增强Mel 18基因表达抑制U937细胞生长

目的研究Mel18基因在急性白血病细胞株U937的表达情况及其对U937细胞生长的影响。方法RT-PCR方法检测Mel18在U937细胞中的表达。用亚克隆技术构建真核表达质粒pLenti6/V5-Mel18,脂质体转染法将重组质粒pLenti6/V5-Mel18和对照质粒pLenti6/V5-LacZ分别导入U937细胞,以RT-PCR法和流式细胞仪检测U937细胞转染后Mel18的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖活性。结果U937细胞中未检测到Mel18的表达。成功构建了Mel18的正义真核表达质粒pLenti6/V5-Mel18,并将其成功导入U937细胞。pLenti6/V5-Mel18质粒转染U937细胞24h后,流式检测Mel18蛋白的阳性表达率为(23.75±2.32)%。相对于亲代细胞,转染pLenti6/V5-Mel18组与转染pLenti6/V5-LacZ组的24h增殖活性分别为(70.86±1.08)%和(95.89±1.26)%,48h增殖活性为(46.93±1.12)%和(95.43±1.63)%,差异均有极显著性意义(P<0.01)。结论U937细胞不表达Mel18基因,上调Mel18的表达能明显抑制U937细胞的生长。

反式桂皮醛诱导K562细胞分化的机制研究

目的探讨反式桂皮醛(TCA)对慢性髓细胞白血病细胞K562的诱导分化作用及其机制。方法以低浓度TCA(60μmol/L)作用于体外培养的K562细胞,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡率和细胞表面抗原表达,Real-time PCR技术检测K562细胞bcr-abl融合基因转录水平,免疫印迹法检测K562细胞的CrkL和p38MAPK磷酸化水平。结果低浓度TCA作用后,K562细胞表面单核细胞分化抗原CD11b和CD14表达明显增加,细胞阻滞于G2/M期。随TCA作用时间延长,K562细胞凋亡增加。K562细胞分化过程中,bcr-abl基因转录水平明显下降,CrkL蛋白磷酸化明显受抑,p38MAPK磷酸化水平增加。结论低浓度TCA诱导K562细胞向单核细胞分化,分化的K562细胞易于凋亡。低浓度TCA诱导K562细胞分化与细胞周期受阻、bcr-abl融合基因表达和功能受抑及p38MAPK活化有关。

抑制mel18表达增强桂皮醛诱导的HL60细胞分化

目的:研究下调mel18基因表达对桂皮醛(CA)诱导HL60细胞分化的影响。方法:用低浓度CA和反式维甲酸(ATRA)处理HL60细胞。用shRNAmel18质粒及对照质粒shRNALuc包装慢病毒,用病毒感染HL60细胞。低浓度CA和ATRA作用于病毒感染的HL60细胞,流式细胞术检测细胞周期和细胞表面分化抗原表达,Western blot法检测MEL18蛋白、cyclin D1、p27的表达和Akt的磷酸化水平。结果:低浓度CA和ATRA增加HL60细胞的粒细胞分化抗原CD11b表达,MEL18蛋白表达下降。shmel18病毒感染的HL60细胞(shmel18-HL60细胞)MEL18蛋白表达下降,而对照病毒感染的HL60细胞(sh Luc-HL60细胞)MEL18蛋白表达无明显变化。shmel18-HL60细胞的CD11b表达率明显增高,细胞阻滞于G1期;经低浓度CA处理后,shmel18-HL60细胞的CD11b表达率进一步增高。shmel18-HL60细胞Akt的磷酸化水平及cyclin D1表达明显下降,而p27表达则显著升高。结论:抑制mel18基因表达导致HL60细胞向成熟粒细胞方向分化,mel18基因可能通过PI3K/Akt信号途径调控cyclin D1和p27的表达,影响HL60细胞分化。而CA可能通过抑制mel18基因表达从而通过PI3K/Akt途径促进HL60细胞分化。

herg1基因与肿瘤

herg1(human ether-a-go-go-related gene)基因是电压门控钾离子通道成员,其编码的HERG1钾通道选择性表达于多种组织来源的肿瘤细胞系及原代肿瘤细胞,调节肿瘤细胞增殖、分化、凋亡,与肿瘤的侵袭力和化疗敏感性密切相关。这为肿瘤的诊断、预后评估和肿瘤靶向治疗提供了一个新的特异性分子标志。

