K562细胞红系诱导分化过程中血红蛋白基因与过氧化氢酶基因的表达变化

目的:研究K562细胞红系诱导分化过程中,血红蛋白α(hemoglobin subunit alpha-1,HBA-1)、血红蛋白ε(hemoglobin subunit epsilon-1,HBE-1)基因与过氧化氢酶(catalase,CAT)基因表达的变化。方法:利用氯化高铁红素(Hemin)诱导K562细胞构建红系诱导分化模型。利用联苯胺染色法和CCK-8法检测不同浓度Hemin作用K562细胞不同时间后,K562细胞分化阳性率及细胞的生长抑制率,确定后续实验Hemin的作用浓度。利用反转录实时荧光定量PCR检测K562细胞红系诱导分化过程中HBA-1、HBE-1、CAT基因mRNA表达水平的改变。结果:Hemin诱导K562细胞红系分化过程中,随Hemin诱导时间延长、浓度升高,细胞分化染色阳性率及细胞生长抑制率均升高(P<0.05)。40μmol/L Hemin诱导12 h、24 h、48 h后,与未诱导组相比,HBA-1、HBE-1基因mRNA表达量随时间延长逐渐增高(P<0.05);CAT基因mRNA表达在Hemin诱导48 h时增高(P<0.05)。结论:Hemin诱导K562细胞红系分化过程中,HBA-1 mRNA先于HBE-1 mRNA表达量增加,同时CAT基因mRNA表达量随之增高,说明CAT在红系分化早期可能起重要的抗氧化作用。

DKK1-siRNA真核表达载体的构建及其对骨质疏松大鼠治疗作用的研究

目的针对DKK1基因构建两段小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,观察其对骨质疏松(OP)大鼠的治疗作用。方法12周龄Wistar雌性大鼠随机分为5组,对照组、模型组、空载体组、DKK1-siRNA1组及DKK1-siRNA2组,每组10只。对照组肌注生理盐水,其他组肌注地塞米松造模,连续12 w,鉴定骨质疏松模型是否构建成功。构建两段DKK1-siRNA真核表达载体,尾静脉注射治疗组大鼠,对照组和模型组注射等体积PBS,空载体组注射等体积空载体。骨切片观察载体是否靶向到骨,RTPCR检测股骨DKK1 mRNA的表达,免疫组化法检测股骨DKK1蛋白的表达水平。ELISA检测血清中骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的水平;测定股骨骨密度及病理结构变化。结果 (1)双酶切和基因测序鉴定结果表明siRNA真核表达载体构建成功;(2)模型组、空载体组及治疗组大鼠造模后,近端股骨骨密度较对照组明显降低(P<0.05);病理改变为骨小梁数目明显减少、断裂,而对照组骨小梁结构较完整;(3)DKK1-siRNA质粒载体靶向到骨;(4)治疗组大鼠血DKK1-mRNA及股骨DKK1蛋白的表达明显下降;(5)与模型组和空载体组相比,治疗组血清中BALP与Col-Ⅰ水平明显升高,TRAP水平明显下降(P<0.05);(6)治疗后各组大鼠近端股骨骨密度的差异无统计学意义(P>0.05);(7)治疗组大鼠股骨有新生骨小梁形成,骨小梁破坏减轻。结论 DKK1-siRNA促进骨形成,抑制骨吸收,减轻骨结构的破坏。

不同体型孕妇脂肪因子Chemerin与妊娠糖尿病糖脂代谢的研究

目的:探讨孕前不同体型孕妇的脂肪因子Chemerin及脂质代谢情况与妊娠糖尿病相关关系。方法:选取2018年10月—2019年10月在内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院产科门诊定期产检及住院待产的孕妇,参照2013年WHO诊断标准于孕24~28周诊断为妊娠糖尿病(GDM)患者60例,根据孕前体质量指数(BMI)水平分为标准组(BMI 18.5~23.9 kg/m^(2))、超重组(BMI 24~28 kg/m^(2))、肥胖组(BMI≥28 kg/m^(2)),每组20例;另外选取血糖正常、BMI为18.5~23.9 kg/m^(2)的孕妇20例作为对照组,所有入选对象均于37~40周分娩。入院后详细记录孕妇年龄、身高、孕前体重;同时分别测定各组分娩前空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、血脂(总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇)、超敏CRP(hs-CRP),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),用酶联免疫吸附法测定外周血Chemerin值。结果:GDM三组Chemerin、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、HOMA-IR、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、hs-CRP检测值均高于正常对照组;GDM超重组、GDM肥胖组Chemerin、空腹血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、HOMA-IR、hs-CRP高于GDM标准组;GDM肥胖组甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇高于GDM标准组。结论:孕前超重及肥胖体型的GDM孕妇糖脂代谢异常、炎症增加,代谢综合征风险增高。

