/kg地塞米松磷酸钠注射液,BC组及M组小鼠灌胃等体积的生理盐水。造模后连续处理7 d。结果显示,M组小鼠乳腺组织中乳腺腺泡及腺泡管结构遭到破坏并伴有炎性浸润。与BC组相比,M组病理组织学评分极显著升高(P<0.01),细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、髓过氧化物酶(MPO)含量极显著升高(P<0.01),过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)含量极显著降低(P<0.01)。与M组相比,Dex组及ZY各剂量组小鼠乳腺组织病理情况均有一定程度的恢复,病理组织学评分极显著降低(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、MPO含量极显著降低(P<0.01),PPAR-γ含量极显著升高(P<0.01)。研究表明,各剂量中草药提取物均对脂多糖诱导的小鼠乳腺炎有正向调节作用。

硒化甘草多糖对产志贺毒性大肠杆菌抑菌机制以及抗氧化作用探究

目的探究硒化甘草多糖(SeGUP)和甘草多糖(GUP)对产志贺毒性大肠杆菌(STEC)的体外抑菌机制和抗氧化效果。方法采用二倍稀释法检测SeGUP、GUP对STEC的半数抑制浓度(IC_(50)),测定各浓度的SeGUP、GUP对STEC生长曲线的影响;通过测定不同时间段培养液中AKP、β-半乳糖苷酶(β-gal)、蛋白质含量以及结晶紫染色探究SeGUP、GUP对STEC细胞壁、细胞膜、生物膜的影响。采用ELISA法检测清洁级昆明小鼠血清中SOD、CAT、MDA含量变化。结果SeGUP IC_(50)为55.58 mg·mL^(-1),GUP IC_(50)为69.85 mg·mL^(-1),150 mg·mL^(-1)SeGUP能完全抑制STEC生长,GUP在200 mg·mL^(-1)才能完全抑制STEC的增殖。SeGUP组同一时间的AKP活性、β-gal活性、蛋白质含量与GUP组比较,差异极显著,P<0.01;SeGUP组与GUP组比较能极显著降低STEC生物膜形成,P<0.01。抗氧化试验中,SeGUP组提高SOD、CAT含量以及降低MDA含量效果优于GUP组(P<0.01)。结论硒化修饰提高了GUP体外抑菌效果、破坏STEC膜结构和抗氧化能力。

中草药提取物对溃疡性结肠炎的调节作用

试验旨在探究中草药提取物对溃疡性结肠炎(UC)的调节作用及可能作用机制。试验选取60只SPF级昆明小鼠,雌、雄各半,随机分为6组,即空白对照组(BC)、模型组(Model)、阳性组(SASP)、中草药提取物高剂量组(ZY-H,16 mg/g)、中草药提取物中剂量组(ZY-M,8 mg/g)、中草药提取物低剂量组(ZY-L,4 mg/g),每组10只小鼠。造模成功后,各组小鼠给药10 d。结果显示,与BC组相比,Model组小鼠结肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-17(IL-17)、干扰素-γ(IFN-γ)、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量极显著升高(P<0.01),白细胞介素-10(IL-10)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性极显著降低(P<0.01)。与Model组相比,各药物处理组小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠组织病理学评分均极显著降低(P<0.01);ZY各剂量组及SASP组结肠细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-17、IFN-γ、MPO、MDA含量极显著降低(P<0.01),IL-10、PPAR-γ的含量及SOD、GSH-Px的活性极显著升高(P<0.01)。研究表明,各剂量中草药提取物均对改善小鼠UC模型症状以及结肠组织中炎性细胞因子和氧化应激产物具有正向调节作用。