herg1基因调控慢性髓细胞白血病细胞的增殖和细胞周期

目的:研究herg1基因在慢性髓细胞白血病(CML)细胞的表达及其对CML细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法:应用RT-PCR方法测定33例初治慢性髓细胞白血病患者和10例健康志愿者的骨髓细胞herg1基因的表达,检测特异性抑制剂处理后CML细胞株K562增殖凋亡和细胞周期的变化。结果:①在初发CML病例中,herg1mRNA的表达率是72.7%(24/33),高于正常对照(20%)(P<0.01)。CML加速期和急变期的herg1mRNA的表达率分别为75%和90.9%,高于正常对照(P<0.01),但是herg1的表达与CML的临床分期并无相关性(P>0.05)。②E-4031(1μmol/L)可呈时间依赖性抑制细胞增殖,不诱导明显凋亡。③E-4031阻滞K562细胞周期于G1期。结论:CML细胞herg1基因表达失调,IHERG抑制剂E-4031对K562细胞的增殖和细胞周期具有调控作用,herg1基因可能与CML发病机制相关。

Toll样受体在U937细胞的表达及其作用研究

本研究探讨急性髓系白血病的免疫治疗中以Toll样受体(TLRs)为靶点的可能性,研究人急性髓系白血病U937细胞TLR的表达及TLR8受体激动剂ssRNA40/LyoVec对其增殖、凋亡和细胞周期的影响。运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测U937细胞TLR1-9mRNA的表达,用流式细胞术检测TLR8的表达。用不同浓度的TLR8激动剂ssRNA40/LyoVec作用于体外培养的U937细胞后,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明:U937细胞表达TLR1-9,TLR8激动剂ssRNA40/LyoVec作用于U937细胞明显地抑制了U937细胞生长,抑制率可达70%,且呈明显的量效关系;作用后处于G0/G1期细胞比例由(44.67±1.05)%增高到(54.08±1.19)%,但凋亡细胞的比例无明显变化。结论:TLR1-9可在U937细胞中表达,TLR8激动剂ssRNA40/LyoVec具有抗肿瘤细胞增殖的作用,使细胞阻滞在G0/G1期,但无明显的促凋亡作用。

再生障碍性贫血患者NK和CIK细胞与疗效的关系

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血NK细胞及CIK细胞与疗效的关系。方法应用流式细胞仪检测51例AA患者[急性AA(AAA)30例,慢性AA(CAA)21例]治疗前后与40例健康对照组NK细胞、CIK细胞的表达。结果 (1)AA患者外周血CD4^+、CD4^+/CD8^+、NK细胞的比例显著低于对照组(P<0.05),CD8^+、CIK细胞的比例显著高于对照组(P<0.05),AAA组与CAA组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。(2)疗效好的患者NK细胞比值升高,CIK细胞比值无明显下降。结论 AA患者存在多种免疫异常,多种因素参与AA的发病机制。检测免疫细胞将有助于评估AA的病情及疗效。

表达人CD4分子的逆转录病毒基因转移体系的建立

目的构建表达人CD4(hCD4)分子pLXIN-hCD4载体的基因转移体系,使hCD4分子在小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615中长久、稳定地表达。方法将目的基因hCD4亚克隆到真核细胞表达载体pLXIN上,构建重组质粒pLXIN-hCD4。将该质粒用PloyFect脂质体转染到PT67包装细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒感染体外培养的小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615。收集筛选后的细胞(L615-hCD4),以抗CD4单抗标记后用流式细胞术(FCM)检测其细胞膜hCD4分子的表达情况。PI-FCM法检测L615细胞和L615-hCD4细胞的细胞周期。结果菌落PCR鉴定及酶切鉴定显示hCD4基因成功地插入pLXIN载体中;hCD4分子可在L615-hCD4细胞膜表面稳定表达,而野生型L615细胞膜表面无hCD4分子表达。L615-hCD4与野生型L615的细胞周期比较无差异。结论成功构建了能在真核细胞上表达hCD4分子的重组质粒pLXIN-hCD4。L615-hCD4细胞能长期稳定表达hCD4分子,其细胞周期无改变。

钾离子通道——一个治疗癌症的新靶点

细胞膜上的离子通道是离子进出细胞的必经之路,对细胞功能的调节具有十分重要的作用。钾离子(K+)通道是膜蛋白的一种,最近的研究显示K+通道调控肿瘤细胞的增殖和存活,抑制和调控K+通道可遏制癌细胞的增殖。目前尚没有将K+通道抑制药用于临床试验,但K+通道作为癌症治疗的潜在靶点已初具端倪。