α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响

目的观察α-胞衬(α-Fodrin)蛋白小干扰RNA(siRNA)对人涎腺导管(HSG)细胞的影响,探讨α-Fodrin siRNA治疗干燥综合征(SS)的作用。方法实验分对照组、空载体组、α-Fodrin siRNA1组及α-Fodrin siRNA2组,将成功构建的10μgα-Fodrin siRNA1和α-Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染HSG细胞,空载体组HSG细胞转染等剂量的pGFP-V-RS空载体。转染后24、48、72和96h观察细胞转染效率,实时荧光定量(RT)-PCR法检测4组HSG细胞中α-Fodrin mRNA的表达水平;细胞荧光免疫法检测4组细胞中α-Fodrin蛋白的表达水平;ELISA法检测4组细胞上清液中IFN-γ、IL-10的表达水平。结果转染后48hHSG细胞转染效率最高;转染后48hα-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组HSG细胞中α-Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组(P<0.05),且α-Fodrin siRNA2组中α-Fodrin mRNA的表达水平低于α-Fodrin siRNA1组的表达水平(P<0.05);α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL-10的水平明显升高,较对照组和空载体组差异有统计学意义(P<0.05),α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义(P>0.05);α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组细胞上清中IFN-γ的水平低于对照组和空载体组,但4组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSG细胞转染α-Fodrin siRNA载体后,α-Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降,同时细胞上清中IL-10的水平升高、IFN-γ水平下降,提示α-Fodrin siRNA可以减轻炎性反应,为SS的治疗提供实验依据。

毒蕈碱3型受体胞外区第二环多肽诱导NOD-scid小鼠体内IL-17和IFN-γ的分泌

目的:观察用毒蕈碱3型受体(M3R)胞外区第二环多肽免疫NOD-scid小鼠(nonobese diabetic mice CB17.Prkdcscid/J,非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠)后,小鼠体内IL-17和IFN-γ分泌水平的变化。方法:200μg的M3R胞外区第二环多肽和不完全弗氏佐剂(IFA)以1∶1的比例配制而成后,皮下免疫NOD-scid小鼠。免疫后1、7、14、21 d尾部采血检测血清中的抗M3R第二环多肽抗体,血清中IL-17和IFN-γ含量的变化,同时测定每星期每只小鼠的饮水量。21 d给予小鼠安乐死,取小鼠脾脏细胞与抗M3R第二环多肽共同培养,观察细胞上清中IL-17和IFN-γ含量的变化。同时取小鼠泪腺做免疫荧光观察IL-17和IFN-γ的变化。结果:用M3R胞外区第二环多肽免疫NOD-scid小鼠14 d后,小鼠体内的抗M3R第二环多肽抗体显著高于对照肽组和PBS组(P<0.05),血清中IL-17和IFN-γ含量在第14天和第7天显著升高,具有统计学意义(P<0.01)。脾细胞多肽共培养后细胞上清中的IL-17的含量维持在一定的水平,而对照肽组和PBS组则显著下降(P<0.01)。组织免疫荧光显示泪腺中的IL-17和IFN-γ的含量也显著提高。每只小鼠的饮水量3组没有显著差别(P>0.05)。结论:用M3R胞外区第二环多肽免疫NOD-scid小鼠后成功诱导出抗M3R第二环多肽抗体,并且促进了NOD-scid小鼠体内IL-17和IFN-γ的分泌。

萱藻多糖的制备及抗凝血抗血栓活性研究

目的制备萱藻多糖并对家兔体外凝血及小鼠体内血栓形成的抑制作用进行研究。方法采用热水浸提-乙醇沉淀法制备萱藻多糖;检测家兔心脏动脉血活化部分凝血酶时间(APTT),凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT)。以角叉菜胶诱导小鼠尾部血栓模型,检测萱藻多糖体内抗血栓作用。结果萱藻多糖可显著延长家兔血浆APTT、PT和TT;对角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓具有显著的抑制作用(P<0.01)。结论萱藻多糖具有抗凝和抑制实验性血栓形成的作用。