骨组织工程支架材料的研究进展及临床应用

背景:骨组织工程研究的中心环节是研制能够作为细胞移植与引导新骨生长的支架材料,以作为细胞外基质的替代物。目的:总结骨组织工程支架材料的研究进展,并展望其发展趋势。方法:由第一作者检索1995-01-12/2011-01PubMed数据、中国知网数据库及维普数据库有关人工合成材料及天然支架材料相关文献。英文检索词为"bone tissue engineering,scaffold material,DBM,chitosan,HA,β-TCP";中文检索词为:"骨组织工程,支架材料,细胞外基质,脱钙骨基质,壳聚糖,羟基磷灰石,β-磷酸三钙"。根据纳入标准排除重复性研究,保留30篇文献进行归纳总结。结果及结论:支架材料是构建组织工程骨的主体,行使细胞外基质的功能,包括为组织细胞的修复活动提供适宜的微环境,抵挡来自周围组织的压力,用于承重部位暂时行使部分功能等。目前人工合成材料和天然材料各有优缺点,人工合成材料现存问题主要在于材料的细胞黏附率低,难以完全降解,致畸性和致癌性有待明确;天然材料则需要更好地解决材料的抗原性和机械性能的关系,降解速度的调控问题。充分了解现有材料的特点为寻找新方法及新材料提供理论依据。

颈总动脉高位分叉伴颈外动脉分支多处变异一例

在解剖一成年女性尸体时，见其左侧颈总动脉高位分叉,伴颈外动脉分支多处异常,而右侧正常.现分述如下. 1颈总动脉高位分叉 据国人资料，颈总动脉分又部位最高不超过下颌角平面，最低可达甲状软骨上缘平面，多在舌骨大角和甲状软骨上缘平面之间，约占74％。而本例中，颈总动脉沿气管及喉外侧上行，直到下颌角上方6．52mm，距颧弓上缘向下70．00mm处，才分为颈内动脉和颈外动脉，分又处明显高于正常情况。

缓释阿仑膦酸钠对新骨形成的影响

目的探讨阿仑膦酸钠(ALN)对体内成骨的影响。方法选择3月龄SD大鼠20只,在每个颅骨上制备4个极限全层骨缺损,分别填入纳米羟基磷灰石(HA,A组),纳米羟基磷灰石-阿仑膦酸钠(HA-ALN),依据ALN质量比例分为B组(1mg/g)、C组(2mg/g)、D组(4mg/g)。术后2周、4周、8周和12周各随机处死5只。切取颅骨做大体观察,X线检测及组织学观察,比较两组缺损修复情况。实验数据采用SPSS13.0进行独立样本t检验。结果术后2周,实验组和对照组差异无统计学意义(P>0.05),术后4周两组差异有统计学意义(P<0.05),实验组优于对照组,术后8周和12周组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 nHA-ALN在体内促进骨缺损修复效果优于nHA,以2mg/g组效果最显著。

不同质量浓度阿仑膦酸钠对大鼠颅骨修复的影响

目的探讨不同质量浓度阿仑膦酸钠(AL)对大鼠颅骨修复的影响。方法健康3月龄SD大鼠20只,每只大鼠颅骨制备四个极限全层骨缺损,缺损之间留出2～3 mm距离,分别做充填含AL 0 mg/g(A组)、1 mg/g(B组)、2 mg/g(C组)和4mg/g(D组)的纳米羟基磷灰石-阿仑膦酸钠复合材料(nHA-AL)的处理。术后第2、4、8、12周各随机处死5只大鼠,完整切取颅骨,采用大体标本观察、X线片分析及组织学观察的方法,比较各组的缺损修复情况,用SPSS 13.0对数据进行析因方差分析。结果实验发现,C组数据均优于其他各组,通过X线片分析和组织学观察发现组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 AL对骨组织再生有促进作用,且促进作用随比例改变而改变,适当比例的nHA-AL有望制备成为骨支架材料,应用于临床。

维甲酸诱导大鼠骨质疏松模型的制作

目的:建立维甲酸诱导雌性大鼠骨质疏松模型。方法:20只4月龄雌性Wistar大鼠随机均分为2组:对照组和实验组,分别给予维甲酸(70mg/kg/次)和生理盐水灌胃4周,末次给药后测量血清Ca、P、雌二醇(E2)、碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)含量,双能X线骨密度仪活体测量腰椎、胫骨以及股骨密度,动物处死后取胫骨行组织学观察。结果:停药后血清学指标测定,实验组血清Ca、P与对照组比较差异无显著性,血清E2明显低于对照组(P<0.01),血清ALP、TRAP明显高于对照组(P<0.01)。腰椎、胫骨及股骨密度检测显示实验组骨密度明显低于对照组(P<0.05),组织学观察亦支持骨密度测量结果。结论:根据血清学指标、骨密度检测及组织学观察结果,表明维甲酸诱导大鼠骨质疏松模型制作成功。