CCL23/骨髓抑制因子1(MPIF-1)对于U937细胞的增殖、凋亡和分化的影响

CCL23/MPIF-1是人类趋化因子CC家族的一员,在血细胞中仅在单核细胞源的树突状细胞中持续表达,在体内和体外实验中对人、鼠的髓系祖细胞的增殖和分化均有明显的抑制作用。最近的研究发现,CCL23在儿童急性髓系白血病骨髓和外周血样本均有高表达。为了了解CCL23的高表达在白血病进展、治疗和预后中的意义,选用白血病细胞系U937细胞作为研究对象,加入人类重组CCL23培养72小时,用CCK-8试剂盒测细胞增殖,FITC-AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,并观察不同处理条件下细胞分化情况及CCL23受体CCR1的表达水平。结果发现:单独的CCL23对于U937细胞的增殖、凋亡和分化无明显作用(P>0.05);但在U937受PMA诱导分化的过程中,CCL23有明显的促分化作用,同时发现此过程中CCR1表达显著升高(P<0.05)。结论:CCL23对U937细胞无明显抑制作用,但可能与PMA产生协同诱导分化作用,而且该作用的出现可能与CCL23受体CCR1表达升高有关。

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及hTERT的表达并诱导凋亡(英文)

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol·L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果 TSA对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡显示,600 nmol·L-1TSA作用48 h后,细胞凋亡率为42·6%。600 nmol·L-1TSA作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降到1·95 ±0·25、1·73 ±0·12和1·52 ±0·09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论 TSA抑制HL-60细胞中端粒酶活性,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。

以纯红细胞再生障碍性贫血为首发表现的原发骨髓B细胞淋巴瘤2例

例1.女,34岁,2017年5月29日因头晕、乏力就诊。既往史:有地中海贫血病史。2013年、2015年行2次剖宫产手术。体格检查:重度贫血貌,浅表淋巴结未触及肿大,胸骨无压痛,肝脾肋下未触及肿大。辅助检查:2017年5月29日血常规:WBC4.4×109·L-1,Hb 48 g/L,MCV 81.3fL,PLT 272×109·L-1。2017年5月29日网织红细胞计数:IRF 1.6%,MFR 1.60%,RET 0.00×106/μL,RET%0.25%。

毛囊黏蛋白病并发急性单核细胞白血病1例并文献复习

目的:探讨毛囊黏蛋白病的临床表现、分型及病理特征。方法:应用常规病理方法观察1例毛囊黏蛋白病,并进行相关文献复习。结果:患者以全身多发皮下结节为临床表现,病理示表皮未见明显异常,皮乳头层下毛囊、皮脂腺、汗腺、血管周围、胶原间见淡灰蓝色黏蛋白沉积,血管周围少量淋巴组织细胞浸润、阿新蓝染色(pH2.5)强阳性。皮疹出现6个月后患者出现全身淋巴结肿大并血常规异常,骨髓涂片、骨髓免疫分型及淋巴结活检诊断急性单核细胞白血病。诊断符合毛囊黏蛋白病并发急性单核细胞白血病。结论:毛囊黏蛋白病是临床少见病,具有特殊病理特点,并发急性单核细胞白血病更是罕见,国内目前未见相关报道。

一种替代Scott变压器的Scott T电路

文章详细地介绍了一种能替代Scott变压器的Scott T实用电路,同时还介绍了同步机和旋变的工作原理。

双特异性单链抗体BiTE的研究进展

癌症是严重威胁人类生存的重大疾病。BiTE(bispecific T-cell engager)所代表的一类具有显著抗肿瘤效应的双特异抗体,能够靶向性激活自身T细胞杀伤肿瘤细胞。BiTE由两个单链可变片段(scFv)组成,通过柔性融合接头串联连接。一个scFv识别T细胞表面蛋白CD3ε,而另一个scFv识别特异性肿瘤细胞表面抗原。BiTE的这种结构和特异性结合蛋白能力允许它将T细胞物理性地桥接肿瘤细胞而形成T细胞-BiTE-肿瘤细胞复合物,诱导免疫突触形成,刺激T细胞活化,产生杀伤肿瘤的细胞因子。近年来,BiTE在抗肿瘤研究中取得了显著进展,在临床上取得了理想的治疗效果。因此,对BiTE的结构、作用机制、临床应用以及创新性运用进行阐述。

