四逆散药理作用研究进展及质量标志物(Q-marker)预测分析

四逆散由炙甘草、柴胡、白芍、枳实组成,具有透邪解郁、疏肝理脾的功效。现代药理学研究表明该药具有抗抑郁、保肝、治疗功能性消化不良、改善动脉硬化、镇静催眠及抗溃疡等药理作用。本文在对四逆散药理作用的研究进展进行总结的基础上,依据中药质量标志物(qualitymarker,Q-marker)的“五原则”对四逆散的Q-marker进行预测分析。结果提示甘草苷、甘草素、甘草次酸、甘草酸、山柰酚、槲皮素、柚皮苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷、芍药内酯苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林可考虑作为四逆散的Q-marker,以期为四逆散质量控制研究提供参考。

简单节杆菌AS 1.94^＊生物转化17α-甲基睾丸素C1,2-脱氢制备美雄酮

以17α-甲基睾丸素为底物,利用简单节杆菌(Arthrobacter simplex)AS 1．94*生物催化其C1,2-脱氢获得17α-去氢甲基睾丸素,即美雄酮。发现生长培养基的组成对转化结果有较大的影响;pH 6．47～7．30有利于产物的积累;以较高的底物浓度(12g/L发酵液体积)投料时加入亲水性有机溶剂二甲亚砜,在转化结束后,能使发酵液中出现较大的产物结晶,并使最终转化率达70％以上。产物与未转化的底物经吉拉德试剂分离纯化后,产物质量符合BP98 版标准。

简单节杆菌AS1.94*细胞对有机溶剂的耐受性

以糖代谢活力保留值R(%)为指标,研究简单节杆菌细胞在15种logPoct不同的有机溶剂中的耐受性。发现游离简单节杆菌细胞和固定化简单节杆菌细胞糖代谢活力保留值与溶剂logPoct值大致都呈"S"型曲线关系。考察了微生物的生长时期、摇床转速、摇床温度、水相介质等对游离简单节杆菌细胞有机溶剂耐受性的影响,结果发现,不同生长时期、摇床转速、摇床温度对简单节杆菌的有机溶剂耐受性有很大的影响,而采用不同的水相介质简单节杆菌的糖代谢活力保留值R(%)没有明显的差别。

响应面试验设计优化脱氢酶发酵培养基

目的:对简单节杆菌TCCC11037发酵生产脱氢酶的培养基进行优化。方法:利用单因子试验筛选出最适碳源为葡萄糖,氮源为酵母膏。采用Plackett-Burman(P-B)方法筛选出对产酶有重要影响的因素,并采用响应面试验设计(RSM)对重要因素进行优化。结果:葡萄糖、酵母膏、KH2PO4的浓度是影响脱氢酶产生的重要因素。优化后的培养基组成为(%):葡萄糖1.21,酵母膏0.65,KH2PO40.24,玉米浆0.8;培养基初始pH值7.0,接种量5%,通气条件为装液量100mL/500mL。结论:优化后脱氢酶活力达到24.57μmol/(g·min),得到了明显的提高。

雷斯青霉转化左旋乙基甾烯双酮15α-羟基化反应工艺研究

对雷斯青霉(Penicillium raistrickii)微生物转化左旋乙基甾烯双酮15α-羟基化反应的培养基组成和转化条件进行优化.结果表明:优化后最佳培养基组分为葡萄糖30,g/L,玉米浆20,g/L,NaNO3 2,g/L,KH2PO4 1,g/L,K2HPO42,g/L,MgSO4 0.5,g/L,FeSO4 0.02,g/L,KCl 0.5,g/L;最适转化条件为接种量10%,初始pH7.5,摇瓶装量50 mL,转化温度28,℃,投料量0.2%,投料时间30,h,转化时间60,h,底物添加方式为底物超声粉碎后加4%甲醇和1.5%吐温80溶解.在此条件下,摇瓶转化率可达70%以上.

