干扰ALDH1A1表达的shRNA载体成功转染宫颈癌HeLa细胞及意义

目的:采用shRNA转染构建干扰乙醛脱氢酶-1(ALDH1A1)表达的宫颈癌HeLa细胞,以进一步探讨ALDH1A1与宫颈癌细胞的生物学特性之间的关系。方法:体外培养宫颈癌HeLa细胞,加入梯度浓度G418溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取对数生长期细胞,采用Lipofectamine 2000脂质体将4种干扰重组质粒(ALDH1A1-1719、ALDH1A1-574、ALDH1A1-740、ALDH1A1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照质粒(shNC)转染宫颈癌HeLa细胞。5种重组质粒与Lipofectamine 2000脂质体的比例均为0.2μg:1μL,空白对照组中仅加入Lipofectamine2000脂质体。6 h后换液,24 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。结果:确定G418的最佳筛选浓度为400 mg/L;5种重组质粒均成功转染入HeLa细胞中。其中ALDH1A1-1719的转染效率为4.67%;ALDH1A1-574的转染效率为1.16%;ALDH1A1-740的转染效率为12.45%;ALDH1A1-921的转染效率为3.42%;shNC组的转染效率为1.02%。结论:干扰ALDH1A1表达的shRNA载体转染宫颈腺癌HeLa细胞成功可行且效果好。

采用慢病毒载体干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株的构建及意义

目的:采用干扰乙醛脱氢酶1(ALDH-1)表达的慢病毒载体转染宫颈癌Hela细胞,构建干扰ALDH-1表达的稳转株,以利进一步探讨干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株的生物学特性。方法:体外培养宫颈癌Hela细胞,加入梯度浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,确定最佳筛选浓度;取24孔板中对数生长的宫颈癌Hela细胞,吸弃旧培养液,加入400μL新培养基,分别加入4种干扰慢病毒液(ALDH-1、ALDH1-1719、ALDH1-740、ALDH1-921,其中有一种具最佳干扰效果)及1种阴性对照慢病毒液(LV3-NC),同时均加入Polybrene液。其中5种慢病毒液的加入量均为50μL(滴度均为1×108TU/mL),Polybrene的加入量为0.5μL(浓度为5 mg/L);24 h后换新鲜培养液,72 h后荧光显微镜下观察荧光表达情况。然后采用最佳筛选浓度的嘌呤霉素溶液进行筛选,以获得稳定转染的干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞株。结果:确定嘌呤霉素的最佳筛选浓度为0.9 mg/L;5种慢病毒载体均成功转染入宫颈癌Hela细胞中,经嘌呤霉素筛选2周后成功获得稳定转染细胞株。结论:干扰ALDH-1表达的宫颈癌Hela细胞稳转株成功构建。

p62基因对黑素瘤A375细胞生物学特性的影响

目的研究p62基因在黑素瘤A375细胞生长增殖及细胞周期调控等方面的作用。方法取对数生长期的A375细胞,用干扰p62基因表达的siRNA慢病毒载体转染细胞;MTT法检测转染及正常A375细胞的平均OD值;流式细胞术检测两组的细胞周期分布。结果转染组的平均OD值较正常组小(P<0.05);转染组的G0/G1期比例(0.73±0.01)较正常组(0.64±0.02)高(P=0.002);转染组的凋亡率(0.10±0.02)较正常组(0.03±0.01)高(P=0.004)。结论干扰p62表达后,细胞周期阻滞于G0/G1期,p62在维持细胞周期和肿瘤细胞凋亡中起着重要的作用。

SiCw/SiCp质量比对Al2O3/ZrO2/SiC复合陶瓷力学性能的影响

本文以Al_2O_3、3Y-ZrO_2、SiCw(碳化硅晶须)和SiCp(碳化硅颗粒)为原料,MgO为添加剂,氮气气氛中1530℃热压烧结1 h,制备了Al_2O_3/ZrO_2/SiC复合陶瓷,研究了二次球磨时间及SiCw/SiCp的质量比对Al_2O_3/ZrO_2/SiC复合陶瓷力学性能的影响。结果表明,随着二次球磨时间的增加,复合材料的抗弯强度测量值分散性变小,当二次球磨时间为10 h时,抗弯强度测量值趋于稳定。随着SiCw/SiCp质量比的增加,复合陶瓷的维氏硬度、抗弯强度和断裂韧性呈现出先增加后减小的趋势。当SiCw/SiCp的质量比为25/0时,维氏硬度和抗弯强度达到最大值,分别为19.9±0.1 GPa,和1314±51 MPa。当SiCw/SiCp的质量比为12.5/12.5时,断裂韧性达到最大值,为14.9±0.7 MPa·m^(1/2)。Al_2O_3/ZrO_2/SiC复合陶瓷力学性能的提高归因于SiCw在基体中的均匀分散,ZrO_2晶粒的相变增韧及SiCw的拔出、裂纹桥接多种机制的协同强韧化作用。

