大黄鞣质对肽聚糖诱导血小板凋亡的影响

[摘要]目的观察大黄鞣质（rhubarbtannins）对肽聚糖（peptidoglycan，PGN）诱导血小板凋亡的影响。方法健康人洗涤血小板用PGN，大黄鞣质单独或联合处理，分为对照组（C组），PGN组，低、中、高浓度大黄鞣质4-PGN组（LR＋PGN组、MR＋PGN组、HR＋PGN组）。流式细胞术检测血小板线粒体膜电位（△ψm）的改变和磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）外露程度，Western—blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶Caspase-3活化后裂解片段，促凋亡蛋白Bak和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。结果与C组比较，PGN组△ψm正常的血小板百分比下降；磷脂结合蛋白V（annexinV）阳性的血小板百分比显著上升；血小板Caspase-3活化后裂解片段和Bak表达有所增加；Bcl-2表达有所减少[（22．70±7．24）％vs．（55．80±2．01）％；（64．97±6．16）％vs．（18．57±4．20）％；0．97±0．06vs．0．46±0．07；1．21±0．07vs．0．89±0．05；0．61±0．09vs．0．89±0．06，P〈0．05]。与PGN组比较，MR＋PGN和HR＋PGN组△ψm正常的血小板百分比上升；磷脂结合蛋白V阳性的血小板百分比显著下降；血小板Caspase-3活化后裂解片段和Bak表达有所减少；Bcl-2表达有所增加[（45．20±3．15）％vs．（22．70±7．24）％；（54．00±4．83）％vs．（22．70±7．24）％（P〈0．05）；（43．17±4．18）％vs．（64．97±6．16）％；（27．23±4．06）％vs．（64．97±6．16）％，P〈0．01；0．75±0．07vs．0．97士0．06；0．59±0．09vs．0．97±0．06；0．83±0．06vs．1．21±0．07；0．65±0．08vs．1．21±0．07；0．81±0．04vs．0．61±0．09；0．89±0．05vs．0．61±0．09，P〈0．05]。结论PGN能诱导血小板凋亡，大黄鞣质对PGN诱导的血小板凋亡有抑制作用且在50—100mg／L范围内呈浓度依赖，其机制可能与升高△ψm，降低PS外露程度，抑制Caspase-3活化后裂解片段和Bak表达，增加Bcl-2表达有关。

脂多糖诱导体外血小板调亡的作用

目的研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导体外血小板凋亡的作用。方法取健康志愿者的新鲜静脉血,分离富血小板血浆(PRP),制备洗涤血小板;把洗涤血小板分为空白对照组、低浓度LPS组、中浓度LPS组、高浓度LPS组、极高浓度LPS组共5组,并加入相应终浓度LPS,各组于室温下孵育30 min;裂解液裂解血小板,并用Western blot检测促凋亡蛋白Bax、Bak和抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达情况;采用分析软件进行数据分析。结果低浓度、中浓度、高浓度、极高浓度LPS干预组较对照组促凋亡蛋白Bax、Bak和抗凋亡蛋白Bcl-xl表达明显增多(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论 LPS能够诱导体外血小板调亡,并呈现浓度依赖性。