17α-甲基睾丸素C1,2位高效生物脱氢菌种的选育

为利用简单节杆菌生物催化17α-甲基睾丸素C1,2位脱氢制备去氢甲基睾丸素,采用N+离子注入与Cs137-γ射线辐照两种方法进行菌种诱变,选育适宜于17α-甲基睾丸素C12,位脱氢的高转化菌株.结果表明,从16株简单节杆菌筛选出的TCCC11042,依次经N+离子注入与Cs137-γ射线辐照处理,通过甲基睾丸素为底物的摇瓶筛选,选育得到正变株F2-20,该菌株对17α-甲基睾丸素脱氢转化率达到60.8%,比出发菌株TCCC11042的转化率提高了12.8%.经群体传代方式考察,诱变株具有良好的遗传稳定性.

β-环糊精对化合物RSA的增溶研究

化合物17 α-羟基孕甾4-烯-3,20-二酮-21-醋酸酯(RSA)和β-环糊精(β-CD)经超声波处理15 min,在28℃,120 r／min振荡处理12 h,形成包结物。β—CD-RSA包结物的紫外吸收特征与化合物RSA一致。在水溶液中,β—CD与化合物RSA的包结物,化学平衡常数K,的 RSD为2．84％,较为稳定,推测在水溶液中β-CD与化合物RSA以1:1(摩尔比)形成包结物。红外光谱分析推测出在水溶液中β—CD与化合物RSA的包结方式。β—CD与化合物RSA摩尔比为1:1形成的β—CD—RSA包结物,在28℃水溶液中的溶解度为9．12 mg／L,比化合物 RSA饱和溶液的溶解度增大了5．26倍。

促溶剂对生物催化甲基睾丸素C_(1.2)位脱氢的影响

研究促溶剂在简单节杆菌(Arthrobacter simplexAS 1.94)催化甲基睾丸素C1.2位脱氢过程中对甾体转化结果的影响。在简单节杆菌催化甲基睾丸素C1.2位脱氢过程中加入不同的亲水性有机溶剂,以甲基睾丸素的转化率为指标,选择最适的亲水性有机溶剂并确定其最佳的添加量,同时研究不同的促溶剂配比对转化的影响。结果发酵液中单一的添加4%的甲醇时底物甲基睾丸素的转化率可达80%,添加1‰的Tween-80可使转化率达到46%,两者作为混合促溶剂同时加入,对转化率的提高更明显,达到81%。因此选用4%的甲醇和0.1‰的Tween-80作为混合促溶剂对整个生物转化过程有良好的促进作用。

培养条件对赭曲霉菌球形成和坎利酮11α羟基化的影响

菌丝粗壮、分布均匀的菌球可提高赭曲霉11α羟基化的效率。控制赭曲霉菌球直径的平均大小可以通过选择不同的培养温度、装液量、以及转速等因素而达到。通过正交分析，确定培养温度为30℃，按孢子悬液浓度为10。个／mL接种，装液量为50mL／250mL三角瓶，摇床转速为200r／min时，菌球达到最佳直径2～3rnrn之间的百分比最大。在此条件下，以10g/L的坎利酮投料，最终转化率高达91．26％。

黑曲霉胞外β-葡萄糖苷酶的纯化及酶学性质的研究

利用硫酸铵盐析、Superdex 200凝胶柱层析等步骤,从黑曲霉发酵液中纯化得到两种β–葡萄糖苷酶蛋白,其相对分子质量分别为1.15×105和7.0×104左右,比活力分别为62.1,U/mg（相对分子质量约为1.15×10^5）和53.0,U/mg（相对分子质量约为7.0×10^4）,纯化倍数分别为1.54和1.31,回收率分别为19.6%,和19.1%,β–葡萄糖苷酶最适水解p H为4.6,最适反应温度为50~55,℃.在p H 4.2~4.8、温度40~60,℃下均能保持稳定.Mn2＋、Mg2＋和K＋对β–葡萄糖苷酶有不同程度的激活作用,而Ca^2＋、Fe^3＋、Zn^2＋、Cu^2＋和Fe^2＋会抑制β–葡萄糖苷酶的酶活,Na＋和Ba2＋对β–葡萄糖苷酶活力影响不明显.以p NPG为底物时,该酶的Km和vmax分别为2.33,mmol/L与3.14,mmol/（L·min）.