尼古丁对不同表面处理种植体骨结合的影响

背景:研究证实尼古丁会影响成骨细胞、破骨细胞、成纤维细胞和红细胞的活性。目的:检测尼古丁对表面喷砂或酸蚀处理种植体植入后骨结合及骨保护素、骨形成蛋白2表达的影响。方法:将24只SD大鼠随机均分为实验组和对照组,实验组大鼠每天2次背部皮下注射2 mg/kg尼古丁,对照组对应皮下注射等量生理盐水。2周后在两组大鼠胫骨近干骺端分别植入表面喷砂或酸蚀处理的钛种植体,实验组继续皮下注射尼古丁,对照组注射生理盐水。种植后第2,4周对种植体及其周围骨组织行CT、X射线、荧光定量PCR及苏木精-伊红染色观察。结果与结论:与对照组相比,实验组骨结合程度及骨保护素和骨形成蛋白2表达明显下降(P<0.05)。在尼古丁作用下,表面喷砂处理种植体组骨保护素和骨形成蛋白2表达、表面酸蚀处理种植体组骨保护素表达均随时间变化明显下调(P<0.05),并且表面酸蚀处理种植体组植入2周时骨形成蛋白2表达高于表面喷砂处理种植体组(P<0.05);X射线与CT结果提示,尼古丁干预对表面酸蚀处理种植体周围新生骨形成量和新生骨矿化程度的影响明显小于表面喷砂处理种植体。苏木精-伊红染色显示,两种种植体周围成骨细胞的数量与活性随时间变化均降低,但表面酸蚀处理种植体组效果好于表面喷砂处理种植体组。

CYP19、COMT基因多态性与子宫内膜异位症的相关性

目的:探讨芳香化酶(cytochrome P450 19,CYP19)基因的240A/G位点以及儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)基因的1947G/A位点的等位基因突变与山东省滨州地区汉族妇女子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)发病的相关性。方法:应用高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术对80例EMs患者(EMs组)和40例同期行妇科手术并经术后病理排除EMs的患者(对照组)的CYP19基因240A/G位点以及COMT基因1947G/A位点进行分析,并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术加以佐证。结果:两组均存在CYP19 240A/G和COMT 1947G/A位点的多态性。EMs组CYP19 240A/G各基因型及等位基因分布频率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中等位基因G突变可使EMs发病风险增加2.809倍,携带AG和GG基因型的妇女EMs发病风险增加了4.529倍。EMs组COMT 1947G/A位点各基因型及等位基因分布频率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);携带A等位基因突变的基因型(GA+AA)频率与野生型(GG)比较,差异无统计学意义(P>0.05),携带A等位基因的基因型(GA+AA)并不增加EMs发病风险。结论:滨州地区汉族妇女CYP19基因240A/G等位基因突变增加了EMs的发病风险,COMT基因1947G/A位点多态性与EMs发病风险无相关性。

阳极氧化种植体植入早期骨组织细胞趋化因子受体4的表达

背景:与传统种植体相比,阳极氧化种植体植入早期即可达到种植稳定,其相关的分子生物学机制并不明确。目的:分析细胞趋化因子受体4在阳极氧化种植体植入早期表达的意义。方法:选取4月龄Wistar大鼠40只,随机分为种植体植入6,12,24h组及空白对照组。将阳极氧化和喷砂两种表面特性的种植体分别植入实验组所有大鼠左右侧胫骨。植入6,12,24h后处死各实验组大鼠,旋出种植体,截取种植体周围直径约2cm骨组织,对照组截取胫骨近骺端直径约2cm骨组织。将各实验组一半骨组织制备蛋白样品,用Westernblot免疫印迹分析细胞趋化因子受体4蛋白,以β-actin作为内参。另一半骨组织进行中性EDTA脱钙、切片,进行细胞趋化因子受体4蛋白免疫组织化学检测。将24h组取出的种植体行扫描电镜观察。结果与结论:Westernblot结果显示,种植体植入24h内,实验组种植体周围骨组织细胞趋化因子受体4蛋白表达量均高于空白对照组。同一时间点,阳极氧化种植体周围骨组织细胞趋化因子受体4表达量均高于表面喷砂种植体周围骨组织。免疫组织化学结果支持上述结果。扫描电镜可见,阳极氧化种植体较喷砂种植体表面黏附较多的间叶样细胞。提示阳极氧化种植体诱导机体骨组织细胞趋化因子受体4高表达,可能促使种植体达到早期稳定。