小鼠CD62L^-/CD62L^+ T细胞体外对抗原刺激的增殖反应

本研究旨在观察CD62L-/CD62L+T细胞应答抗原的能力,了解CD62L分子在移植物抗宿主病(GVHD)中的作用。用DC细胞呈递特异性抗原hCD4刺激T细胞,流式细胞术检测其表面CD62L分子表达;对分选获得的CD62L-/CD62L+两群T细胞再次给予新的抗原(EL4细胞冻融抗原)刺激,用流式细胞术检测CD62L-及CD62L+T细胞在前后两次受到不同抗原刺激后的活化增殖能力。结果显示:T细胞表面CD62L+分子在受到抗原刺激后表达下调,CD62L+细胞由69.34%降至36.75%,相应的CD62L-T细胞由30.04%升至63.15%。比较第1天及第7天在高CFSE荧光值区(M1)的细胞数表明,在特异性抗原(hCD4)的刺激下,CD62L+T细胞平均百分比值分别为(87.88±1.08)%,(86.88±1.46)%(p>0.05);CD62L-T的测得值分别为(84.52±2.73)%(84.71±2.33)%(p>0.05)。两群细胞数在第7天与第1天相比均未出现明显增殖;在非特异性抗原刺激下,CD62L+T细胞在第1天和第6天于M1区的细胞数平均百分比值分别为(76.49±2.41)%,(22.25±3.29)(p<0.001);CD62L-T测得值分别为(77.35±3.82)%,(74.76±3.90)%(p>0,05)。此结果说明CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞群则没有出现类似的情况。结论:通过体外方法获得了CD62L-CD62L+T细胞,这两类细胞在特异性抗原刺激下未发生增殖反应,但在非特异性抗原刺激下CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞无此反应。此结果表明CD62L+T细胞在GVHD发生中有着重要作用,同时也为临床上通过体外方法获得CD62L-T细胞而选择性地去除移植物中CD62L+T细胞以减少GVHD的发生提供了思路。

WISp39基因对U937细胞增殖、凋亡和周期的影响

为了探讨一种新发现的p21调控蛋白WISp39对白血病细胞的增殖、凋亡和周期的影响,构建了WISp39的真核表达质粒pLenti6/V5-WISp39,并导入了人髓系白血病细胞系U937细胞,转染后用定量PCR检测了WISp39表达的变化,用CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡和周期的变化。结果显示:pLen-ti6/V5-WISp39转染48小时后,实验组中WISp39mRNA表达上升了(5.5±1.2)倍,同时U937细胞的增殖明显受到抑制,抑制率为37.6%;进一步的分析表明,在实验时间内,WISp39表达的升高不能明显诱导U937细胞的凋亡,但G0/G1期细胞比例由(40.59±0.7)%上升到(49.79±1.1)%。结论:WISp39对于U937无明显的诱导凋亡作用,但通过对细胞周期的影响,使停滞在G/G期的细胞增多,从而抑制了U937增殖。

携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察

目的:构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒(r VVDD-BiTE. FAP),并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用。方法:利用同源重组技术将PF17R启动子调控的Bi TE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)基因的v SC20亲本病毒TK基因处,经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒r VVDD-BiTE. FAP。采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒v SC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力;采用MTS法检测重组溶瘤病毒r VVDD-BiTE. FAP和r VVDD-GFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果,并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果,采用ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。结果:通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得r VVDD-BiTE. FAP重组溶瘤痘病毒。r VVDD-BiTE. FAP与亲本病毒具有同等复制能力;小鼠T细胞能够增强r VVDD-BiTE. FAP抗肿瘤效果。结论:r VVDD-BiTE. FAP具有高效抗肿瘤活性。

痘苗生长因子和胸苷激酶双基因缺失表达双荧光溶瘤痘病毒的构建及其对胰腺癌细胞的杀伤作用

目的:构建痘苗生长因子(vaccinia growth factor,VGF)和胸苷激酶(thymidine kinase,TK)双基因缺失同时表达绿色荧光蛋白(GFP)和DsRed双荧光的溶瘤痘病毒,并研究其对胰腺癌细胞的杀伤作用。方法:在病毒TK基因处利用同源重组方法将病毒晚期启动子F17R调控的GFP基因和早晚期启动子SEL调控的DsRed基因克隆入缺失VGF基因的VSC20亲本病毒,构建同时缺失VGF和TK双基因的重组溶瘤痘病毒vv DD-GFP-DsRed。同时利用CCK-8法和结晶紫染色法检测该病毒对胰腺癌细胞Patu8988和Bx PC-3的杀伤作用。结果:通过同源重组和软琼脂筛选获得vv DD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒。CCK-8法结果显示,与MOI=0相比,MOI分别为1,10时,vv DD-GFP-DsRed对Patu8988细胞和Bx PC-3细胞具有明显的杀伤作用,且在此范围内随MOI值增加杀伤效果逐渐增强(P均<0.05)。与MOI=0相比,Patu8988细胞在MOI为0.01时存活率低(P<0.05),且在结晶紫染色法测定中形成了明显的空斑。结论:成功构建vv DD-GFP-DsRed重组溶瘤痘病毒,其对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用。