HPLC法测定闽派黄酒主要功能成分

闽派黄酒除了具备一般酒饮料的营养成分外,还具有一定的保健功能,适量饮用,有益健康。采用高效液相色谱法(HPLC)对市售的几种低端闽派黄酒的糖类(功能性低聚糖)、洛伐他汀及桔霉素进行检测分析,结果表明,闽派黄酒中总糖含量符合标准,同时还含有一定量的功能性低聚糖,不含洛伐他汀及桔霉素。

羊毛脂微生物转化法制备胆固醇

以羊毛脂为底物筛选到一株能将羊毛脂转化为胆固醇的菌株,将其应用于微生物转化法制备胆固醇,并对发酵条件进行了优化。结果表明,在pH值为7.6、发酵温度为30℃、发酵时间为110h、麦芽糖浓度为90g·L-1、羊毛脂浓度为80g·L-1的最佳发酵条件下,胆固醇的产量达到516mg·mL-1。

分枝杆菌Mycobacterium sp．M1甾酮C_(1,2)位脱氢酶活性的研究

分枝杆菌Mycobacteriumsp．M1可以有效降解大豆甾醇侧链得到雄甾4-烯-3,17-二酮 (AD)和雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)。通过该菌株细胞和细胞裂解液对底物AD的转化,表明了该菌株中存在甾酮C1．2位脱氢酶。利用酶活测定中活力高的细胞裂解液可以有效地降解大豆甾醇生成ADD。

适合SDS-PAGE分析的黑根霉菌丝蛋白质提取方法

为制备适合SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的黑根霉菌丝蛋白样品,采用不同的提取方法对黑根霉的菌丝进行蛋白质提取。结果表明:黑根霉菌丝经低温冷冻过夜后,直接用0.2 mol/L NaOH处理10 min,再加入上样缓冲液沸水浴,这一方法能快速、方便、有效的提取蛋白质。利用该方法比较了黑根霉与黑根霉甲苯耐受菌菌丝蛋白组成上的差异。

基于4种皂苷的定量分析评价干燥方式对菊叶薯蓣有效成分的影响

目的建立HPLC-ELSD法同时测定菊叶薯蓣中4种皂苷的含量,评价干燥方式对菊叶薯蓣有效成分的影响。方法采用HPLC-ELSD的方法同时测定菊叶薯蓣鲜品及不同干燥方式所获得的干品中原薯蓣皂苷、伪原薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷的含量。结果结果表明菊叶薯蓣中4种皂苷的含量在不同干燥方式所获得的干品及鲜品之间存在差异:与鲜品相比,60℃热风干制后4种皂苷的含量变化最小;阴干法干制后4种皂苷的含量差异较大,其中原薯蓣皂苷含量下降显著,薯蓣皂苷含量上升明显,伪原薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅱ含量均有所升高;晒干法干制后4种皂苷的含量与阴干法的含量变化趋势相似。结论HPLC-ELSD同时定量测定多种皂苷的方法,可用于菊叶薯蓣及其他含皂苷类药材的质量控制,60℃热风干制是保障菊叶薯蓣有效成分的最优产地干燥技术,可为菊叶薯蓣的产地加工及质量控制提供参考。

生物发酵菊叶薯蓣富集薯蓣皂苷的研究

目的通过响应面分析法优化菊叶薯蓣的发酵条件,富集菊叶薯蓣中的薯蓣皂苷。方法采用响应面分析法,设计三因素三水平实验,考察发酵时间、发酵温度、接种量对菊叶薯蓣中薯蓣皂苷含量的影响。采用HPLC-ELSD测定薯蓣皂苷的含量。结果回归模型分析表明二次回归方程能够用于菊叶薯蓣生物发酵条件的优化(R^(2)=0.9685),最佳发酵条件为发酵时间47 h、发酵温度33.4℃、接种量16.3%。结论响应面分析法能够优化菊叶薯蓣的发酵条件并实现薯蓣皂苷的富集,为菊叶薯蓣的进一步研究与利用提供参考。