不同浓度尼古丁对种植体骨愈合的影响

目的:探讨不同浓度的尼古丁干预,对种植体周围骨组织的愈合情况和骨保护素(OPG)及骨形成蛋白2(BMP-2)表达情况的影响。方法:选取24只3月龄SD大鼠,雌雄不限,随机数表法分为实验组和对照组,尔后分别采用不同浓度(2mg/kg、0.2mg/kg、0.02mg/kg)的尼古丁和等量生理盐水干预,每天2次背部皮下注射。2周后,大鼠左右胫骨近骺端均植入表面喷砂蚀刻处理的钛合金种植体,并继续施加干预因素。种植后第2、4周分别行X线、CT、电镜观察和qRT-PCR检测。采用SPSS17.0软件对数据进行单因素方差分析(One-Way ANOVA test),组内比较行t检验。结果:X线灰度值显示,除高浓度尼古丁组(HDN)与对照组存在差异(P<0.05)外,各组组间差异不明显。CT-BMD值观察,在高浓度或长期尼古丁刺激下种植体周围骨组织矿化程度明显低于对照组,且实验各组差异明显(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,2周时随着尼古丁干预浓度的增加,种植体周围基因表达量逐渐降低,且与对照组差异明显(P<0.05),仅低尼古丁浓度(LDN)组与对照组中的BMP-2的表达无明显差异(1/0.93±0.17,P>0.05);实验第4周,各尼古丁组的基因表达量均出现下调(P<0.05)。扫描电镜(SEM)观察发现,随着尼古丁浓度和干预时间的增加,骨小梁结构发生改建障碍,多呈纤维骨或编织骨,骨基质分布不均匀且纤维结构排列紊乱无定向。结论:尼古丁对种植体周围骨愈合的抑制作用可能与其下调相关骨活性基因的表达关系密切,且抑制作用受尼古丁干预时间和浓度的影响明显。

PCR-RFLP及HRM技术研究CYP19、COMT基因多态性与子宫内膜异位症和子宫腺肌病的关系

目的探讨CYP19 240A/G、COMT 1947G/A位点基因多态性与滨州地区汉族妇女子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)及子宫腺肌病(adenomyosis,AM)发病的关系。方法应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性(PCR-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术和高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术分别检测EMs、AM患者和对照组CYP19 240A/G、COMT 1947G/A位点基因多态性与EMs及AM发病的关系。结果CYP19240A/G位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组、AM组和对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),其中等位基因G突变EMs、AM发病风险增加,携带AG和GG基因型的患者EMs、AM发病风险增加。COMT 1947G/A位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组、AM组和对照组相比无统计学差异(P>0.05),携带A等位基因突变的基因型GA+AA分别与野生型GG相比无统计学差异(P>0.05),不能增加EMs及AM的发病风险。结论滨州地区汉族妇女CYP19 240A/G基因多态性增加EMs和AM发病风险,COMT 1947G/A基因多态性与EMs和AM发病风险无关。

CYP19,COMT等位基因突变与子宫内膜异位症和子宫腺肌病的相关性研究

目的探讨山东省滨州地区汉族妇女CYP19基因240A/G,COMT基因1947G/A位点单核苷酸多态性(SNP)与子宫内膜异位症(EMs)和子宫腺肌病(AM)发病的关系。方法收集2011年9月至2012年3月于本院妇产科行盆、腹腔手术,并经术后组织病理学检查证实为EMs和AM者80例为研究对象,并将其分别纳入EMs组(n=30)和AM组(n=50),选取同期于本院行盆、腹腔手术并经肉眼及术后组织病理学检查排除EMs和AM者38例纳入对照组。采集其晨空腹外周静脉血(3～4)mL,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测2者基因多态性与EMs和AM发病的关系(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象的知情同意)。结果 CYP19240A/G位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组,AM组和对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中等位基因G突变可使EMs发病风险增加2.463倍,AM发病风险增加2.705倍,携带AG和GG基因型妇女的EMs发病风险增加4.444倍,AM发病风险增加3.939倍。COMT1947G/A位点各基因型及等位基因分布频率在EMs组,AM组和对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),携带A等位基因突变的基因型GA+AA分别与野生型GG比较,差异无统计学意义(P>0.05),携带A等位基因的基因型(GA+AA)不能增加EMs和AM发病风险。结论滨州地区汉族妇女CYP19基因240A/G等位基因突变,可增加EMs和AM发病风险,而COMT基因1947G/A等位基因突变与EMs和AM发病风险无相关性。

外阴血管肌纤维母细胞瘤合并错构瘤1例

患者女性，59岁，因“发现双侧外阴肿物6’年”于2011-10-12入本院。病史采集：6＋年前无诱因出现双侧外阴肿物，直径约为0．5cm，无红肿、疼痛，未接受治疗。1月前右侧外阴肿物体积明显增大，无疼痛，行走运动时有不适感，故于本院就诊。3年前自然绝经，既往有人工终止妊娠术史2次。