“乳炎宁”水提物的抗炎作用研究

【目的】探究“乳炎宁”水提物的抗炎作用,为其临床运用及进一步研究提供理论依据。【方法】采用二甲苯致耳廓肿胀试验、醋酸致腹腔毛细血管通透性试验、角叉菜胶致足肿胀试验、棉球致肉芽肿胀试验及小鼠血清细胞因子含量检测进行“乳炎宁”水提物抗炎作用研究。取60只健康昆明小鼠,雌雄各半,随机分为5组,即阴性对照组(生理盐水组)、阳性对照组(阿司匹林组)、“乳炎宁”水提物低(4 mg/g)、中(8 mg/g)、高(16 mg/g)剂量组,12只/组。各组小鼠每天固定时间灌胃,每天1次,连续10 d。后续按照不同试验具体操作,试验结束后分别测量各组小鼠耳廓重量、腹腔洗液D_(590 nm)值、足重量、棉球肉芽肿重量及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)含量。【结果】二甲苯致耳廓肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组均可极显著降低二甲苯导致的耳廓肿胀(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物高剂量组耳廓重量差异不显著(P>0.05)。醋酸致腹腔毛细血管通透性试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对醋酸致腹腔毛细血管通透性升高均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组的毛细血管通透性差异显著或极显著(P<0.05;P<0.01)。角叉菜胶致足肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠足肿胀度均有极显著的抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物各剂量组足肿胀度均有极显著差异(P<0.01)。棉球致肉芽肿胀试验结果表明,与阴性对照组相比,药物处理组对小鼠棉球肉芽肿胀抑制均有极显著抑制作用(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物低、中剂量组差异极显著或显著(P<0.01;P<0.05),“乳炎宁”高剂量组与阳性对照组作用相当(P>0.05)。小鼠血清细胞因子检测实验结果表明,与阴性对照组相比,除“乳炎宁”水提物低剂量组外,药物处理组血清中TNF-α和IL-1β含量均有不同程度降低,“乳炎宁”水提物低剂量组血清中TNF-α含量差异不显著(P>0.05),血清中IL-1β含量显著降低(P<0.05),“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中IL-1β含量均极显著降低(P<0.01),中剂量组血清中TNF-α含量显著降低(P<0.05),高剂量组TNF-α含量极显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,“乳炎宁”水提物中、高剂量组血清中2种细胞因子均差异不显著(P>0.05),低剂量组血清中2种细胞因子均差异极显著(P<0.01)。【结论】“乳炎宁”水提物在小鼠上显示出了良好的抗炎效果。

几种炎症模型的小鼠造模方法研究进展

动物炎症性疾病在疾病中比例最大,无论是传染性疾病还是免疫性疾病在临床上都会有炎症的发生。为了更加深入的了解疾病发生发展的机制以及寻找更好的预防治疗途径,采用体内试验非常必要。小鼠模型因其经济便宜,饲养周期短,操作简单以及与人类基因、生理结构等方面的相似性而广泛运用。本文以此为背景,主要围绕肺炎模型、结肠炎模型以及乳房炎模型的小鼠造模方法研究进展展开综述,以期为后续研究提供便捷。

甘草酸对脂多糖应激黄羽肉仔鸡抗炎性能的影响

试验旨在研究甘草酸对黄羽肉仔鸡的抗炎能力。选取300只健康体重接近的1日龄黄羽肉仔鸡随机分为6个组,每组5个重复,分别为生理盐水组(空白对照)、脂多糖处理组(LPS组)、黄芪多糖+LPS组(APS+LPS)、高剂量甘草酸+LPS组(GA H+LPS)、中剂量GA+LPS组(GAM+LPS)和低剂量GA+LPS组(GAL+LPS)。APS+LPS组、GA H+LPS组、GAM+LPS组和GAL+LPS组于造模阶段及前后3d(即11~23d)分别饲喂添加APS400mg/kg体重、GA120mg/kg体重、GA100 mg/kg体重、GA80 mg/kg体重试验饲料,试验期49 d。每组分别于21、28、35、42、49日龄测定血清巨噬细胞吞噬能力和炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)指标。结果表明:与空白对照组比较,LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均显著升高(P<0.05),而IL-4含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,GAL+LPS组、GAM+LPS组、GA H+LPS组、APS+LPS组21、28、35、42、49日龄血清IL-1β、TNF-α、INF-γ含量均降低,差异有统计学意义(P<0.05),而IL-4含量均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。说明GA能有效缓解黄羽肉仔鸡对LPS刺激引起的炎性反应,从而发挥抗炎作用。

质量管理工具在医院餐饮外包服务监管中的应用

在医院后勤社会化改革逐渐深入背景下,医院餐饮外包服务质量如何保证是需要探讨的问题。某院成立餐饮质量持续改进(CQI)小组,利用质量管理工具,分析外包餐饮服务现状,找出影响餐饮服务满意率的主要原因和影响餐饮服务质量因素,采取完善制度,多维度监管,加强宣传和培训,改善设施设备,实施PDCA循环,结果餐饮满意率提高,餐厅员工服务能力提升,餐厅就餐人数增加,人均餐费下降。质量管理工具值得医院后勤保障管理中推广。

益母草碱对SD大鼠抗凝血因子的影响

为了研究不同剂量益母草碱对大鼠的抗凝血作用,筛选出抗凝血效果最佳的剂量,为进一步治疗血瘀引起的相关动物疾病提供理论依据,试验将50只SD大鼠[雌雄不限,体重(200±20)g]随机分为空白对照组、益母草碱低剂量组(15 mg/kg)、益母草碱中剂量组(30 mg/kg)、益母草碱高剂量组(60 mg/kg)和阳性对照组(丹参滴丸),每组10只,灌胃给药7 d,第8天腹主动脉采血,测定大鼠的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)和血栓调节蛋白(TM)含量等指标。结果表明:与空白对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),D-二聚体含量显著降低(P<0.05),血浆TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著下降(P<0.05),D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著降低(P<0.05),血浆中D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。与阳性对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),FIB含量显著升高(P<0.05),血浆TAT含量显著升高(P<0.05),血浆TM含量极显著升高(P<0.01);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),血浆TAT和TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),血浆D-二聚体含量显著降低(P<0.05),TAT和TM含量显著升高(P<0.05)。说明益母草碱在浓度为30 mg/kg和60 mg/kg时对大鼠有良好的抗凝血作用。

