基于小RNA深度测序技术首次发现侵染黄槿的杆状DNA病毒

0引言黄槿(Hibiscus tiliaceus L.)为锦葵科(Mal-vaceae)木槿属(Hibiscus)常绿乔木或灌木,广泛分布于台湾地区、福建、广西、广东等地,是一种具有重要生态和观赏价值的半红树植物[1]。同时黄槿具有清热解毒、散瘀消肿、止血镇痛抗炎等功效,具有潜在的药用价值[2]。关于黄槿上的植物病害鲜有研究,其上发生的病毒病害更是尚未见报道。RNA沉默是植物抵御病毒入侵的重要途径[3],小RNA深度测序(Small RNA Deep Sequencing)作为高通量测序技术的重要应用,可同时获得来源于病毒和宿主的小RNA序列,是研究RNA沉默机制的有效工具。

甘蔗杆状病毒P2蛋白核酸结合活性分析及关键结构域鉴定

甘蔗杆状病毒(sugarcane bacilliform virus,SCBV)是广泛分布于世界甘蔗种植区的严重危害甘蔗种植的植物病毒之一。研究SCBV编码的病毒蛋白功能对于了解该病毒致病机制及抗病育种具有重要意义。本实验室前期从云南勐海的一株Badila甘蔗中分离获得了SCBV的全长基因组序列,并开展了其开放阅读框2(open reading frame 2, ORF2)编码的未知蛋白P2的功能研究。通过原核表达SCBV P2蛋白并经体外核酸亲和结合试验分析,发现SCBV编码的P2蛋白能以序列非特异性方式与同源或异源核酸亲和结合。进一步对P2蛋白中预测的coiled-coil like domain及C-端保守的脯氨酸、赖氨酸富集区域进行缺失及点突变分析,以及凝胶阻滞试验发现,随着C-端逐步截短,P2突变体蛋白与核酸结合的活性也逐渐减弱,其C-端保守的含脯氨酸、赖氨酸的21个氨基酸(amino acids,aa)对P2蛋白与核酸结合是必需的。同时,在P2蛋白与核酸的相互作用中,coiled-coil like domain被证明是不可或缺的。进一步酵母双杂交实验证明P2蛋白能与自身互作,且P2 C-端保守的21个氨基酸及coiled-coil like domain的缺失或替换直接影响了P2蛋白的自身互作。综上所述,本研究发现SCBV编码的P2蛋白是一个序列非特异性的核酸结合蛋白,且coiled-coil like domain和C-端保守的富含脯氨酸、赖氨酸区域通过影响其自身互作而影响其核酸结合活性。研究结果为进一步深入研究P2蛋白功能奠定了基础。

WB条带重复使用检测HIV抗体的探索

〔目的〕在确保检测质量的前提下,探索蛋白印迹(WB)确认实验阴性对照和阴性样本条带重复使用的可能性,以降低使用HIV抗体确认试剂的成本。〔方法〕严格按照《全国艾滋病检测技术规范》(2004年版)的要求和Genelabs公司生产的HIV1+2型(HIVBLOT2.2)抗体免疫印迹试剂盒提供的使用说明进行试验。用新试剂和已使用过的阴性对照和阴性样本的WB条带分别对8份阴性样本、12份卫生部艾滋病参比实验室提供的HIV抗体阳性样本和20份HIV抗体阳性样本进行HIV抗体确认试验,用该试剂盒提供的弱阳性质控样品对试验样本进行5次重复比对实验。〔结果〕使用过的WB条带与未使用过的WB条带进行HIV抗体确认试验,结果是一致的。〔结论〕该方法一旦在全国近200家HIV抗体确认实验室推广使用,假设每个实验室每周进行1次确认实验,每年将可以为国家节约HIV抗体确认试剂费近200万元人民币。

云南口岸2007年出境劳务人员传染病监测结果分析

目的了解云南国际旅行卫生保健中心出境劳务人员传染病的感染情况,为口岸传染病预防和监测提供科学依据。方法对云南国际旅行卫生保健中心2007年出境劳务人员传染病检测资斜进行整理和分析。结果在1525名出境劳务人员中检出乙肝、丙肝、梅毒及相关指标异常131例,总检出率8.59%,其中HBsAg检出率6.69%,HCV检出率0.98%,梅毒检出率为0.92%。男性明显高于女性,人群分布以工人感染较高,30～49岁年龄组占半数以上。结论通过了解传染病的感染现状,必须加强出境劳务人员传染病的监测工作,合理规范劳务输出和制定有效防治措施。