基于刃天青微平板法检测金黄色葡萄球菌对天然产物的敏感性

[目的]以刃天青为检测试剂,评价大黄酸、棉子酚、盐酸小檗碱、兰雪醌、槲皮素5种天然产物对金黄色葡萄球菌的抑制作用。[方法]比较刃天青浓度、菌悬液浓度、培养基种类和反应时间对吸光值的影响,优化刃天青的工作条件。刃天青法进行药敏性实验得到五种天然产物的最低抑菌浓度(MIC),求得毒力回归方程、相关系数(R^(2))和半抑菌浓度(IC_(50))。通过Z值判断刃天青显色法适用于高通量筛选药物的可行性。[结果]当刃天青孔内终浓度为20μg/mL,培养基为LB,菌悬液浓度为5×10^(5) CFU/mL,反应时间9 h时适用于金黄色葡萄球菌的药敏性实验。刃天青显色法与微量肉汤法检测得到的五种天然产物的抑菌结果具有一致性。[结论]五种天然产物均具有一定的抑菌活性。刃天青显色法具有准确性好、灵敏度高及高通量的特点,适用于天然产物抗菌活性的筛选。

吸附-交联法固定D-泛解酸内酯水解酶的研究

选择6种吸附树脂和离子交换树脂对D-泛解酸内酯水解酶进行固定化,筛选出了固定化效果较好的大孔弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂D-380为载体,用先吸附后交联的方法固定化。通过实验对固定化条件进行了优化,得出最佳的固定化条件为:加酶量6 U/g树脂、吸附pH 7.5、吸附时间4 h、吸附温度30℃、交联剂戊二醛终浓度0.1%、交联时间2 h。实验表明在此条件下制得的固定化酶有很好的稳定性:固定化酶在连续20次的底物水解反应后,剩余酶活达到71%。当温度达到80℃时游离酶几乎失去酶活,而固定化酶剩余酶活为60%以上。游离酶的pH稳定性范围为pH 7～8,而固定化酶为pH 6.5～8.5。

转基因玉米中外源基因表达红色荧光蛋白致敏性研究

红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)作为一种标记蛋白,可以被光激发产生荧光,将荧光蛋白与目的蛋白融合,在组织或细胞中表达,借助成像技术来进行观察,就可以确定带着荧光蛋白标签的蛋白质定位在细胞内或组织内某一区域,从而更加清晰的追踪这一蛋白质的亚细胞活动规律。1999年红色荧光蛋白首次被报道,因其激发和发射波长更长,在细胞内成像时背景低,已被广泛应用于生命科学、植物育种、石油勘探等各个领域[1-4]。

简单节杆菌催化甾体化合物C_(1,2)位脱氢规律的研究

目的:研究不同基团的甾体底物在不同反应体系中的生物脱氢规律及细胞壁、细胞膜对生物转化的影响。方法:将研究底物置于4种不同的反应体系中,即采用普通直接转化、双液相转化、破碎细胞转化和原生质体转化方法,测定各甾体的熔点、比旋度、吸光系数等理化性质,并通过非线性拟合方法建立了甾体化合物C1,2位脱氢转化率与其理化性质之间变化规律的数学模型。结果和结论:保证细胞的完整性对C1,2位脱氢转化至关重要;甾体底物在普通直接转化中,脱氢转化率按由高到底排列依次是醋酸可的松、普氏脱溴物、醋酸氢化可的松、甲睾酮、睾丸素、4-雄烯二酮和可的松,RSA不转化;4种反应体系按其甾体化合物转化率高低的排序依次是普通直接转化、双液相转化、破碎细胞转化和原生质体转化(醋酸氢化可的松除外)。在同一种反应体系中,数学模型显示不同底物的熔点和吸光系数对其转化率有着正向促进作用,而比旋度对其转化率具有负向抑制作用。