硒化乌拉尔甘草多糖和乌拉尔甘草多糖对单核细胞增生李斯特菌抗菌活性的研究

为了比较硒化乌拉尔甘草多糖(selenizing Glycyrrhiza uralensis polysaccharide,SeGUP)和乌拉尔甘草多糖(Glycymhiza uralensis polyacchiade,GUP)对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogene,Lm)体内、体外抗菌活性,试验采用药敏纸片方法分别测定Lm对480 mg/mL、240 mg/mL、120 mg/mL GUP和SeGUP的敏感程度;采用微量肉汤稀释法测定SeGUP和GUP对Lm的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);设置SeGUP和GUP高剂量(240 mg/mL)组、中剂量(120 mg/mL)组、低剂量(60 mg/mL)组,各组分别与Lm混合培养24 h,每2 h取样测定OD600值,观察SeGUP、GUP对Lm生长速率的影响;检测各组4小时时的培养上清液中的碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量;用结晶紫染色法检测SeGUP和GUP各剂量组对Lm生物被膜形成能力的影响;分别按体重灌胃小鼠SeGUP、GUP 300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg测定其对感染Lm小鼠的保护效果。结果表明:480 mg/mL SeGUP对Lm高度敏感,抑菌圈直径为15.0 mm;480 mg/mL GUP中度敏感,抑菌圈直径为13.0 mm。SeGUP和GUP对Lm的MIC分别为120 mg/mL、240 mg/mL,MBC分别为240 mg/mL、480 mg/mL。各剂量SeGUP和GUP均能抑制Lm的生长,其中240 mg/mL SeGUP抑制效果最好;与空白对照组相比,SeGUP和GUP各剂量组的AKP、β-半乳糖苷酶活性及蛋白质总含量均显著升高(P<0.05),各剂量组均能显著抑制生物被膜形成(P<0.05);与模型组相比,300 mg/kg、150 mg/kg、75 mg/kg SeGUP组和300 mg/kg、150 mg/kg GUP组小鼠死亡率均显著降低(P<0.05),75 mg/kg GUP组小鼠死亡率差异不显著(P>0.05);各SeGUP组小鼠死亡率低于相同浓度的GUP组。说明SeGUP、GUP对Lm生长有明显的抑制作用,相同浓度时SeGUP的效果更好,并且SeGUP浓度为240mg/mL时体外抗菌效果最好,按体重灌胃剂量为300 mg/kg时对小鼠的保护力最强。

中药复方水提物的抗氧化活性研究

为了研究中药复方水提物的抗氧化活性,试验选取90只健康昆明小鼠(雌雄各半)随机分为空白对照组(灌胃生理盐水)、阳性对照组(灌胃维生素E)和中药复方水提物低(灌胃中药复方水提物0.4 g/mL)、中(灌胃中药复方水提物0.8 g/mL)、高(灌胃中药复方水提物1.6 g/mL)剂量组,各组小鼠每天固定时间灌胃0.2 mL,每天1次,连续7 d,试验结束后测定各组血清生化指标、脏器指数、血清与肝脏抗氧化指标和免疫指标。结果表明:与空白对照组比较,中药复方水提物低、中、高剂量组小鼠血清胆固醇(CHOL)、高密度脂蛋白(HDL)、葡萄糖(GLU)含量差异不显著(P>0.05),中剂量组三酰甘油(TG)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)含量和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)活性显著降低(P<0.05),小鼠血清低密度脂蛋白(LDL)含量显著升高(P<0.05),天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性极显著降低(P<0.01);中药复方水提物低、中、高剂量组小鼠心脏指数、肝脏指数、脾脏指数、肾脏指数、胸腺指数差异不显著(P>0.05),但均呈上升趋势,中药复方水提物中、高剂量组肺脏指数显著提高(P<0.05);中药复方水提物组血清和肝脏组织过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)有所提高,丙二醛(MDA)含量有所降低,随着剂量增加效果也更加明显;中药复方水提物中剂量组血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、免疫球蛋白G(IgG)含量显著提高(P<0.05),IL-17、免疫球蛋白A(IgA)含量极显著提高(P<0.01),中药复方水提物中剂量组小鼠肝脏IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17含量差异不显著(P>0.05),IL-6含量显著降低(P<0.05)。说明中药复方水提物能够增强小白鼠的肝脏和肾脏功能,提高血清、肝脏抗氧化酶活性,降低MDA含量,能够调节血清免疫因子含量,从而提高机体免疫和抗氧化水平,0.8 g/mL的剂量效果较好。