针药合用通过调控TGF-β1信号通路促进肾虚型排卵障碍大鼠卵巢颗粒细胞形态的恢复

目的探索针药合用促进肾虚型排卵障碍大鼠卵巢颗粒细胞形态恢复的具体机制。方法利用羟基脲灌胃方法构建肾虚型排卵障碍大鼠动物模型,对模型组大鼠分别给予针刺(取穴气海、关元、双侧三阴交)+中药(补肾健脾方水煎剂)(针药合用组)、中药+假针(中药组)、针刺+安慰剂中药(针刺组)、假针+安慰剂中药(空白对照组)处理。取各组大鼠新鲜的卵巢组织,利用实时荧光定量PCR和Western blot技术分别检测其余各组大鼠卵巢新鲜组织中的转化生长因子-β1(TGF-β1)、smad3以及smad7的mRNA和蛋白表达情况。结果3个实验组的TGF-β1、smad3的mRNA和蛋白水平均较空白对照组明显降低,而smad7的mRNA和蛋白水平均较空白对照组明显升高。同时,针药合用组的TGF-β1、smad3的mRNA和蛋白水平较中药组、针刺组及空白对照组均明显降低,而smad7的mRNA和蛋白水平较中药组、针刺组及空白对照组均明显升高。结论针药合用通过抑制TGF-β1信号通路的活化进而促进肾虚型排卵障碍大鼠卵巢颗粒细胞形态的恢复。

Si3N4/BN复合陶瓷热导率及其有限元分析

采用热压烧结法制备了不同BN含量的Si3N4/BN复合陶瓷。分别采用X射线衍射仪、扫描电镜和激光导热仪对Si3N4/BN复合陶瓷物相组成、显微结构和热导率进行表征。结果发现,复合陶瓷的主要物相组成为β-Si3N4和h-BN相,陶瓷晶粒呈现垂直于热压方向的定向排列,晶粒尺寸随着BN含量的增加逐渐减小,而垂直和平行于热压方向的热导率都随BN添加量的增加先降低后升高。当c-BN加入量为30%时,垂直于热压方向的导系数仍达到75.1 W·K-1·m-1,与纯Si3N4陶瓷的热导率相近(76.9 W·K-1·m-1),通过有限元法对各向异性系统中的BN晶粒大小对复合陶瓷瞬态热传导的影响进行计算模拟,发现BN晶粒尺寸的减小降低了Si3N4/BN复合陶瓷的各方向热导率。而样品垂直于热压方向的热导率曲线的上升是因为h-BN的c轴方向热导率高于Si3N4;样品平行于热压方向热导率的逐渐递增可能归因于晶粒的细化导致定向排列的减弱。

特异性干扰ALDH-1表达的子宫颈癌细胞系HeLa细胞的构建及鉴定

乙醛脱氢酶1（ALDH-1）是细胞内乙醛氧化的解毒酶。短发夹状RNA（shRNA）以慢病毒为载体转染人宿主细胞后，可以整合到宿主DNA上发挥稳定持久的干扰效果。

国际妇产科联盟2012宫颈癌诊治指南解读

国际妇产科联盟（FIGO）指南是一个面向全世界的指南，适用于发达和不发达国家。FIGO推荐的治疗方法和美国国立综合癌症网络（NCCN）指南原则相同、但通常要求较低。比如在ⅠB1期之前，FIGO推荐的手术范围一般比NCCN推荐的手术范围要小。淋巴结切除只推荐切除盆腔淋巴结、没有推荐主动脉旁淋巴结切除或取样，尽管在准确评估疾病范围中有提到。保留生育功能的指征只推荐到ⅠA2期，没有推荐到ⅠB1期。没有推荐ⅡB期以上采用手术分期。复发患者的治疗中没有提到术中放疗，因术中放疗需要昂贵的设备。

改良Piver Ⅲ型子宫切除术的临床报告

目的 探索宫颈癌Piver Ⅲ型子宫切除术的手术范围,改进其手术技巧,以降低术后泌尿道并发症,缩短手术时间,减少手术出血量、输血量.方法 2000年6月至2005年5月,196例Ⅰ b期及Ⅱ a期宫颈癌患者,按改良的Piver Ⅲ型子宫切除术进行手术,为研究组;1994年6月至1999年5月,176例Ⅰ b期及Ⅱ a期宫颈癌患者,按常规的Piver Ⅲ型子宫切除术进行手术,为对照组.手术范围及手术技巧的改良主要包括用电刀协助分离阴道膀胱间隙;用电刀切断宫骶韧带的1/2;分离、贯穿输尿管隧道,断扎宫颈膀胱韧带前叶,同时断扎子宫动脉,保留子宫动脉输尿管支;用S状拉钩将输尿管拉向外侧,扩张膀胱侧窝,暴露主韧带,切除主韧带的3/4,保留该韧带后部部分组织;断扎阴道旁组织2 cm;切断阴道2～3 cm.结果 研究组患者术后膀胱功能障碍发生率为23.0%（45/196）,对照组为51.1%（90/176）,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;研究组泌尿道感染率为8.2%（16/196）,显著低于对照组[16.5%（29/176）],两组比较,差异有统计学意义（P=0.014）.研究组的手术时间、术中出血量和人均输血量分别为（132±20）min、（322±100）ml、（154±79）ml,均较对照组减少,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.研究组与对照组患者的5年生存率分别为87.8%（172/196）及88.6%（156/176）,两组比较,差异无统计学意义（P=0.793）.结论 改良的Piver Ⅲ型子宫切除术手术范围及手术技巧的改进是有效的、可行的.

Ⅰ型子宫切除术用于ⅠA期子宫颈癌的可行性研究

目的 比较子宫颈癌ⅠA期采用Ⅰ型和Ⅱ型子宫切除术的疗效及并发症,探索Ⅰ型子宫切除术用于ⅠA期子宫颈癌的可行性.方法 对92例子宫颈癌患者（48例ⅠA1期,44例ⅠA2期）行Ⅰ型子宫切除术加选择性盆腔淋巴结切除（研究组）,对93例子宫颈癌患者（49例ⅠA1期,44例ⅠA2期）行Ⅱ型子宫切除术加选择性盆腔淋巴结切除（对照组）.结果 研究组5年和10年生存率分别为100 ％（92/92）、100％（74/74）,对照组分别为100 ％（93/93）、100％（66/66）.研究组泌尿道感染率为0（0/92）,低于对照组的13.99％（13/93）（P＜0.05）.研究组的手术时间、出血量和人均输血量分别为（96.14±17.20）min、（117.35±39.61）ml和0 ml,均较对照组[（116.82±16.30）min、（201.74±46.25） ml、（82.07±16.32） ml]减少,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 子宫颈癌ⅠA期患者采用Ⅰ型和Ⅱ型子宫切除术的5年和10年生存率相当,但前者术后泌尿道感染率低于后者,且手术时间缩短,出血量和输血量均减少,其用于ⅠA期子宫颈癌是有效的、可行的.

Piver Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型子宫切除术后经阴道引流的可行性研究

目的比较PiverⅠ、Ⅱ、Ⅲ型子宫切除术(有的加一侧或双侧附件切除术)后经阴道引流与经腹壁引流的效果与并发症,探讨子宫切除术后经阴道引流的可行性。方法对2002年至2013年收治的共420例行广泛或筋膜外子宫切除术(有的加一侧或双侧附件切除术)患者随机采用经阴道引流(研究组)或经腹壁引流(对照组),比较研究组与对照组的手术时间、术后发热率、引流口愈合、淋巴囊肿发生情况及白细胞数和中性粒细胞比例等指标。结果Ⅱ/Ⅲ型子宫切除术研究组较对照组平均手术时间短,总引流量多,差异均有统计学意义(P均<0.05);研究组术后发热率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组Ⅱ/Ⅲ型子宫切除术后淋巴囊肿发生率较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组术后2 d白细胞数及中性粒细胞比例偏高均较对照组低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论经阴道硅胶T型引流管较经腹壁引流可以缩短手术时间,可以充分引流出盆腔渗出液,减少术后感染、发热及淋巴囊肿的发生率,降低术后白细胞数及中性粒细胞比例。因而子宫切除术后经阴道引流是有效的、可行的,值得推广。

子宫颈癌腹主动脉旁淋巴结阳性及其临床意义

子宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，而淋巴道转移是宫颈癌的主要转移途径。传统的手术方式是广泛性子宫切除加上盆腔淋巴结清扫。但子宫颈癌不但有盆腔淋巴结播散的倾向，而且有腹主动脉旁淋巴结播散的倾向，有必要同时切除腹主动脉旁淋巴结。